Interpretace Kvantitativní Cytomegalovirus DNA Testování: Pochopení Laboratorní Pohledu | Jiotower
Analytické Zkoušky Vlastnosti
Tam jsou výkonové charakteristiky virové zátěže testy, které musí být zřejmé, aby bylo možné správně používat a interpretovat výsledky testů. Mezi ně patří mez detekce (LOD), dolní a horní LOQ, lineární rozsah, přesnost (reprodukovatelnost) a přesnost. Lod, definovaná jako nejnižší koncentrace DNA, která může být detekována v 95% replikátů, se obvykle používá pro kvalitativní molekulární testy; tento termín však lze použít i na kvantitativní testy virové zátěže. Horní a dolní LOQ jsou nejvyšší a nejnižší koncentrace DNA, které lze kvantifikovat s “přijatelnou přesností”. V současné době neexistuje dohodnutá definice “přijatelné přesnosti”; proto to jednotlivé laboratoře definují lokálně. Způsob, jakým je definována “přijatelná přesnost”, může výrazně ovlivnit LOQ. LOD může být ekvivalentní nižšímu LOQ nebo může být nižší než nižší LOQ. Ve druhé situaci může test detekovat CMV DNA, ale hodnotu nelze přesně kvantifikovat. V těchto případech by laboratoř mohla výsledek Nahlásit jako “detekovaný, ale pod LOQ”; některé laboratoře to uvádějí jako ” nízké pozitivní.”Laboratoř by měla být schopna poskytnout jak LOD, tak LOQ; například v naší laboratoři je LOD testu virové zátěže CMV 100 kopií / mL, zatímco LOQ je 300 kopií/ml. Po konzultaci s klinickými lékaři bylo rozhodnuto hlásit hodnoty 100-300 kopií / mL jako” nízké pozitivní ” výsledky, zatímco tyto >300 kopií / mL jsou hlášeny jako celočíselná hodnota.
ačkoli velmi citlivé molekulární testy jsou často důležité pro detekci infekčních patogenů, nemusí tomu tak být u testů CMV DNA. Klinický význam nízké hladiny CMV DNA (<100-500 kopií/mL), může být obtížné interpretovat, zejména pokud celý krevní vzorky jsou testovány, protože nízké hladiny CMV DNA v celé krvi nebo plazmě nemusí vždy korelovat s rozvojem onemocnění. Byly provedeny některé studie ke stanovení prahové hodnoty pro léčbu, včetně studie přirozené anamnézy CMV onemocnění u příjemců transplantovaných jater . Pomocí testu monitoru COBAS Amplicor (Roche Molecular Diagnostics) autoři ukázali, že hodnota virové zátěže 2000-5000 kopií/mL korelovala s vývojem onemocnění koncových orgánů. Tato mezní hodnota je závislá na testu a může být vyšší nebo nižší pro jiné ldt. Studie také ukázaly, že jak hodnota virové zátěže, tak rychlost změny virové zátěže jsou důležitými prediktory vývoje aktivního onemocnění . Čím rychlejší je rychlost zvýšení hodnoty virové zátěže, tím větší je riziko vzniku onemocnění CMV. Jakmile jsou testy rekalibrovány s mezinárodním standardem, lze identifikovat univerzální klinicky relevantní LOD a nižší LOQ. Na základě aktuálně dostupných údajů a zkušeností může být 250-500 IU / mL vhodným LOD a / nebo nižším LOQ.
Vzhledem k tomu, že většina LDTs pomocí real-time polymerázové řetězové reakce technologie, lineární rozsah CMV virového zatížení testy se většinou alespoň 6 log10; například, test může detekovat z 2.0 log10 kopií/mL (100 kopií/mL) 7.0 log10 kopií/mL (10 milionů kopií/mL). Přezkum testování virové zátěže CMV provedeného v roce 2009 v lékařských laboratořích Emory ukázal, že z přibližně 8500 testů virové zátěže CMV DNA provedených na vzorcích plazmy bylo 671 (7,9%) pozitivních. Z těchto, 394 (58.7%) byla <1000 kopií/mL, 169 (25.2%) se pohybovaly mezi 1000 a 10 000 kopií/mL, a 63 (9.4%) se pohybovaly mezi 10 000 a 100 000 kopií/mL. Kromě toho mělo 45 (6,7%) virovou nálož CMV DNA >100 000 kopií/ml. Přestože jsou nízké hodnoty virové zátěže běžné, jejich klinický význam je nejasný. Velmi vysoké hodnoty virové zátěže jsou méně časté, a pokud se vyskytnou, jsou obvykle pozorovány u imunosuprimovaných pacientů s primární infekcí CMV nebo u pacientů s velmi závažným onemocněním. Protože u některých jedinců mohou být přítomny hodnoty virové zátěže až 10 milionů, horní hranice kvantifikace testu by měla být v tomto rozmezí.
interpretace důležitých rozdílů v hodnotách podélné virové zátěže u jednotlivého pacienta vyžaduje pochopení přesnosti nebo reprodukovatelnosti testu. Variabilita testů virové zátěže je obvykle největší v blízkosti dolního a horního LOQ a nejnižší ve středním rozmezí testu. Výsledkem je, že malé změny v nízké virové zátěže hodnoty nejsou významné, například, žádný jasný rozdíl existuje mezi výsledky u pacientů, u nichž virové zatížení hodnota se zvýšila z 200 kopií/mL až 500 kopií/mL, protože tento rozdíl je v rámci variability testu. Nejužitečnější údaje týkající se klinicky významných změn hodnot virové zátěže pocházejí ze zkušeností s HIV-1. Pro tyto FDA-schválené testy, variabilita testu se pohybuje od 0,1 log10 kopií/mL 0,2 log10 kopií/mL ve srovnání s biologickou variabilitu pozorovaných v chronicky infikovaných neléčených jedinců, což je o 0,3 log10 kopií/mL. Proto se předpokládá, že změny virové zátěže >0,5 log10 kopií/mL představují biologicky důležité změny replikace viru. Ačkoli hodnota 0, 5-log10 kopií / mL byla široce přijata pro použití s mnoha jinými virovými patogeny, nemusí být pro CMV přesná. Protože biologická variace CMV není známa, významné změny hodnot virové zátěže byly historicky hodnoceny pouze na základě variability testu. Další práce s HIV-1 ukázala, že SD zkoušky potřebné k být ≤0.15 log10 kopií/mL rozeznat, 5-násobné změny ve virové zatížení hodnoty . U CMV LDTs se očekává, že variabilita testu nebude o nic lepší než to, co je vidět u testů virové zátěže HIV-1 schválených FDA, a může být vyšší, zejména v blízkosti nižšího LOQ . Proto při detekci hodnot virové zátěže CMV <1000 kopií / mL dochází ke změnám <5krát (0.7 log10) bude vzácně odrážet klinicky důležité změny replikace viru. U hodnot >1000 kopií / mL mohou být 3násobné (0,5 log10) změny virové zátěže významné, i když se mohou lišit mezi ldt. Některá centra zprávě virové zátěže jako kopií/mL a jako log10 kopií/mL, protože lékaři, může být méně pravděpodobné, že přehánějí malé změny ve virové zatížení hodnoty vyjádřené jako log10 hodnoty.
základní vzorek pro testování virové zátěže by měl být odebrán v den zahájení léčby CMV, i když bylo testování virové zátěže CMV provedeno o několik dní dříve. U pacientů s neléčeným onemocněním může během několika dnů dojít k rychlému zvýšení virové zátěže CMV, což činí důležité mít v době léčby hodnotu virové zátěže CMV. Pokud hodnoty virové zátěže přesáhnou horní LOQ, doporučuje se, aby laboratoř vzorek zředila, aby se stanovila skutečná hodnota virové zátěže. Po zahájení léčby je ideální interval pro monitorování týdenní, protože poločas CMV DNA v plazmě je 3-8 dní . Dalším důvodem pro použití tohoto intervalu je, že to není neobvyklé pro CMV DNA virové zatížení zvýšit u pacienta několik dní po zahájení terapie, a to může být interpretováno jako selhání léčby. Protože pacienti s perzistentní DNA v plazmě nebo plné krvi mají zvýšené riziko relapsu, současné pokyny doporučují pokračovat v antivirové terapii, dokud nejsou hodnoty virové zátěže Nedetekovatelné. Někteří pacienti mají přetrvávající nízké hladiny CMV DNA v plazmě nebo v plné krvi a nikdy se nevyvinou CMV onemocnění nebo relaps. U těchto jedinců je užitečnější sledovat trendy v hodnotách virové zátěže v průběhu času než posoudit význam jakékoli dané hodnoty virové zátěže. Virové zatížení vzory, které jsou znepokojující pro rezistentní virus zahrnují ty, které se nesnižují po 2 týdnech adekvátní léčby , s plató ve výši virová nálož klesá, a ty, které mají počáteční pokles a pak následné zvýšení virové zátěže během léčby. Tito pacienti by měli být vyšetřeni na rezistentní virus sekvenováním genů UL97 a / nebo UL54 (polymerázy) přímo z plazmatického vzorku.
CMV DNA virové zátěžové testy jsou navrženy tak, aby nereagovaly zkříženě s jinými herpesviry. V případě imunokompromitovaných pacientů, detekce 2 herpesviruses, například, CMV a Epstein-Barr virus, odráží reaktivaci virů a není v důsledku křížové reaktivity.
