Komplementu závislé cytotoxicity

Terapeutické antibodiesEdit

Vývoj protinádorové terapeutické protilátky zahrnuje in vitro analýzy jejich efektorové funkce, včetně schopnosti vyvolat CDC zabíjet cílové buňky. Klasickým přístupem je inkubace protilátek s cílovými buňkami a zdrojem komplementu (séra). Pak buněčné smrti je stanovena s několika přístupy:

• Radioaktivní metoda: cílové buňky značené 51Cr, než CDC testu, chrom se uvolňuje při lýze buněk a množství radioaktivity se měří.
• Měření metabolické aktivity živých buněk (živé buňky barvení): po inkubaci cílové buňky, protilátky a komplementu, plazmatická membrána-propustná barvivo je přidáno (např. kalceinu-AM nebo resazurin). Živé buňky jej metabolizují na nepropustný fluorescenční produkt, který lze detekovat průtokovou cytometrií. Tento produkt nemůže být vytvořen v metabolicky neaktivních mrtvých buňkách.
• měření aktivity uvolňovaných intracelulárních enzymů: enzym uvolňující mrtvé buňky (např. LDH nebo GAPDH) a přidání jeho substrátu vede ke změně barvy, která je obvykle kvantifikována jako změna absorbance nebo luminiscence.
• odumřelé buňky barvení: a (fluorescenční) barvivo dostane uvnitř odumřelých buněk přes jejich poškozené plazmatické membrány. Například jodid propidium se váže na DNA mrtvých buněk a fluorescenční signál se měří průtokovou cytometrií.

HLA typizace a crossmatch testEdit

CDC testy jsou použity k nalezení vhodného dárce pro transplantaci orgánů nebo kostní dřeně, a to dárce s odpovídající fenotypu histokompatibilní systém HLA. Nejprve se typizace HLA provádí pro pacienta a dárce, aby se určily jejich fenotypy HLA. Pokud je nalezen potenciálně vhodný pár, provede se křížový test, aby se vyloučilo, že pacient produkuje anti-hla protilátky specifické pro dárce, což by mohlo způsobit odmítnutí štěpu.

CDC forma hla typizace (jinými slovy sérologické typizace) používá dávku anti – hla protilátek z charakterizovaných alogenních antisér nebo monoklonálních protilátek. Tyto protilátky jsou inkubovány jeden po druhém s lymfocyty pacienta nebo dárce a zdrojem komplementu. Množství odumřelých buněk (a tím i pozitivní výsledek) se měří odumřelých nebo živých buněk barvení. V současné době je typizace CDC nahrazována molekulárním typováním, které může identifikovat nukleotidové sekvence molekul hla pomocí PCR.

CDC test se obvykle používá pro provádění křížového testu. Základní verze zahrnuje inkubaci séra pacienta s lymfocyty dárce a druhou inkubaci po přidání králičího komplementu. Přítomnost mrtvé buňky (pozitivní test) znamená, že dárce není vhodný pro tohoto konkrétního pacienta. K dispozici jsou modifikace pro zvýšení citlivosti testu, včetně prodloužení minimální inkubační doby, přidání antihumánního globulinu (AHG), odstranění nevázaných protilátek před přidáním komplementu, oddělení podskupiny T buněk a B buněk. Kromě CDC crossmatch je k dispozici průtoková cytometrická crossmatch, která je citlivější a dokáže detekovat i neaktivující protilátky komplementu.