Cytokeratin 5/6 og cytokeratin 8/18 ekspression i tredobbelt negativ brystkræft: klinisk patologisk betydning i sydasiatisk befolkning

metoder

i alt 150 tilfælde af TNBC blev valgt fra optegnelser over patologiafdelingsarkiver. De kirurgiske prøver omfattede modificerede radikale mastektomier, enkle mastektomier og brede lokale udskæringer med sentinel lymfeknude dissektion. Alle patienter gennemgik operationer på Karachi fra januar 2008 til December 2013 over en periode på 6 år. Undersøgelse blev godkendt af institutionens forsknings-og etiske gennemgangsudvalg, og informeret samtykke blev taget fra alle patienter på operationstidspunktet. Hæmatoksylin og eosin farvede dias og paraffin blokke af sager blev hentet og nye sektioner blev skåret, hvor det var nødvendigt. Slides af alle tilfælde blev gennemgået af to seniorhistopatologer og patologiske egenskaber som histologisk type, tumorkvalitet, T-Stadium, N-Stadium, lymfovaskulær invasion, nekrose, fibrose, lymfocytisk infiltration (tumorinfiltrerende lymfocytter), tilstedeværelse af insitu komponent, pagetoid spredning og dermal lymfatisk invasion blev evalueret. Kliniske optegnelser over alle patienter blev også gennemgået fra institutionelle poster for at evaluere patientens alder, historie med stråling og kemoterapi og gentagelsesstatus. Desuden blev repræsentative blokke i hvert tilfælde valgt, og er, PR og her2neu immunhistokemi blev udført for at bekræfte tredobbelt negativ status.

ER, PR, Her2neu og Ki67 IHC blev udført ved anvendelse af DAKO-antistoffer som under, med EnVision kurvfleks, høj pH DAKO kit i henhold til producentens protokol.

1. bøj monoklonal kanin anti – human østrogenreceptor alfa, klon EP1.

2. fleks monoklonal mus anti-human progesteronreceptor klon PgR 636.

3. polyklonal kanin anti-humant C-erbb-2 oncoprotein.

4. fleks monoklonal mus anti-human Ki67 antigen klon MIB-1.

nuklear farvning af ER og PR i > 1% af kræftceller blev betragtet som positiv. For her2neu blev sagerne scoret 1+, 2+ og 3 + i henhold til retningslinjerne for den fælles landbrugspolitik. I tvetydige tilfælde (2+) blev fisk udført ved hjælp af Path Vysion her2neu probe kit i henhold til producentens protokoller. Resultaterne blev udtrykt som forholdet mellem her2neu-signaler sammenlignet med CEP17-signaler i henhold til ASCO/CAP-retningslinjer.

Ki67 immunfarvning blev registreret som kontinuerlige variabler baseret på andelen af positive farvede kræftceller. Desuden blev sagerne på grundlag af Ki67-indekset kategoriseret i < 15, 16-24, 25-44 og > 44% ki67-indekskategorier.

CK5/6 IHC blev udført ved anvendelse af fleksibel monoklonal mus Anti-human Cytokeratin 5/6, klon D5/16 B4 ved DAKO envision-metode i henhold til producentens protokol. Mellemliggende til stærk cytoplasmatisk og membranøs farvning i mere end 10% celler blev betragtet som positiv. Svag til mellemliggende farvning i < 10% blev taget som fokal positiv, mens ingen farvning blev betragtet som negativ (yderligere fil 1: Figur S1).

CK 8/8 IHC blev udført ved anvendelse af monoklonal mus anti-human Cytokeratin 5/6, klon D5/16 B4 ifølge DAKO envision-metoden. Mellemliggende til stærk cytoplasmatisk og membranøs farvning i mere end 50% celler blev betragtet som positiv. Svag til mellemliggende farvning (cytoplasmatisk, med tab af membranreaktivitet) i 10-50% blev taget som fokal positiv, mens ingen farvning eller svag farvning i < 10% blev betragtet som negativ (yderligere fil 1: Figur S1).

Gentagelsesstatus og opfølgning blev evalueret ved gennemgang af hospitalets medicinske journal. Samlet overlevelse blev taget som tid fra kirurgisk udskæring til død eller sidste opfølgning, og sygdomsfri overlevelse blev defineret som tid mellem kirurgisk udskæring og lokal gentagelse eller fjern metastase, død eller sidste opfølgning.

statistisk pakke for samfundsvidenskab (SPSS 21) blev brugt til dataindsamling og analyse. Gennemsnit og standardafvigelse blev beregnet for kvantitative variabler. Frekvens og procentdel blev beregnet for kvalitative variabler. Chi-pladsen blev anvendt til at bestemme forening. Student t test eller Mann hvidney test blev anvendt til at sammenligne forskellen i midler mellem grupper. P værdi 0,05 som signifikant. Overlevelseskurver blev afbildet ved hjælp af Kaplan–Meier-metoden, og betydningen af forskellen mellem overlevelseskurver blev bestemt ved hjælp af log-rank-forhold. P – værdi 0.05 blev betragtet som signifikant.

resultater

gennemsnitsalderen for de patienter, der var involveret i undersøgelsen, var 48,9 år, og den mest almindelige aldersgruppe var 31-50 år. De fleste af patienterne præsenterede i fase T2 med et højt gennemsnitligt ki67-indeks, dvs.46,9%. 42,7% af tilfældene havde nodal metastase. Selvom 84% tilfælde var af konventionelt invasivt duktalt karcinom, NST; en betydelig del af tilfældene var imidlertid af metaplastisk histologi (9,3%). De fleste tilfælde var af høj kvalitet (86,7% grad III). De fleste tumorer viser lymfocytisk infiltration og nekrose. De fleste tumorer mangler insitu komponent (61%). Lokal gentagelse eller sen fjern metastase blev noteret i 17,8% af tilfældene (tabel 1).

positiv (> 10%) CK5/6-ekspression blev noteret i 8% (12 tilfælde) af TNBC, mens 2, 4% (4 tilfælde) viste fokal positiv (< 10%) og 89, 3% (134) var negative med CK5/6. Fuldstændigt tab af CK8/18-ekspression blev set i 4,7% (7 tilfælde), mens 32,7% (49 tilfælde) afslørede fokalt tab af CK8/18 og 62,7% (94 tilfælde) viste intakt normal ekspression af CK8 / 18. Der blev ikke observeret nogen signifikant sammenhæng mellem CK5/6 og CK8/18 og forskellige klinikopatologiske parametre (tabel 2 og 3). Tilsvarende blev der ikke noteret nogen signifikant sammenhæng mellem CK 5/6 og CK8/18 og recidivstatus for patienterne (yderligere fil 2: Figur S2).

Diskussion

i denne undersøgelse vurderede vi ekspression af en basal (CK5/6) og en luminal markør (CK8/18) i TNBC i vores befolkning og fandt det; 8 og 2,7% af TNBC viste positiv og fokal positiv ekspression af henholdsvis CK5/6 og 4,7 og 32.7% af TNBC afslørede fuldstændigt tab og fokalt tab af henholdsvis CK 8/18-ekspression. I alle de tilfælde, hvor fokaltab CK8/18 blev noteret, var der tab af membranreaktivitet, mens cytoplasmisk farvning blev bevaret i få celler. Der blev dog ikke observeret nogen signifikant sammenhæng mellem disse unormale ekspressionsmønstre af cytokeratiner med forskellige klinikopatologiske og prognostiske parametre for TNBC i vores population. Brystkræft er en af de mest almindelige maligniteter i sydasiatiske befolkning, især i ung alder .

Genekspressionsprofilering definerer basal brystkræft som dem, der udviser basale klynger af gener, der inkluderer EGFR, basal cytokeratin 5/6, C–kit, proliferationsklynge og lav ekspression af her2neu og hormonreceptorrelaterede gener . Imidlertid er basal brystkræft ikke en enkelt enhed, og den inkluderer flere undertyper, herunder to basallignende undertyper (BL1 og BL2), mesenkymale, mesenkymale stamlignende, immunmodulerende og luminale androgenundertyper . Ud over det interferon rige og claudin-lave undertyper er også blevet defineret . Subtyping af basale brystkræftformer anbefales ikke af ASCO / CAP. CK 5/6-ekspression varierer fra 24 Til 72% i TNBC som rapporteret i tidligere undersøgelser . Andre forskere har også foreslået prognostisk betydning af CK 5/6 i node negative brystkræft . Nielson et al. foreslået, at CK5/6 positiv brystkræft har dårligere prognose uafhængig af tumorkvalitet, T-Stadium og hormonel / Her2neu-status . Tilsvarende i en anden undersøgelse blev det foreslået, at CK5/6 er markør for kortere sygdomsfri overlevelse, uafhængig af andre prognostiske faktorer for brystkræft . Inanc et al. rapporteret 50.5% ekspression af CK5 / 6 med positiv korrelation af CK5/6 TNBC med nodal metastase og tumorstørrelse . I modsætning til disse undersøgelser fandt vi imidlertid et lavt udtryk for CK5/6-ekspression i TNBC i vores studerede befolkning, som kan repræsentere en anden genomisk profil af TNBC i vores befolkning, som skal undersøges i yderligere undersøgelser. Prognostisk rolle af CK5 / 6 er blevet foreslået i andre kræftformer i kroppen .

CK8/18 er et luminal cytokeratin, der hovedsageligt udtrykkes i brystepitel i et membranøst og cytoplasmatisk mønster. Cimpean et al. defineret disse forskellige mønstre af CK8 / 18 i brystkræft; diffus cytoplasmatisk, membranøs og kombineret cytoplasmatisk og membranøs .Nogle forskere har foreslået, at tab af CK8/18-ekspression/lav CK8/18 er forbundet med dårligere prognose og høj risiko for metastase . Vi fandt dog ikke nogen prognostisk betydning af tab af CK8/18-ekspression med forskellige prognostiske faktorer og gentagelse i TNBC.

vi fandt, at 32,7% af TNBC viser fokalt tab af ekspression CK8/18. I alle disse tilfælde var der tab af membranøs reaktivitet af CK8/18, mens cytoplasmatisk farvning blev bevaret i få celler. Aiad et al. i en undersøgelse, der involverede 70 tilfælde af brystkræft, blev der fundet unormal ekspression af CK8/18 (cytoplasmisk) hos 70% af egyptisk brystkræft, hvilket antyder en masse heterogenitet i cytokeratinekspression af brystkræft i forskellige dele af verden .