Cytokeratinu 5/6 a cytokeratinu 8/18 výraz v triple negativních karcinomů prsu: clinicopathologic význam v Jiho-Asijské populace

Metody

Celkem 150 případů TNBC, byly vybrány z evidence patologie oddělení archivu. Chirurgické vzorky zahrnovaly modifikované radikální mastektomie, jednoduché mastektomie a široké lokální excize s disekcí sentinelových lymfatických uzlin. Všichni pacienti podstoupili operace na H Národní nemocnice v Karáčí od ledna 2008 do prosince 2013 po dobu 6 let. Studie byla schválena výborem pro výzkum a etický přezkum instituce a informovaný souhlas byl převzat od všech pacientů v době operace. Hematoxylin a eosin obarvené diapozitivy a parafínové bloky případů byly načteny a v případě potřeby byly vyříznuty nové sekce. Snímky všech případech byly přezkoumány dva starší histopathologists a patologické vlastnosti, jako je histologický typ nádoru, grade, T-stadium, N-stadium, lymphovascular invaze, nekróza, fibróza, lymfocytární infiltrace (tumor infiltrující lymfocyty), přítomnost insitu součásti, pagetoid šíření a dermální lymfatické invaze byla hodnocena. Klinické záznamy všech pacientů byly také přezkoumány z institucionální záznamy zhodnotit věk pacienta, historii radiace a chemoterapie a obnovení stavu. Kromě toho byly vybrány reprezentativní bloky každého případu a byla provedena imunohistochemie ER, PR a Her2neu, aby se znovu potvrdil trojitý negativní stav.

ER, PR, Her2neu a Ki67 IHC byly provedeny za použití DAKO protilátek jako pod, S EnVision™ FLEX, DAKO kit s vysokým pH podle protokolu výrobce.

1. FLEX monoklonální králičí Anti-lidský estrogenový receptor alfa, klon EP1.

2. FLEX monoklonální myší anti-lidský progesteronový receptor klon PgR 636.

3. polyklonální králičí anti-lidský C-erbB-2 onkoprotein.

4. FLEX monoklonální myší antigenní klon proti lidskému Ki67 MIB-1.

jaderné barvení ER a PR u > 1% rakovinných buněk bylo považováno za pozitivní. Pro her2neu byly případy hodnoceny 1+, 2+ a 3+ podle pokynů CAP. Pro nejednoznačné případy (2+) byla FISH provedena pomocí sondy Path Vysion Her2neu podle protokolů výrobce. Výsledky byly vyjádřeny jako poměr signálů her2neu ve srovnání se signály CEP17 podle pokynů ASCO/CAP.

Ki67 imunostaining byl zaznamenán jako kontinuální proměnné založené na podílu pozitivních obarvených nádorových buněk. Dále na základě indexu Ki67 byly případy rozděleny do < 15, 16-24, 25-44 a > 44% kategorií indexu ki67.

CK5 / 6 IHC byl proveden pomocí FLEX monoklonální myší antihumánní Cytokeratin 5/6, klon D5 / 16 B4 metodou DAKO envision podle protokolu výrobce. Střední až silné cytoplazmatické a membránové barvení ve více než 10% buňkách bylo považováno za pozitivní. Slabé až střední barvení v < 10% bylo považováno za fokální pozitivní, zatímco žádné barvení nebylo považováno za negativní (další soubor 1: obrázek S1).

CK 8/8 IHC byl proveden za použití monoklonálního myšího Antihumánního Cytokeratinu 5/6, klonu D5 / 16 B4, podle metody DAKO envision. Střední až silné cytoplazmatické a membránové barvení ve více než 50% buňkách bylo považováno za pozitivní. Slabé až středně pokročilé barvení (cytoplazmatické, se ztrátou membránové reaktivita) v 10-50% byl brán jako fokální pozitivní, zatímco žádné barvení nebo slabé barvení v < 10% byla považována za negativní (Další soubor 1: Obrázek S1).

stav recidivy a následné sledování byly hodnoceny přezkoumáním nemocničního lékařského záznamu. Celkové přežití bylo přijato jako čas z chirurgické vyříznutí až do smrti nebo poslední vyšetření a onemocnění přežití bez progrese byla definována jako čas mezi chirurgické excize a lokální recidivy nebo vzdálených metastáz, smrt nebo poslední follow-up.

statistický balíček pro sociální vědy (SPSS 21) byl použit pro kompilaci a analýzu dat. Pro kvantitativní proměnné byla vypočtena střední a směrodatná odchylka. Frekvence a procento byly vypočteny pro kvalitativní proměnné. Chi square byl použit k určení asociace. Student t test nebo Mann whitney test byly použity k porovnání rozdílu v prostředcích mezi skupinami. Hodnota p ≤ 0,05 jako významná. Křivky přežití byly vyneseny pomocí Kaplan-Meierovy metody a význam rozdílu mezi křivkami přežití byl stanoven pomocí poměru log-rank. P-hodnota ≤ 0.05 byl považován za významný.

výsledky

průměrný věk pacientů zapojených do studie byl 48,9 let a nejčastější věková skupina byla 31-50 let. Většina pacientů byla prezentována ve stadiu T2 s vysokým průměrným indexem ki67, tj. 42,7% případů mělo uzlové metastázy. Ačkoli 84% případů bylo konvenčního invazivního duktálního karcinomu, NST; významná část případů však byla metaplastické histologie (9, 3%). Většina případů byla vysokého stupně (86,7% stupně III). Většina nádorů vykazuje lymfocytární infiltraci a nekrózu. Většina nádorů postrádá insitu složku (61%). Lokální recidiva nebo pozdní vzdálené metastázy byly zaznamenány v 17,8% případů (Tabulka 1).

Pozitivní (> 10%) CK5/6 vyjádření byl zaznamenán v 8% (12 případů) TNBC, zatímco o 2,4% (4 případy), ukázala, ohnisková pozitivní (< 10%) a 89,3% (134) byly negativní s CK5/6. Úplná ztráta CK8/18 vyjádření byl viděn v 4,7% (7 případů), zatímco 32.7% (49 případů), bylo zjištěno fokální ztráta CK8/18 a 62.7% (94 případů) ukázal, neporušené normální výraz CK8/18. Žádné významné asociace CK5/6 a CK8/18 s různými clinicopathological parametrů byl pozorován (Tabulky 2 a 3). Podobně nebyla zaznamenána žádná významná souvislost CK 5/6 a CK8/18 se stavem recidivy pacientů (Další soubor 2: Obrázek S2).

Diskuse

V této studii jsme zhodnotili výraz bazální (CK5/6) a jeden luminální marker (CK8/18) v TNBC v naší populaci, a zjistil, že; 8 a 2,7% TNBC ukázal pozitivní a ohniskové pozitivní exprese CK5/6 a 4, 7 a 32.7% TNBC odhalilo úplnou ztrátu a fokální ztrátu exprese CK 8/18. Ve všech případech, kdy byla zaznamenána fokální ztráta CK8 / 18, došlo ke ztrátě reaktivity membrány, zatímco cytoplazmatické barvení bylo zachováno v několika buňkách. Nebyla však pozorována žádná významná souvislost mezi těmito abnormálními expresními vzory cytokeratinů s různými klinickopatologickými a prognostickými parametry TNBC v naší populaci. Rakovina prsu je jednou z nejčastějších malignit v jihoasijské populaci, zejména v mladém věku .

profilování Genové exprese definuje bazální rakoviny prsu, jako ty, vystavovat bazální shluky genů, které patří EGFR, bazální cytokeratinu 5/6, C–kit, šíření clusteru a nízká exprese Her2neu a hormonální receptor související geny . Bazální karcinom prsu však není jedinou entitou a zahrnuje několik podtypů včetně dvou bazálních podtypů (BL1 a BL2), mezenchymálních, mezenchymálních kmenových, imunomodulačních a luminálních androgenních podtypů. Kromě toho byly také definovány podtypy bohaté na interferon a claudin-low . Subtypování bazálních karcinomů prsu se nedoporučuje ASCO / CAP. Exprese CK 5/6 se v TNBC pohybuje od 24 do 72%, jak bylo uvedeno v předchozích studiích . Jiní vědci také navrhli prognostický význam CK 5/6 u negativních karcinomů prsu . Nielson a kol. navrhl, že CK5/6 pozitivní rakovina prsu má horší prognózu nezávislou na stupni nádoru, t-stadiu a hormonálním / Her2neu stavu . Podobně v jiné studii bylo navrženo, že CK5/6 je markerem kratšího přežití bez onemocnění, nezávisle na jiných prognostických faktorech rakoviny prsu . Inanc et al. hlášeno 50.5% exprese CK5/6 s pozitivní korelací CK5/6 TNBC s nodálními metastázami a velikostí nádoru . Nicméně, na rozdíl od těchto studií jsme zjistili, nízká exprese CK5/6 výraz v TNBC v naší studované populace, které mohou představovat různé genomické profil TNBC v naší populaci, které je třeba prověřit v dalších studiích. Prognostická role CK5 / 6 byla navržena u jiných rakovin těla .

CK8/18 je luminální cytokeratinu především vyjádřené v prsu epitelu v membranózní a cytoplazmatické vzor. Cimpean et al. definovány tyto různé vzory CK8/18 v prsu; difúzní cytoplazmatické, membranózní a v kombinaci cytoplazmatických a membránových .Někteří vědci navrhli, že ztráta exprese CK8/18/nízká CK8 / 18 je spojena s horší prognózou a vysokým rizikem metastáz . Nezjistili jsme však žádný prognostický význam ztráty exprese CK8 / 18 s různými prognostickými faktory a recidivou v TNBC.

zjistili jsme, že 32,7% TNBC vykazuje fokální ztrátu exprese CK8/18. Ve všech těchto případech byla ztráta membranózní reaktivita CK8/18, zatímco cytoplazmatické barvení byl zachován v několika buněk. Aiad et al. ve studii zahrnující 70 případů rakoviny prsu, našli abnormální exprese CK8/18 (cytoplazmatické) v 70% Egyptské prsu, které naznačují, hodně heterogenity v cytokeratinu výraz prsu v různých částech světa .