Kvantifikaci hladiny ROS pomocí CM-H2DCFDA a HyPer

Na nízké úrovni, reaktivních forem kyslíku (ROS) mohou fungovat jako signální molekuly do buňky. Když produkce ROS výrazně převyšuje kapacitu endogenních antioxidačních systémů nebo se snižují hladiny antioxidantů, hladiny ROS se dále zvyšují. Ta je spojena s indukcí oxidačního stresu a související signální transdukce a vyznačuje ROS indukované změny v buněčné redoxní homeostázy a/nebo škodlivé účinky na biomolekuly (např. DNA, proteiny a lipidy). Vzhledem ke složité mechanismy zapojené do produkce ROS a odstranění, v kombinaci s nedostatkem reportér molekuly, které jsou skutečně specifické pro konkrétní typ ROS, kvantifikace (sub)buněčných ROS úrovni je náročný úkol. V této kapitole popisujeme dvě strategie pro měření ROS: one approach to assess general oxidant levels using the chemical reporter CM-H2DCFDA (5-(and-6)-chloromethyl-2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate), and a second approach allowing more specific analysis of cytosolic hydrogen peroxide (H2O2) levels using protein-based sensors (HyPer and SypHer).