Klastogenní aktivita 2-chlorodeoxyadenosin v savčích somatických buňkách
MUTAGENEZE
VÝZKUM ČLÁNKU
Klastogenní aktivita 2-chlorodeoxyadenosin v savčích somatických buňkách
Gilmara Ausech AntonucciI; Catherine On TakahashiI; II
Iuniversity São Paulo, Ff de Medicina de Ribeirão Preto, Departamento de Genética, Ribeirão Preto, SP, Brazílie.
IIUniversidade of São Paulo, Filozofická fakulta, vědy a dopisy Ribeirão Preto, Katedra biologie, Ribeirão Preto, SP, Brazílie.
Korespondence
ABSTRAKT
základní analogový 2-chlorodeoxyadenosin (2-CdA), používané pro terapii chronické rezistentní, a pokročilé lymfoproliferativní poruchy, je cytotoxický pro obě dělící a nedělící se lymfocyty. Tato práce hodnotila klastogenní potenciál tohoto léčiva in vitro v lidských lymfocytech v kultuře a in vivo v buňkách kostní dřeně myší BALB/c. U lidských lymfocytů byl klastogenní účinek 2-CdA studován ve fázích G1, S a G2 buněčného cyklu za použití tří různých koncentrací (10, 20 a 40 mg / mL). Koncové body analyzovány zahrnuty mitotický index (MI), proliferační index (PI), výměna sesterských chromatid (SCE), a chromozomální aberace (CA). Statistická analýza testem rozptylu (ANOVA) ukázala významný nárůst (p < 0.05) v CA frekvencích pro buňky ošetřené během fáze S, ale MI se nezměnil. Koncentrace testovaných nepřinesla významné zvýšení střední frekvence Sce, ani se změnit mobilní PI v G1 a S fáze. Testované koncentrace in vivo byly 0, 25, 0, 375 a 0, 5 mg / kg živé hmotnosti. V tomto testu nebyly při testovaných hladinách dávek pozorovány změny CA frekvencí a IM. Výsledky proto naznačují klastogenní účinek 2-CdA v kulturách lidských lymfocytů.
klíčová slova: lidské lymfocyty, 2-CdA, chromozomální aberace, sce, buněčný cyklus.
Úvod
purinové analogy jsou vysoce účinné při léčbě lymfoproliferativních poruch (Pott-Hoeck a Hiddemann, 1995). Kladribin, 2-chlorodeoxyadenosin (2-CdA), je nukleosidový analog s halogenovými atom nahrazuje na pozici 2 v jeho purinových kroužek, který zajišťuje rezistenci vůči deaminace tím, adenosin deaminázy (ADA). 2-CdA je lékem volby při léčbě leukémie vlasatých buněk, ale je také vysoce účinný u jiných lymfoidních malignit nízkého stupně, včetně chronické lymfocytární leukémie (CLL). Zprávy v literatuře ukázaly, že 2-CdA dává podobné kompletní odpověď (CR), rychlost a celková odpověď (NEBO) frekvence na fludarabin, ale vliv obou činitelů na přežití u pacientů s CLL je stále nejistý. Míra CR indukovaná 2-CdA je významně vyšší než u pacientů léčených konvenční chemoterapií (Robak, 2001). 2-CdA je další nový chemoterapeutický purinový Analog se specifickou toxicitou pro lymfocyty (Schrimer et al., 1997). Cytotoxicita vyskytuje v proliferujících a klidový buněk, což vede k události, jako je inhibice DNA a syntézu bílkovin, stejně jako indukce apoptózy (Robertsson et al., 1993). Navzdory toxicitě byly získány dobré výsledky v terapeutické odpovědi a tento lék je hlavní možností léčby trikoleukémie, kde pacienti vykazují leukémii vlasatých buněk (HCL) (Tallman et al ., 1992; Tallman et al., 1993).
adenin deoxynukleosidy indukují apoptózu v klidových lymfocytech a jsou užitečnými léky pro léčbu indolentních lymfoproliferativních onemocnění. Některé mechanismy byly navrženy k vysvětlení toxicity deoxyadenosin a jeho analogů v klidovém buněk, včetně přímé vazby dATP do pro-apoptotických faktor Apaf-1 a aktivaci kaspázy-9 a -3 drah (Genini et al., 2000).
pacienta s akutní myeloidní leukémií léčených 2-CdA a Ara-C představila zpoždění obnova dřeně, zánět vedlejších nosních dutin, a Candida tropicalis sepse. Vyvinula multisystémové selhání orgánů a zemřela 1 měsíc po zahájení léčby AML. Postmortální vyšetření, omezené na hrudník a břicho, odhalilo diseminovanou kandidózu zahrnující plíce, srdce, játra, ledviny a slezinu (Mathew et al., 2000).
Zwaan et al. (2002) pozorovali, že u pacientů s t(9:11) se zdá být výrazně citlivější než ostatní AML pacientů na tyto léky: cytarabin (medián: 2,9-krát), doxorubicin (4.5-krát), mitoxantron (8.0-krát), 2-chlorodeoxyadenosin (10.0-krát).
Nukleosidovými analogy (NA), jako jsou cytosinarabinosid, fludarabin, kladribin a gemcitabinem, jsou nezbytné součásti AML (Akutní Myeloidní Leukémie) indukční terapie; oni jsou také účinné k léčbě lymfoproliferativních poruch a byly použity v léčbě některých solidních nádorů. Tyto důležité sloučeniny sdílejí některé společné vlastnosti, a to z hlediska vyžadování transportu specifickými membránovými transportéry a metabolismu a interakce s intracelulárními cíli. Liší se však s ohledem na typy Transportérů a jejich preferenční interakci s určitými cíli, které mohou vysvětlit účinnost proti rychlým proliferujícím nádorům (Galmarini et al., 2001).
vzhledem k těmto informacím je důležité posoudit klastogenní potenciál 2-CdA na základě zpráv, že tento lék indukuje cytotoxicitu (Tallman et al., 1992; Tallman et al., 1993) a DNA single-strand breaks (Liliemark a Juliusson, 1994). Účelem této studie bylo vyhodnotit kapacitu tohoto chemoterapeutického činidla při indukci poškození chromozomů v lidských lymfocytech a buňkách kostní dřeně myší BALB/c.
Materiály a Metody
Chemické činidlo
stimulace, protinádorové 2-chlorodeoxyadenosin laskavě poskytl Chemoterapie Městě Hospital de Clínicas z Ribeirão Preto School of Medicine (Ff de Medicina de Ribeirão Preto – USP) pro in vitro a in vivo experimentů.
Lidských lymfocytech z periferní krve
vzorky Krve byly získány od šesti nekuřácký pokoj zdravých dobrovolníků (tři ženy a tři muži), ve věku od 25 do 35 let a předložena na léčbu během G1, S a G2 fáze buněčného cyklu, pro analýzu chromozomových abnormalit (CA) a mitotický index (MI). Kromě toho byly lymfocyty od tří jedinců (dvě ženy a dva muži) použity pro analýzu sesterské výměny chromatidů (SCE) a indexu proliferace (PI). Lymfocyty byly pěstovány v 78% RPMI-1640 médiu (Sigma Chemical Co., St. Louis, USA) doplněno o 20% fetální telecí sérum (Cultilab, Brazílie) a přidáno penicilinem (5 mg/mL) a streptomycinem (10 mg/mL). Buňky byly stimulovány 2% fytohemaglutininem (Life Technologies, Grand Island, NY). Na každých 5 mL kultivačního média bylo přidáno 1 mL plazmy a kultury byly inkubovány při 37 °C po dobu 52 hodin pro analýzu CA. Roztoky 2-CdA byly zředěny v deionizované vodě v následujících koncentracích: 10, 20 a 40 mg/mL kultivačního média, Podle Prestona et al. (1987). Negativní kontrola byla zahrnuta do všech experimentů. Příprava a barvení snímků byly prováděny standardními technikami (Moorhead et al., 1960). Skluzavky pro analýzu výměna sesterských chromatid (SCE) a proliferační index (PI) byly získány z paralelních kultur, které 5-Bromo-2′-deoxyuridine (Sigma Chemical Co., St. Louis, USA; 10 mg / mL) byl přidán navíc k 2-CdA. Diferenciální sister-chromatid barvení byla získaná fluorescence plus Giemsa technika, pomocí Hoechst 33258 (Calbiochem – Behring Corp.; 0,05 mg/mL hankova roztoku) a 5% Giemsa (Merck). Tato metoda je modifikací těch, které publikovali Korenberg and Freedlender (1974) a Perry and Wolff (1974). Snímky byly přes noc vystaveny bílému světlu. Metafázové přípravky se 46 ± 1 chromozomy byly analyzovány slepým testem. Chromozomy byly nakresleny schematicky pro bodování SCE, stejně jako pro analýzu CA.
protokoly Léčby
2-CdA léčbě lymfocytární kultury v různých fázích buněčného cyklu
Chromozomální aberace (CAs)
Po sedm hodin zahájení kultury (G1 fáze), lymfocytární kultury byly ošetřeny 2-CdA dobu 1 h při 37 °C v kultivačním médiu bez séra. Buňky byly fixovány 52 hodin po zahájení kultury. Po léčbě 2-CdA byly buňky dvakrát promyty v médiu bez séra a reinkubovány v úplném médiu. Pro léčbu ve fázi S bylo 24 h-kultur ošetřeno 2-CdA po dobu 6 hodin. Buňky byly dvakrát promyty v médiu bez séra, reinkubovány v úplném médiu a fixovány po 52 hodinách inkubace. Pro léčbu G2fázou bylo 69 h-kultur ošetřeno 2-CdA po dobu 3 hodin a buňky byly fixovány po 72 hodinách inkubace. Kolchicin (Merck 0, 016%) byl přidán 1, 5 hodiny před fixací. Určovat MI, 1000 buněk byly hodnoceny za kulturu, a 100 metafází z každé kultury byly analyzovány pro CA, v celkové výši 6000 buněk a 600 metafází, respektive pro každé ošetření.
výměna sesterských chromatid (Sce)
Lymfocytární kultury od 4 zdravých dárců (dvě samice a dva samci) byli léčeni 5-BrdU (10 µg/mL) na počátku inkubace, a když buňky dosáhly G1 fáze (7 h po zahájení kultura), 2-CdA plus 5-BrdU byla přidána po dobu 1 h při 37 °C v kultivačním médiu bez séra. Po ošetření byly buňky dvakrát promyty v médiu bez séra, znovu se přidalo 5-BrdU a poté byly buňky reinkubovány v úplném médiu. Pro léčbu v S-fázi, 24 h-kultur byly ošetřeny 2-CdA plus 5-BrdU v séru-volné medium pro 6 h. Po ošetření byly buňky promyty dvakrát v séru-zdarma střední a reincubated v kompletním médiu s 5-BrdU. Pro analýzu SCE a PI byly buňky (fáze G1 a s) fixovány 72 hodin po zahájení kultury. Padesát z druhé divize metafází na kulturu, byl zaznamenán pro SCE, a sto metafází z každé kultury byly nastřílel za první, druhé a třetí dělení buněk, v celkové výši 200 metafází a 400 buněk na léčbu, resp. PI byla získána pomocí následující rovnice:
PI =
kde M1 a M3 jsou čísla první a třetí divize metafází, respektive (Degrassi et al., 1989).
Zvířata
použitými zvířaty byly myši BALB/c (Mus musculus) získané ze zvířecího domu Lékařské fakulty Ribeirão Preto.
In vivo test na Balb/c myších buněk kostní dřeně
Myši váží přibližně 30 g (5-6 týdnů) byly rozděleny do skupin po 8 zvířat (4 samci a 4 samice) a léčeny intraperitoneální injekcí s 0.5 mL / konečný objem roztoku 2-CdA zředěného destilovanou vodou v následujících koncentracích: 0,25, 0,375 a 0,5 mg / kg živé hmotnosti. Dvě hodiny před obětováním) byly myším injikovány 0, 3 mL / konečný objem 1% roztoku kolchicinu (Sigma)a usmrceny inhalací etheru o 2 hodiny později. Negativní kontrolní skupina obdržela destilované vody, 0,5 mL /konečný objem/zvíře, a pozitivní kontrolní skupina obdržela cyklofosfamid (CP), 25 mg/kg tělesné hm. Přípravky kostní dřeně pro metafázové buňky byly získány standardní technikou (Ford a Hamerton, 1956). Snímky byly analyzovány slepým testem a schematicky bylo nakresleno 100 metafáz na zvíře. MI byl získán počítáním počtu mitotických buněk v 1000 analyzovaných buňkách na zvíře a 100 buněk bylo hodnoceno pro CA.
Statistické analýzy
jednosměrná analýza rozptylu (ANOVA) byla provedena na počet abnormální mitózy a celkovém počtu CA, MI, Sce, a PI, s výpočty P-hodnoty pro každou fázi buněčného cyklu. Kdykoli p < 0.05 bylo zjištěno, že průměrné hodnoty každé léčby byly porovnány studentským-Newmanovým Keulsovým testem. Statistická analýza byla provedena pomocí softwarových balíčků Sigma Stat (Jandel Corporation).
Výsledky
Lidské lymfocyty
lymfocytů Periferní krve byli léčeni různých koncentracích (10, 20 a 40 mg/mL) 2-CdA v G1, S a G2 fáze buněčného cyklu. Chromozomální aberace (CA) a mitotický index (MI) byly analyzovány v léčených lymfocytech od šesti zdravých jedinců (tři ženy a tři muži) (Tabulka 1). U buněk léčených během fáze S bylo pozorováno významné zvýšení CA frekvencí (p < 0,05) ve všech koncentracích ve srovnání s kontrolními frekvencemi. Nejčastějšími typy chromozomálních aberací byly pozorované chromatid a isochromatid mezery (údaje nejsou uvedeny) a přestávky, následuje dvojité minut, dvojité fragmenty, a jednotlivé fragmenty. U buněk léčených během fází G1 a G2 frekvence CA nevykazovaly žádný statisticky významný rozdíl mezi ošetřenými kulturami a kontrolními hodnotami. I když tam bylo mírné variace na MI, statisticky významný rozdíl (p < 0.05) nebyla pozorována v obou procedury v souvislosti s kontrolou indexů.
střední frekvence výměna sesterských chromatid (SCE) a proliferační index (PI) byl stanoven ve čtyřech kontroly a v lymfocytární kultury léčených 2-CdA během G1 a S fází kultur sklizená po 72 h (Tabulka 2). Testované koncentrace (10, 20 a 40 mg/mL) nezpůsobily žádné významné zvýšení průměrné frekvence sce ani nezměnily PI buňky během fází G1 a S (Tabulka 2).
Balb/c myší kostní dřeně systému
CA a MI frekvencí byly analyzovány v buňkách kostní dřeně od 8 Balb/c myší (4 ženy a 4 muži) po intraperitoneální léčby 0,25, 0.37 a 0,50 mg/kg b.w. 2-CdA (Tabulka 3). V in vivo testu nevykazoval 2-CdA cytotoxické účinky u žádné z testovaných dávek, pokud jde o CA frekvence a hodnoty im, když byly porovnávány všechny léčebné skupiny. Většina aberací byly zlomy chromatidového typu. U analyzovaných parametrů nebyl zjištěn žádný významný rozdíl (p < 0,05) ani mezi zvířaty, ani mezi muži a ženami.
diskuse
v posledních několika letech několik studií prokázalo antiproliferativní účinek léčiv používaných při léčbě lymfoidních malignit. 2-CdA je základní Analog používaný v chemoterapii pro určitý druh leukémie, leukémie vlasatých buněk. Tam je také některé údaje prokazující, že 2-CdA může být použit v kombinaci s jinými léky, v léčbě refrakterní a recidivující low-grade non-Hodgkinův lymfom (NHL) (Laurencet et al., 1999; Robak a kol., 1999). V této práci byla provedena cytogenetická studie in vitro s cílem vyhodnotit klastogenní potenciál 2-CdA v lidských lymfocytech, pokud jde o indukci CA a SCE. Podle Moore and Bender (1993) může strukturální CAs vést ke ztrátě chromozomálního materiálu. Druh vytvořené CA závisí na povaze léze indukované v DNA a fázi buněčného cyklu, během které byly buňky vystaveny (Natarajan et al ., 1996).
lymfocytární kultury byly léčeny třemi koncentracemi 2-CdA (10, 20 a 40 mg/mL) během různých fází buněčného cyklu. Klastogenní účinek léčiva byl prokázán významným zvýšením (p < 0,05) frekvencí CA pro všechny koncentrace testované během fáze s buněčného cyklu. Pro léčbu během této fáze byl 2-CdA ponechán v kulturách po dobu 6 hodin. U látek působících během specifické fáze buněčného cyklu může sekvence podávání určit účinnost a toxicitu kombinované terapie (Smorenburg et al ., 2001).
tyto výsledky jsou v souladu s výsledky uváděnými jinými autory (Carson et al., 1983), což naznačuje, že 2-CdA je začleněna do DNA produkující jednovláknové zlomy (SSB). SSB mohou vznikat jak přímo, z rozpadu poškozených cukrů, nebo nepřímo, enzymatickým štěpením fosfodiesterové páteře. Přímé SSB vznikají primárně z útoku volnými radikály, jako jsou reaktivní druhy kyslíku, zatímco nepřímé SSB jsou hlavně normální meziprodukty opravy excize DNA báze (BER). SSBs jsou také nejčastější léze vyvolané exogenní genotoxins, jako je ionizující záření, alkylační činidla, a topo1 jed camptothecin a jeho protinádorové deriváty (Caldecott, 2004).
některé zprávy ukazují, že základní analog potřebuje delší dobu, aby došlo k fosforylaci (Gandhi et al., 1997). Tento mechanismus může vysvětlit zvýšenou frekvenci celkových chromozomálních aberací během fáze s buněčného cyklu. Stejný mechanismus se vyskytuje v buňkách léčených mitomycin C, S-závislá sloučenina, která vyžaduje replikace DNA převést poškození DNA do chromozomální aberace (Evans a Scott, 1964; Traganos et al., 1980). Jiné protinádorové látky představují stejný mechanismus a účinek 2-CdA, jako je fludarabin a 1-b-D-arabinosylcitosin (ara-C).
cytotoxické nukleosidové analogy mají široké klinické použití. Byli mezi prvními chemoterapeutickými látkami používanými při léčbě maligních onemocnění. Protinádorové nukleosidy zahrnují analogy fyziologického pyrimidinu a purinových nukleosidů. Tato činidla působí jako antimetabolity, které soutěží s přírodními nukleosidy během syntézy DNA nebo RNA a jako inhibitory enzymů klíčových buněk (Szafraniec et al ., 2004), jsou specifické pro S a musí být fosforylovány, aby se aktivovaly trifosfáty (Plunkett et al ., 1980). Během fáze s buněčného cyklu, kdy je genetický materiál duplikován mechanismem replikace DNA, jsou buňky obzvláště citlivé na genotoxickou urážku. Zatímco G1 a G2/M kontrolní body zatčení progresi buněčného cyklu v dobře definované body prostřednictvím inhibice cyklin-dependentní kinázy, uvnitř S-fáze, kontrolní body se mohou vyskytnout kdykoli během S fáze, a zapojit více signálních drah (Sidorova a Breeden, 2003; Andreassen et al., 2003)
je velmi důležité analyzovat mechanismus odpovědi na léčivo během různých fází buněčného cyklu. Vysoká úroveň chromozomální léze může být v důsledku cytotoxicity 2-CdA způsobené jeho konverze na 2-CdATP, který indukuje inhibici DNA syntézy a opravy DNA, zahrnující enzymy ribonukleotid reduktázy a DNA polymerázy. Tato sloučenina ukazuje odolnost vůči adenosin deaminázy (ADA) aktivita, která je poskytovaná atom chloru a nahrazení vodíku na pozici 2 purinového kruhu adenosin (Baltz a Montello, 1993).
sce jsou často považovány za parametr pro hodnocení genotoxicity, protože jejich frekvence je jasně zvýšena expozicí mnoha mutagenním a karcinogenním chemikáliím. V tomto experimentu, frekvence Sce v kulturách léčených 2-CdA prezentovány mírný nárůst v souvislosti s kontrolními kulturami. Zvýšení pozorované během obou fází se významně nelišilo.
vzhledem k tomu, že mnoho léčiv je aktivováno po jejich metabolizaci, doporučují se testy mutagenity in vivo pro posouzení klastogenní aktivity těch sloučenin vyžadujících metabolickou aktivaci. Takový přístup také poskytuje podobné podmínky jako u lidí (Legator a Ward Jr., 1991). Ačkoli existují rozdíly mezi hlodavci a lidmi, doporučuje se, aby každé hodnocení bylo založeno jak na studiích in vitro, tak na in vivo, a nikoli pouze na jedné z nich (Huggett et al., 1996).
V této studii, klastogenní účinek 2-CdA byl také analyzován v BALB/c myších buněk kostní dřeně v koncentracích 0, 25, 0.375 a 0,5 mg/kg tělesné hmotnosti. Výsledky ukázaly, že 2-CdA nebyl účinný pro indukci chromozomálních aberací. Nedostatek účinku in vivo může být způsoben omezeným množstvím dostupného 2-CdA, protože byl darován ve zředěných podmínkách. Genotoxické účinky základního analogu gemcitabinu byly hlášeny v buňkách kostní dřeně myší za použití testovacích systémů mikronukleárních a chromozomových aberací. Pomozte mi s a Bilaloglu (2003) ukázaly, že gemcitabin nevyvolal žádné významné CAs a ani způsobit snížení v MI 6-h doba léčby v dávkách, 2.0, 4.0 a 8,0 mg/kg b.w., ve srovnání s negativní kontrolou; naproti tomu frekvence celkového CAs byla významně zvýšena gemcitabinem (p < 0, 0001) o 24hodinové léčebné období se stejnými dávkami.
Na závěr, 2-CdA vykázal klastogenní účinek v lidských kultur lymfocytů léčených in vitro během S fáze buněčného cyklu, ale ne významnou klastogenní účinek byl pozorován u buněk ošetřených během G1 a G2 fáze. V testu in vivo u myší nevykazoval 2-CdA při testovaných hladinách dávky Žádný klastogenní účinek.
Poděkování
Jsme vděčni Prof. Dr. a. T., Natarajan, Dr. T. Elza Sakamoto Hojo a Dr. Lusania G. Antunes za cenné připomínky k rukopisu a Pan Luiz Augusto da Costa Jr., Pan Silvio A. dos Santos a Paní Sueli A. Nevesové za cennou technickou pomoc. CAPES a FAPESP proces č. 99/10643-7 podpořil tento výzkum. Etická komise pro výzkum schválila projekt (proces: CONEP č. 25000.074430 / 2001-88).
Andreassen PR, Lohez OD a Margolis RL (2003) G2 a vřeteno shromáždění checkpoint adaptace, a tetraploidy zatčení: Důsledky pro vnitřní a chemicky indukované genomické nestability. Mutat Res 532: 245-53.
Aydemir N A Bilaloglu R (2003) genotoxicita dvou protinádorových léčiv, gemcitabinu a topotekanu, v kostní dřeni myší in vivo. Mutat Res 537: 43-51.
Baltz JK a Montello MJ (1993) Kladribin pro léčbu hematologických malignit. Klinická Lékárna 12: 805-813.
Caldecott KW (2004) dna jednovláknové zlomy a neurodegenerace. DNA Repair (Amst) 3: 875-82.
Carson DA, Wasson DB, Taetle R a Yu (1983) Specifická toxicita 2-chlorodeoxyadenosin k odpočinku a proliferující lidských lymfocytů. Krev 62: 737-743.
Degrassi F, De Salvia R, Tanzarella C a Palitti F (1989) Indukce chromozomálních aberací a SCE tím, camptothecin, inhibitor savčího topoizomerázy I., Mutat Res 211:125-130.
Evans HJ a Scott D (1964) Vliv na syntézu DNA na výrobu chromatid aberací u X-paprsky a maleinhydrazid v Vicia faba Genetika 49:o 17-38.
Ford CE a Hamerton JL (1956) kolchicin hypotonická citrát squash sekvence pro savčích chromozomů. Technol 3: 247-251.
galmarini CM, Mackey JR a Dumontet C (2001) nukleosidové analogy: Mechanismy lékové rezistence a reverzních strategií. Leukémie 15: 875-890.
Gandhi V, Huang P., Chapman, J., Chen F a Plunkett W (1997) Začlenění fludarabin a 1-beta-D-arabinofuranosylcytosine 5’triphosphates pomocí DNA polymerázy alfa: Affinity, interakce a následky. Clintonová 3: 1347-1355.
Genini D, Adachi S, Chao Q, Rose DW, Carrera CJ, Cottam HB, Carson DA a Leoni LM (2000) Deoxyadenosin analogů indukovat programovanou buněčnou smrt u chronické lymfocytární leukémie buňky tím, že poškozují DNA, a tím přímo ovlivňují mitochondrie. Krev 96:3537-3543.
Huggett AC, Schilter B, Roberfroid M, Antignac E a Koeman JH (1996) Srovnávací metody testování toxicity. Potravinářský Chemik 34: 183-92.
Korenberg JR a Freedlender EF (1974) Giemsa technika pro detekci sesterských chromatid výměn. Chromozom 48: 355-360.
Laurencet FM, Daca GB, Guetty-Alberto M Iten PA, Betticher DC a Alberto P (1999) Kladribinu s cyklofosfamidem a prednison v řízení low-grade lymfoproliferativních malignit. Brunclík 79: 1215-1219.
Legator MS a Ward Jr JB (1991) použití údajů o genetické toxicitě in vivo pro hodnocení rizik. Mutat Res 250: 457-465.
Liliemark J a Juliusson G (1994) 2-Chlor-2′-deoxyadenosin-klinické, biochemické a farmakokinetické úvahy. Archa (Warsz) 42: 7-10.
Mathew S, Lorsbach RB, Shearer P, Sandlund JT a Raimondi SC (2000) Dvojí minut chromozomů a c-MYC amplifikace u dětí se sekundární myelodysplastický syndrom po léčbě akutní lymfoblastické leukémie. Leukémie 14: 1314-5.
Moore RC and Bender MA (1993) časová posloupnost událostí vedoucích k tvorbě chromozomálních aberací. Environ Mol Mutagen 22: 208-213.
Moorhead PS, Nowell PC, Mellman WJ, Battipps DM a Hungerford DA (1960) chromozomální příprava leukocytů kultivovaných z periferní krve. Exp Cell Res 20: 613-616.
Natarajan, Balajee JAKO, Boei JJ, Darroudi F, Dominguez jsem, Hande MP, Meijers M, Slijepcevic P, Vermeulen S a Xiao Y (1996) Mechanismy indukce chromozomálních aberací a jejich detekce pomocí in situ hybridizace. Mutat Res 372: 247-58.
Perry PE and Wolff S (1974) nová metoda Giemsa pro diferenciální barvení sesterských chromatidů. Příroda 251: 156-158.
Plunkett W, Chubb S, Alexander L a Montgomery JA (1980) Porovnání toxicity a metabolismu 9-b-D-arabinofuranosyl-2-fluoroadenine a 9-b-D-arabinofuranosyladenine v lidských lymfoblastoidních buněk. Rakovina Res 40: 2349-55.
Pott-Hoeck C a Hiddemann W (1995) purinové analogy v léčbě lymfomů nízkého stupně a chronických lymfocytárních leukémií. Ann Oncol 6: 421-433.
Preston RJ, Dean BJ, Galloway S, Holden H, McFee AF and Shelby M (1987) savčí in vivo cytogenetické testy. Analýza chromozomálních aberací v buňkách kostní dřeně. Mutat Res 189: 157-65.
Robak T (2001) Kladribin v léčbě chronické lymfocytární leukémie. Leukův Lymfom 40: 551-564.
Robak T, Góra-Tybor J, Urbanska H a Krikowski E (1999) kombinovaného režimu 2-chlorodeoxyadenosin (kladribin), mitoxantron a dexamethason (CMD) v léčbě refrakterní a recidivující low-grade non-Hodgkinův lymfom. Leuk Lympho 32: 359-363.
Robertsson LE, Chubb S, Meyn ZNOVU, Příběh M, Ford R, Hitelman WN a Plunkett W (1993) Indukce apoptózy buněčné smrti u chronické lymfocytární leukémie pomocí 2-chlor-2′-deoxyadenosin-a 9-b-D-arabinosyl-2-fluoradenine. Krev 81: 143-150.
Schrimer M, Mur E, Pfeiffer KP, Thaler J a Konwalinka G (1997) bezpečnostní profil nízké dávky kladribinu u refrakterní revmatoidní artritidy. Pilotní pokus. Scand J Rhematol 26: 376-379.
Sidorova JM and Breeden LL (2003) předčasné přechody G1/S a genomická nestabilita: spojení původu. Mutat Res 532: 5-19.
Smorenburg CH, Sparreboom A, Bontenbal M a Verweij J (2001) Kombinace chemoterapie taxany a antimetabolity: Jeho použití a omezení. Eur Jen-37: 2310-23.
Szafraniec SI, Stachnik kJ a Skierski JS (2004) nové nukleosidové analogy v léčbě hematologických poruch. Acta Pol Pharm 61: 223-32.
Tallman MS, Hakimian D, Hogan D a Petersen Jsem (1993) 2-Chlorodeoxyadenosin v léčbě leukémie z vlasatých buněk (HCL): Detekce minimální reziduální nemoci (MRD) pomocí immunostaining (JE). Prezentovány na 8. Symposium o Molekulární Biologii Krvetvorby v Basileji, 9-13. července.
Tallman MS, Hakimian D, Variakojis D, Koslow D, Sisney GA, Rademaker AW, Rose E a Kaul K (1992) jeden cyklus 2-chlorodeoxyadenosin výsledky v kompletní remisi u většiny pacientů s trichocelulární leukémií. Krev 80: 2203-2209.
Traganos F, Staiano-Coico L, Darzynkiewicz Z a Vnitra PAN (1980) Účinky ellipticine na přežívání buněk a progresi buněčného cyklu v kultivovaných savčích buňkách. Rakovina Res 40: 2390-2399.
Zwaan MC, Kaspers GJL. Pieters R, Hählen K, Huismans DR., Zimmermann M, Harbott J., Slater RM, Creutzig, U a Veerman AJP (2002) Buněčné rezistence v dětství akutní myeloidní leukémie souvisí s chromozomálních abnormalit. Krev 100: 3352-3360.
