anatomi og fysiologi

denne undersøgelse blev udført med regler og regulering for pleje og brug af forsøgsdyr i dyrehuset og det respektive eksperiment blev godkendt af Central Animal Ethical Committee. 25 kvindelige Albino mus med en gennemsnitlig alder 45 dage og 25 til 35gm vægt blev valgt tilfældigt fra Animal house, fra forskellige avlskolonier. Disse kvindelige ikke-gravide voksne blev med vilje kopuleret af hanmus af samme sort med det formål at skaffe 10 hvalpe af yderligere generation. I plast polycarbonat bur med rustfrit stål toppings enkelt stærk og stout heterosygous mandlige blev placeret med enkelt hun i en atmosfære kontinuerligt opretholdt ved 20-25c og 55 liter 5% fugtighed, 12hrs efterfølgende lys og mørk cyklus. Hunmusene blev undersøgt for vaginal tværstik, og tilstedeværelsen af godt visualiseringspluggen blev markeret som konstateret graviditet og tildelt dag nul af svangerskabet. På dag 7, 8 og 9 af svangerskabet blev tilsluttede hunner kontrolleret for graviditet ved abdominal palpation.

karakterisering af AGNP ‘er

sølvnanopartikler fra forskningskøbskilder blev evalueret for deres primære størrelse ved hjælp af TEM og for deres agglomerering i cellemedium ved hjælp af fotonkorrelationsspektroskopi (PCC’ er) og ultraviolet–synlig (UV-Vis) spektroskopi, dynamisk lysspredning og Serapotentiale. Repræsentative tem-billeder af AgNps blev vist. De TEM billeder af PVP belagt AgNps spredt og suspenderet i 1.5M NaCl bekræftede den primære partikelstørrelse angivet af producenterne. De ubelagte sølvnanopartikler fandt heterogen fordeling inden for området 50 til 100 nm, hvoraf de fleste var omkring 71 nm.

i tilfælde af suspenderede pulveragnp ‘ er viste TEM-billeder, at sølvnanopartiklerne i et vandigt miljø klumper sig sammen og danner store aggregater, hvoraf mange er større end 50 nm. Dette resultat er i overensstemmelse med resultaterne af hydrodynamisk størrelsesfordeling, som blev opnået ved den dynamiske lysspredningsmetode. Kun elementært sølv blev præsenteret i både kolloide og tørre pulveriserede AGNP ‘ er. Ifølge ICP-AES-resultaterne var koncentrationerne af Ag-ioner i de syrefordøjede lagre af kolloidalt og suspenderet pulver AGNP ‘ er henholdsvis 1908,1 og 447,2 MGL-1. Også resultaterne af det første mønster bekræfter krystalliniteten af pulveriseret Type AgNps og tilstedeværelsen af elementært krystallinsk sølv, også andre faser, undtagen metallisk sølv, var ikke til stede i prøven. Desuden viste resultaterne, at renheden af agnps i pulverform var 97,86%.

eksponering af agnps kolloid opløsning gennem gentagne orale Sonder

drægtige mus blev administreret dobbelt med normal saltvand (Sham control) som køretøj og i en dosis på 5, 10, 15, 20 mg/kg legemsvægt blev givet gennem gentagne orale Sonder fra 7 til 12 svangerskabsdag ved hjælp af en stump spids buet skaft fodernål og varevogn fastgjort. Sham control dyr er inkluderet i forsøg med behandlede dyr og ubehandlede dyr.

dissektion og udtagning

på GD 18 blev højre og venstre livmoderhorn af gravid mor udvendigt efter ventral laparotomi under dyb ether/chloroformbedøvelse og 250 friske opsamlede dæmninger gennem dissektion blev vasket med ledningsvand på petriskål for at fjerne blod og fostervand og tørret med filterpapir og dehydreret i 95% alkohol i 48 timer til sidst udsat for 1% KOH for konsistensudtagning og korrekt visualisering af knogler enten normal eller unormal.13

metode (vurdering af skeletdysmorfologi ved teknikken til udtagning og Alisarinfarvning)-:

Skeletdysmorfologistudie blev udført ved teknikken til udtagning og alisarinfarvning. Alle prøver (50 hvalpe) fra hver gruppe blev dehydreret i 95% alkohol ( rektificeret spiritus) i 48 timer og derefter fjernet og vasket ved rindende ledningsvand og derefter udtaget med 1% KOH-opløsning (KOH 1GM+100 ml d.v.). Efter at have udført ventral laparotomi fjernes vitale organer. Prøverne blev dyppet grundigt i masser af 1% kaliumhydroksid (KOH) opløsning i mindst 2 til 4 dage, indtil kød, sener, muskler og indvolde var gennemsigtige & klare og opløste efterfulgt af krystalklar synlighed af knogler og brusk. Hver dag løsning blev ændret, når det bliver misfarvet og affald.

den krystalklare knogle og brusk synlige prøve blev derefter anbragt i samme 1% KOH, og derefter blev 6 til 8 dråber 1% alisarin-plet tilsat for at farve den dybt lilla rød. Opløsningen blev forsigtigt rystet et par gange i timen. Derefter blev den samme procedure fortsat i yderligere 2-3dage for at give dyb lilla rød farve til knogler og brusk. Til fjernelse af enhver overfarvning og udglatning af prøverne føres det samme derefter gennem 40%, 80% (40 ml glycerol+60 ml destilleret vand, 80 ml glycerol+20 ml destilleret vand) og 1 til 2 krystal thymol tilsat til langvarig konservering, der endelig opretholdes i 100% glycerol, serveret til fotografi & kraftig observation af håndlinser.

i alt blev 250 fostre indsamlet fra 25 mødre fra 1, 2, 3, 4 og 5 grupper, hvoraf alle prøver blev udsat for skeletdysmorfologieksperimentering. 60 fostre blev observeret resorption.

statistik

procentdel af skeletmisdannelse blev evalueret fra hver gruppe og vurderet efter antal knogler, der var involveret i dysmorfologien, og endelig blev procentdelene sammenlignet mellem gruppen og inden for gruppen for dosisafhængig teratogenicitetsfaktor. Multi ANOVA og beskrivende statistik (post hoc analyse) test anvendt til dette formål.

Observation og fund

procentdelen af skeletdysmorfologi blev fundet højere og højest hos 15 mg AgNps og 20 mg AgNps/ kg legemsvægt behandlede gruppe hvalpe (tabel 1).

den lavere dosis agnps behandlede gruppe (0,5 & 1 mg/kg legemsvægt.) blev observeret meget minimale procentdele af skeletanomalier, så disse behandlede grupper blev næsten betragtet som kontrolgruppefostre (Figur 1).

Figur 1 Kontrol Foster Alicarin plet dorsal visning (A) og sidebillede (B).

en af de 5 mg AgNps/ kg kropsvægt behandlet gruppe hvalp demonstrerede uossificeret 5.sternal segment fra sternal bar og uossificeret Manumbrium segment, der diagnosticeres som sternal kløft. Andre fostre viste maksillær og mandibulær hypoplasi, uossificeret frontal, parietal og nasal knogle, svigt i fusion af bageste segment af hoftebenet, 10,11 og 12.ribben set rudimentær i venstre side af et af fosteret. Fravær af midteraksel på 6 til 12.ribben sammen med forøgelse af rummet mellem successive ribben blev betegnet i flere fostre fra forskellige grupper og diagnosticeret som øget vævsplads, fravær af krop & spinøs proces ses fra hele thoracale vertebrale segmenter, der diagnosticeres som neuralrørsdefekt af tæt type i 1% tilfælde fra denne behandlede gruppe fostre. Procentdelen af skeletdysmorfologi beregnet i denne gruppe var 32% (figur 2).

figur 2 5 mg agnps behandlet gruppe foster a) og B), sidebillede C) ventralbillede D) og dorsalbillede E)

de 10 mg AgNps-behandlede gruppefostre demonstrerede skeletdysmorfologi i form af fravær af lændehvirvel og sakral ryghvirvel, fravær af hofteben, alvorligt degenererede ribben uden brusk, frontal og parietal knogle viste uossificeret og uudviklet, skoliose observeres i bryst-og lænderegionen i et af fosteret, fravær af cervikale rygvirvel ses, maksillær hypoplasi, afsløring af sagittal knogle i og koronale suturer ses også. Uudviklede benben i underekstremiteterne ses på begge sider af et af fosteret. Procentdelen af skeletdysmorfologi beregnet i denne gruppe var 44% (figur 3).

figur 3 10 mg agnps behandlet gruppe Foster Alisarin plet dorsal visning (A, B).

blandt 15 mg AGNP ‘ er behandlet gruppe 8 hvalpe blev observeret fravær af cervikale ryghvirvler med fravær af 12. ribben og resten af ryghvirvlerne blev observeret uudviklet spinøs proces, Metatarsal kløft ses også på dorsal visning af foden af et af fosteret, uossificeret hofteben på ventral visning med fravær af segment & fibrose ses også, uossificeret temporal knogle, der findes fibroseret på lateral visning af kraniet, fravær af proksimalt segment af innomineret knogle,vertebral søjleanomali blev set med rudimentær 6. og 9. rib og fravær af 10., 11. og 12. er observeret ribben i et af fosteret, uossificeret parietal knogle blev også set, Anencephaly med skoliose ryghvirvler blev set i L1-L5 i et af fosteret, uossificeret hofteben blev set, uossificerede scapulae på begge sider blev set på dorsal visning af et af fosteret, fravær af brusk blev set fra 6.til 12. ribben i et af fosteret. Procentdelen af skeletdysmorfologi beregnet i denne gruppe var 60% (figur 4).

figur 4 15 mg agnps behandlet gruppe Foster Aisarin plet dorsal visning (A, B) og ventral visning (C)

den 20mg / kg s. v. Agnps-behandlede gruppefostre blev præsenteret med den højeste procentdel af skeletdysmorfologi (76%). Skoliose blev set i lænderegionen i et af fosteret, et foster demonstrerede uossificeret occipital knogle, uossificeret scapulae og hofteben, stor fibrose observeres i maksilla, frontale og parietale knogler, det samme observeres også i andet til sjette segment af brystbenet., observeres kløft i ankelleddet, øget plads observeres mellem 1.og 2. ribben og 5. til 8. ribben på venstre side af et af fosteret , også kløft observeres i symphisis pubis led af et af fosteret, uossificeret mandibulær hypoplasi, fravær af spinøs proces med bølgede ribben observeres også, i et foster observerede vi fuldstændig fusion af 2. til 8. cervikale ryghvirvler, som klart adskiller sig fra resten af 1. cervikale ryghvirvler. Vi observerede også mild skoliose og uossificeret occipital og parietal knogle og fravær af scapulae på højre side af et af fosteret, hypo plast ryghvirvler ses også (Figur 5).

figur 5 20 mg agnps behandlet gruppe Foster Alisarin plet dorsal udsigt.