Anatomie A Fyziologie

tato studie byla provedena s předpisy a nařízení pro péči a použití laboratorních zvířat, zvířat domu a příslušného experimentu byly schváleny Centrální Zvířat Etického Výboru. 25 ženské Swiss albino myší s průměrným věkem 45days a 25 35gm hmotnosti byly vybrány náhodně z Animal house, z různých chovných kolonií. Tyto ženy bez těhotná dospělí byli záměrně extaticky o myších samců z téže odrůdy s cílem pro pořízení 10 mláďat další generace. V plastu polykarbonátu klece s nerez zálivky jeden silný a statný heterozygotní samec byly umístěny s jedinou ženu v atmosféře neustále udržována na 20-25 ° C a 55±5% vlhkost, 12hrs následně cyklus střídání světla a tmy. Samice myší byly vyšetřeny na vaginální křížovou zátku a přítomnost zástrčky well visualize byly označeny jako zjištěné těhotenství a přiřazen den nula gestační. V den 7, 8 a 9 těhotenství zapojené ženy byly zkontrolovány na těhotenství palpací břicha.

Charakteristika AgNps

nanočástic Stříbra z výzkumu kupní zdrojů byly hodnoceny pro jejich primární velikost TEM a pro jejich aglomerace v buňce střední photon cross correlation spectroscopy (PCCS) a ultrafialové–viditelné (UV-Vis) spektroskopie, Dynamického Rozptylu světla a Zeta potenciál. Byly ukázány reprezentativní tematické fotografie AgNps. Tematika PVP potažená AGNP se rozptýlila a suspendovala v 1.5m NaCl potvrdil primární velikost částic uvedenou výrobci. Nepotažené nanočástice stříbra nalezly heterogenní distribuci v rozmezí 50 až 100 nm, většina z nich byla kolem 71 nm.

V případě suspendovaných prášek AgNps, TEM snímky ukázaly, že ve vodném prostředí shlukování nanočástic stříbra a tvoří velké agregáty, z nichž mnohé jsou větší než 50nm. Tento výsledek je v souladu s výsledky hydrodynamické distribuce velikosti, která byla získána metodou dynamického rozptylu světla (zeta sizer). Analýzy EDX potvrdily, že v koloidních i suchých práškových AGNP bylo prezentováno pouze elementární stříbro. Podle ICP-AES výsledky, koncentrace Ag iontů v kyselině stravitelné zásoby koloidní a suspendované prášek AgNps byly 1908.1 a 447.2 mgl-1, resp. Také výsledky XRD vzoru potvrzují krystalinitu AGNP práškového typu a přítomnost elementárního krystalického stříbra, také jiné fáze, kromě kovového stříbra, nebyly ve vzorku přítomny. Kromě toho výsledky XRF ukázaly, že čistota práškového typu AgNps byla 97,86%.

Expozice AgNps koloidní roztok přes opakované perorální gavages

myším byly podávány dvakrát s normální fyziologický roztok (Sham control) jako vozidlo, a v dávce 5, 10, 15, 20 mg/kg b.w. dostali přes opakované perorální gavages, od 7 do 12 gestační den s pomocí tupou špičkou zakřivenou hřídel krmení jehly a van připojen. Falešná kontrolní zvířata jsou zahrnuta do experimentu s léčenými zvířaty a neošetřenými zvířaty.

Disekce a vykolení

Na GD 18, pravé a levé rohy dělohy těhotné matky byly exteriorized následující ventrální laparotomii v hlubokém etheru/chloroform anestezii a 250 čerstvé shromažďují přehrady přes pitva se promyjí vodou na Petriho misce k odstranění krve a plodové vody a vysušeny pomocí filtračního papíru a dehydrovaný v 95% alkoholu po dobu 48 hodin v posledních vystaven 1% KOH pro důslednost, vykolení a Alizarinové barvení protokol pro správnou vizualizaci kosti buď normální, nebo abnormální.13

Metoda (Hodnocení kosterních dysmorphology tím, technika vykuchání a Alizarinové barvení)-:

Kosterní dysmorphology studie byla provedena technika vykuchání a Alizarinové barvení. Všechny vzorky (50 mláďat) z každé skupiny byly dehydratované, v 95% alkoholu ( rektifikovaného ducha) po dobu 48 hodin a pak se odstraní a promyje tekoucí vodou a potom se sníží o 1% roztoku KOH (KOH 1gm+100ml d.w.). Po provedení ventrální laparotomie jsou odstraněny životně důležité orgány. Vzorky byly důkladně namočený v dostatečném 1% hydroxidu draselného (KOH) řešení pro minimálně 2 až 4 dny, dokud se maso, šlachy, svaly a vnitřnosti byly transparentní & jasné a rozpustit následuje křišťálově čistou viditelnost kostí a chrupavek. Každý den řešení bylo změněno, když se stal odbarvené a odpady.

křišťálově čisté kosti a chrupavky viditelné vzorku pak byly umístěny do stejné 1% KOH a pak 6 až 8 kapek 1% Alizarinové skvrna byla přidána barva je hluboce purpurově červená. Roztok byl několikrát za hodinu jemně protřepán. Pak stejný postup pokračoval další 2-3dny, aby se kosti a chrupavky dostaly do hluboké purpurově červené barvy. Pro odstranění veškerých přes barvení a vyhlazovací vzorků, stejné jsou pak prošel přes 40%, 80% (40 ml glycerolu+60 ml destilované vody, 80 ml glycerolu+20 ml destilované vody) a 1-2 crystal thymol přidány pro dlouhodobé zachování konečně udržován v 100% glycerol, sloužil pro fotografii & výkonný ruční objektiv pozorování.

celkem 250 plody byly sbírány z 25 matek z 1, 2, 3, 4 a 5 skupin, z nichž všechny vzorky byly vystaveny kosterní dysmorphology experimentování. 60 plodů bylo pozorováno resorpci.

Statistiky

Procento kosterní malformace byly hodnoceny z každé skupiny a hodnoceny podle počtu kostí zapojených v dysmorphology a konečně procentuální hodnoty byly porovnány mezi skupinou a v rámci skupiny pro závislé na dávce teratogenní faktor. Multi ANOVA a Popisná statistika (post hoc analýza) test použitý pro tento účel.

Pozorování a zjištění

procento kosterního dysmorphology byl nalezen vyšší a nejvyšší v 15mg AgNps a 20 mg AgNps/ kg b.w. léčená skupina mláďat (Tabulka 1).

nižší dávky AgNps léčených skupin (0.5 & 1mg/kg b.w.) byly pozorovány velmi minimální procenta kosterních anomálií, takže tyto léčené skupiny byly téměř považovány za plody kontrolní skupiny (Obrázek 1).

Obrázek 1 kontrolní plod alizarin skvrna dorzální pohled (A) a boční pohled (B).

Jeden z 5mg AgNps/ kg b.w. léčená skupina pup prokázána unossified 5. hrudní segment z hrudní bar a unossified Manumbrium segmentu, který je diagnostikován jako hrudní rozštěp. Dalších plodů prokázala, maxilární a mandibulární hypoplazie, unossified čelní, temenní a nosní kosti, selhání fúze zadního segmentu kyčelní kosti, 10,11 a 12. žebro viděl rudimentární levé straně jednoho plodu. Absence střední hřídel 6 až 12. žebro spolu s nárůstem prostoru mezi po sobě jdoucími žebra byly označeny ve více plodů z různých skupin a diagnostikováni jako zvýšená webový prostor, Absence těla & trnový proces je vidět z celé hrudní páteře segmenty, které je diagnostikována jako defekt neurální trubice blízko typu v 1% případů z této skupiny léčených plodů. Procento skeletální dysmorfologie vypočtené v této skupině bylo 32% (Obrázek 2).

Obrázek 2 5 mg AgNps léčené skupině plod Alizarinové skvrna dorzální pohled (a) a (B), boční pohled (C) ventrální pohled (D) a dorzální pohled(E)

10 mg AgNps léčené skupině plodů prokázala, kosterní dysmorphology v podobě absence bederní a křížové obratle, absence kyčelní kosti, silně degenerované žebra bez chrupavky, čelní a temenní kosti ukázal unossified a nevyvinuté, skolióza je pozorován v hrudní a bederní oblasti v jednom plodu, nepřítomnost krční obratel je vidět, maxilární hypoplazii, zveřejňování sagitální a koronální stehy jsou také vidět. Nevyvinuté kosti dolních končetin jsou vidět na obou stranách jednoho plodu. Procento skeletální dysmorfologie vypočtené v této skupině bylo 44% (obrázek 3).

obrázek 3 10 mg AgNps léčené skupiny plod alizarin skvrna dorzální pohled (A, B).

Mezi 15 mg AgNps léčené skupině 8 mláďat byla pozorována absence krční obratle s absencí 12. žebra a zbytek obratle byly pozorovány nezastavěné trnový proces, Metatarzu rozštěp je vidět i na hřbetní pohled z úpatí jednoho plodu, unossified kyčelní kosti na ventrální pohled s absenci segmentu & fibróza je také vidět, unossified spánkové kosti, který se nachází fibrosed na laterální pohled na lebku, absenci proximální segment inominátní kosti, páteř anomálie byl viděn s rudimentární 6. a 9. žebro a nepřítomnosti 10., 11. a 12. je pozorována žebra v jednom plodu, unossified lebeční kosti byl také viděn, Anencefalie s skolióza páteře byl viděn v L1-L5 v jednom plodu, unossified kyčelní kosti bylo vidět, unossified lopatek z obou stran bylo vidět na dorzální pohled jednoho plodu, Nepřítomnost chrupavky bylo vidět od 6. do 12. žebro v jednom plodu. Procento skeletální dysmorfologie vypočtené v této skupině bylo 60% (obrázek 4).

Obrázek 4 15 mg AgNps léčené skupině plod Alizarinové skvrna, hřbetní zobrazení (A, B) a ventrální pohled (C)

Na 20 mg/ kg b.w. Plody skupiny léčené AgNps byly vykazovány nejvyšší procento skeletální dysmorfologie (76%). Skolióza byla vidět v bederní oblasti v jednom plodu, jeden plod prokázán unossified týlní kosti, unossified lopatek a kyčelní kosti, velký fibróza je pozorován v horní čelisti, čelní a temenní kosti, stejné je také pozorován v druhém až šestém segmentu hrudní kosti., rozštěp je pozorován v kotníku, větší prostor je pozorován mezi 1. a 2. žebro a 5. až 8. žebra na levé straně jednoho plodu, také rozštěp je pozorován v symphisis pubis společného jednoho plodu , unossified mandibulární hypoplazie, absence trnový proces s vlnitými žebry je také pozorován, v jednom plodu jsme pozorovali úplné fúze 2. až 8. krčním obratli, který je jasně odlišeno od zbytku 1. krční obratel. Pozorovali jsme také mírnou skoliózu a neosifikovanou okcipitální a parietální kost a nepřítomnost lopatek na pravé straně jednoho plodu, je také vidět hypo plastické obratle (obrázek 5).

figura 5 20 mg AgNps léčené skupiny plod alizarin skvrna dorzální pohled.