Klastogen aktivitet af 2-chlorodeoksyadenosin i pattedyrs somatiske celler

mutagenese
forskningsartikel

Klastogen aktivitet af 2-chlorodeoksyadenosin i pattedyrs somatiske celler

Gilmara Ausech AntonucciI; Catherine He TakahashiI; II

iUniversity of S Kurto Paulo, Faculdade de Medicina de Ribeir Kurto Preto, Departamento de Gen Kurtica, Ribeir Kurto Preto, SP, Brasilien.
IIUniversidade af S. L. P., Det Filosofiske Fakultet, videnskab og breve fra Ribeir L. P. Preto, Biologisk Institut, Ribeir L. P. P., SP, Brasilien.

korrespondance

abstrakt

af basisanalogen 2-chlorodeoksyadenosin (2-CdA), der anvendes til behandling ved kronisk resistent og de avancerede lymfoproliferative lidelser, er cytotoksisk for både delende og ikke-delende lymfocytter. Det nuværende arbejde evaluerede det klastogene potentiale af dette lægemiddel in vitro i humane lymfocytter i kultur og in vivo i BALB/c-mus knoglemarvsceller. I humane lymfocytter blev den klastogene virkning af 2-CdA undersøgt i G1 -, S-og G2-faser af cellecyklussen ved anvendelse af tre forskellige koncentrationer (10, 20 og 40 mg/mL). De analyserede endepunkter omfattede mitotisk indeks (MI), proliferationsindeks (PI), søsterkromatidudveksling (SCE) og kromosomal aberration (CA). Statistisk analyse ved en varians (ANOVA) test viste en signifikant stigning (p < 0.05) i ca-frekvenser for celler behandlet i S-fasen, men MI varierede ikke. De testede koncentrationer frembragte ikke en signifikant stigning i Middelfrekvensen af SCEs, og de ændrede heller ikke celle PI i G1-og S-faserne. De undersøgte in vivo-koncentrationer var 0,25, 0,375 og 0,5 mg/kg legemsvægt. I denne analyse blev ændringer i ca-frekvenser og MI ikke observeret ved de testede dosisniveauer. Derfor indikerer resultaterne en klastogen virkning af 2-CdA i humane lymfocytkulturer.

nøgleord: humane lymfocytter, 2-CdA, kromosomafvigelser, SCE, cellecyklus.

introduktion

Purinanaloger er meget aktive til behandling af lymfoproliferative lidelser (Pott-Hoeck og Hiddemann, 1995). Cladribin, 2-chlorodeoksyadenosin (2-CdA), er en nukleosidanalog med et halogenatom erstattet i position 2 i dets purinring, hvilket giver resistens over for deaminering med adenosindeaminase (ADA). 2-CdA er et valg af lægemiddel til behandling af hårcelleleukæmi, men det er også meget effektivt i andre lavkvalitets lymfoide maligniteter, herunder kronisk lymfocytisk leukæmi (CLL). Rapporterne i litteraturen har vist, at 2-CdA giver lignende komplet responsrate (CR) og samlet responsrate (Or) på fludarabin, men indflydelsen af begge stoffer på overlevelsesraten for patienter med CLL er stadig usikker. CR-hastigheden induceret af 2-CdA er signifikant højere end hos patienter behandlet med konventionel kemoterapi (Robak, 2001). 2-CdA er en anden ny kemoterapeutisk purinanalog med specifik toksicitet for lymfocytter (Schrimer et al., 1997). Cytotoksiciteten forekommer i prolifererende og hvilende celler, hvilket resulterer i hændelser såsom inhibering af DNA og proteinsyntese såvel som induktion af apoptose (Robertsson et al., 1993). På trods af toksiciteten er der opnået gode resultater i terapeutisk respons, og dette lægemiddel er den vigtigste mulighed i tricoleukemia-behandling, hvor patienter viser hårcelleleukæmi (HCL) (Tallman et al., 1992; Tallman et al., 1993).

Adenindeksynukleosider inducerer apoptose i hvilende lymfocytter og er nyttige lægemidler til behandling af indolente lymfoproliferative sygdomme. Flere mekanismer er blevet foreslået for at forklare toksiciteten af deoksyadenosin og dets analoger i hvilende celler, herunder den direkte binding af dATP til den pro-apoptotiske faktor Apaf-1 og aktiveringen af caspase-9 og -3 veje (Genini et al., 2000).

en patient med akut myeloid leukæmi behandlet med 2-CdA og Ara-C præsenterede forsinket marvgenopretning, bihulebetændelse og Candida tropicalis sepsis. Hun udviklede multisystemorgansvigt og døde 1 måned efter påbegyndelse af AML-behandling. Post mortem undersøgelse, begrænset til brystet og maven, afslørede dissemineret candidiasis, der involverede lunger, hjerte, lever, nyrer og milt., 2000).

et al. (2002) observerede, at patienter med T (9:11) syntes at være signifikant mere følsomme end andre AML-patienter over for følgende lægemidler: cytarabin (median: 2,9 gange), doksorubicin (4,5 gange), mitoksantron (8,0 gange), 2-chlorodeoksyadenosin (10,0 gange).

nukleosidanaloger (NA) såsom cytosin arabinosid, fludarabin, cladribin og gemcitabin er essentielle komponenter i AML (akut Myeloid leukæmi) induktionsterapi; de er også effektive til behandling af lymfoproliferative lidelser og er blevet brugt til behandling af nogle faste tumorer. Disse vigtige forbindelser har nogle fælles egenskaber, nemlig med hensyn til at kræve transport af specifikke membrantransportører og metabolisme og interaktion med intracellulære mål. De adskiller sig imidlertid med hensyn til typerne af transportører og deres præferenceinteraktion med visse mål, der kan forklare effektiviteten mod hurtige prolifererende tumorer (Galmarini et al., 2001).

i betragtning af disse oplysninger er det vigtigt at vurdere det klastogene potentiale for 2-CdA på grundlag af rapporter om, at dette lægemiddel inducerer cytotoksicitet (Tallman et al., 1992; Tallman et al., 1993) og DNA-enkeltstrengede brud (Liliemark og Juliusson, 1994). Formålet med denne undersøgelse var at evaluere kapaciteten af dette kemoterapeutiske middel til at inducere kromosomskade i humane lymfocytter og knoglemarvsceller fra BALB/c-mus.

materialer og metoder

kemisk middel

det antitumorale 2-chlorodeoksyadenosin blev venligt leveret af Kemoterapicentret på Hospital De Cl Kursnicas fra Ribeir Kurto Preto School of Medicine (Faculdade de Medicina de Ribeir Kurto Preto – USP) til in vitro-og in vivo-eksperimenterne.

humane perifere blodlymfocytter

blodprøver blev opnået fra seks Ikke-ryger raske frivillige (tre hunner og tre hanner) i alderen 25 Til 35 år og underkastet behandling under G1 -, S-og G2-faser i cellecyklussen til analyse af kromosomabnormalitet (CA) og mitotisk indeks (MI). Derudover blev lymfocytter fra tre individer (to hunner og to hanner) anvendt til søsterkromatidudveksling (SCE) og proliferationsindeks (PI) analyse. Lymfocytter blev dyrket i 78% RPMI-1640 medium (Sigma Chemical Co., St. Louis, USA) suppleret med 20% føtalt kalveserum (Cultilab, Brasilien) og tilsat penicillin (5 mg/mL) og streptomycin (10 mg/mL). Celler blev stimuleret med 2% phytohemagglutinin (Life Technologies, Grand Island, NY). For hver 5 mL dyrkningsmedium blev der tilsat 1 mL plasma, og kulturerne blev inkuberet ved 37 liter C i 52 timer til CA-analyse. 2-CdA-opløsninger blev fortyndet i deioniseret vand i følgende koncentrationer: 10, 20 og 40 mg/mL dyrkningsmedium ifølge Preston et al. (1987). En negativ kontrol blev inkluderet i alle eksperimenter. Diasforberedelse og farvning blev udført ved hjælp af standardteknikker (Moorhead et al., 1960). Dias til analyse af søsterkromatidudveksling (SCE) og proliferationsindeks (PI) blev opnået fra parallelle kulturer, hvortil 5-Bromo-2′-deoksyuridin (Sigma Chemical Co., St. Louis, USA; 10 mg / mL) blev tilsat ud over 2-CdA. Differentiel søsterkromatidfarvning blev opnået ved fluorescens plus Giemsa – teknikken ved anvendelse af Hoechst 33258 (Calbiochem-Behring Corp.; 0,05 mg/mL Hanks opløsning) og 5% Giemsa (Merck). Denne metode er en ændring af dem, der er offentliggjort af Korenberg og Freedlender (1974) og Perry og Ulff (1974). Slides blev udsat for hvidt lys natten over. Metafasepræparater med 46 liter 1 kromosomer blev analyseret i en blind test. Kromosomerne blev trukket skematisk til SCE-scoring såvel som til CA-analyse.

behandlingsprotokoller

2-CdA-behandling af lymfocytkulturer i forskellige faser af cellecyklussen

kromosomafvigelser (CAs)

efter syv timer initiering af kultur (G1-fase) blev lymfocytkulturerne behandlet med 2-CdA i 1 time ved 37 liter C i dyrkningsmedium uden serum. Cellerne blev fikseret 52 timer efter indledningen af kultur. Efter behandling med 2-CdA blev cellerne vasket to gange i serumfrit medium og reinkuberet i komplet medium. Til behandling i S-fase blev 24 h-kulturer behandlet med 2-CdA i 6 timer. Cellerne blev vasket to gange i serumfrit medium, reinkuberet i komplet medium og fikseret efter 52 H inkubation. Til G2phase-behandling blev 69 h-kulturer behandlet med 2-CdA i 3 timer, og cellerne blev fikseret efter 72 h inkubation. Colchicin (Merck 0,016%) blev tilsat 1,5 time før fiksering. For at bestemme MI blev 1000 celler scoret pr. Kultur, og 100 metafaser fra hver kultur blev analyseret for CA, I alt henholdsvis 6000 celler og 600 metafaser for hver behandling.

søsterkromatidudvekslinger (SCEs)

Lymfocytkulturer fra 4 raske donorer (to hunner og to hanner) blev behandlet med 5-brdu (10 liter/mL) i begyndelsen af inkubationen, og når celler nåede G1-fasen (7 timer efter påbegyndelse af kultur), blev 2-CdA plus 5-BrdU tilsat til 1 time ved 37 liter C i dyrkningsmedium uden serum. Efter behandling blev cellerne vasket to gange i serumfrit medium, 5-BrdU blev tilsat igen, og derefter blev cellerne reinkuberet i komplet medium. Til behandling i S-fasen blev 24 h-kulturer behandlet med 2-CdA plus 5-BrdU i serumfrit medium i 6 timer. efter behandlingen blev cellerne vasket to gange i serumfrit medium og reinkuberet i komplet medium med 5-BrdU. Til SCE-og PI-analyse blev cellerne (G1-og S-faser) fikseret 72 timer efter påbegyndelsen af kultur. Kultur blev scoret for SCE, og hundrede metafaser fra hver kultur blev scoret for henholdsvis første, anden og tredje celledeling, i alt 200 metafaser og 400 celler pr. PI blev opnået ved anvendelse af følgende ligning:

PI =

hvor M1 og M3 er tallene for henholdsvis første og tredje division metafaser (Degrassi et al., 1989).

Dyr

de anvendte dyr var BALB/c-Mus (Mus musculus), opnået fra Animal House Of School of Medicine of Ribeir Kurto Preto.

in vivo-test på BALB/c-mus knoglemarvsceller

mus, der vejer cirka 30 g (5-6 uger), blev opdelt i grupper på 8 dyr (4 hanner og 4 hunner) og behandlet ved intraperitoneal injektion med 0.5 mL / slutvolumen 2-CdA opløsning fortyndet med destilleret vand i følgende koncentrationer: 0,25, 0,375 og 0,5 mg/kg legemsvægt. Toogtyve timer efter behandling (dvs.to timer før ofring) blev musene injiceret med 0,3 mL/slutvolumen af en 1% colchicin-opløsning (Sigma) og dræbt ved ether-inhalation 2 timer senere. Den negative kontrolgruppe modtog destilleret vand 0,5 mL/slutvolumen/dyr, og den positive kontrolgruppe modtog cyclophosphamid (CP), 25 mg / kg legemsvægt. Knoglemarvspræparater til metafaseceller blev opnået ved standardteknikken (Ford og Hamerton, 1956). Slides blev analyseret i en blind test, og 100 metafaser pr. MI blev opnået ved at tælle antallet af mitotiske celler i 1000 celler analyseret pr.

statistisk analyse

Envejsanalyse af varians (ANOVA) blev udført på antallet af unormale metafaser og det samlede antal CA, MI, SCEs og PI med beregninger af P-værdierne for hver fase af cellecyklussen. Når p < 0.05 blev fundet, middelværdierne for hver behandling blev sammenlignet med den studerende-Nyman Keuls test. Den statistiske analyse blev udført ved hjælp af Sigma Stat (Jandel Corporation) programpakker.

resultater

humane lymfocytter

perifere blodlymfocytter blev behandlet med forskellige koncentrationer (10, 20 og 40 mg/mL) af 2-CdA i G1 -, S-og G2-faserne i cellecyklussen. Kromosomafvigelser (CA) og mitotisk indeks (MI) blev analyseret i behandlede lymfocytter fra seks raske individer (tre hunner og tre hanner) (tabel 1). For de celler, der blev behandlet i S-fasen, blev der observeret en signifikant stigning i CA-frekvenser (p < 0,05) ved alle koncentrationer sammenlignet med kontrolfrekvenserne. De mest almindelige typer af kromosomal aberration observeret var kromatid-og isochromatidhuller (data ikke vist) og pauser efterfulgt af dobbelt minutter, dobbeltfragmenter og enkeltfragmenter. For celler behandlet under G1-og G2-faserne viste CA-frekvenserne ingen statistisk signifikant forskel mellem de behandlede kulturer og kontrolværdierne. Selvom der var en lille variation for MI, blev der ikke observeret en statistisk signifikant forskel (p < 0,05) i nogen af behandlingerne i forhold til kontrolindekserne.

middelfrekvenserne for søsterkromatidudveksling (SCE) og proliferationsindeks (PI) blev bestemt i fire kontroller og i lymfocytkulturer behandlet med 2-CdA i G1-og S-faserne i kulturer høstet efter 72 timer (tabel 2). De testede koncentrationer (10, 20 og 40 mg/mL) forårsagede ingen signifikant stigning i Middelfrekvensen af SCEs, og de ændrede heller ikke celle PI i G1-og S-faserne (tabel 2).

BALB/c musens knoglemarvssystem

CA-og MI-frekvenser blev analyseret i knoglemarvsceller fra 8 BALB/c-mus (4 hunner og 4 hanner) efter intraperitoneal behandling med 0,25, 0,37 og 0,50 mg / kg legemsvægt af 2-CdA (tabel 3). I In vivo-analysen viste 2-CdA ikke cytotoksiske virkninger for nogen af de testede doser vedrørende CA-frekvenser såvel som MI-værdier, når alle behandlingsgrupper blev sammenlignet. De fleste afvigelser var kromatid-type pauser. Ingen signifikant forskel (p < 0,05) blev fundet enten blandt dyrene eller mellem mænd og kvinder for de analyserede parametre.

Diskussion

i løbet af de sidste par år har flere undersøgelser vist den antiproliferative virkning af de lægemidler, der anvendes til behandling af lymfoide maligniteter. 2-CdA er en baseanalog anvendt i kemoterapi til en bestemt form for leukæmi, hårcelleleukæmi. Der er også nogle data, der viser, at 2-CdA kan anvendes i kombination med andre lægemidler til behandling af ildfast og tilbagevendende lavgradig ikke-Hodgkins lymfom (NHL) (Laurencet et al., 1999; Robak et al., 1999). I det nuværende arbejde blev der udført en cytogenetisk undersøgelse in vitro for at evaluere det klastogene potentiale af 2-CdA i humane lymfocytter med hensyn til induktion af CA og SCE. Ifølge Moore og Bender (1993) kan strukturelle CAs resultere i tab af kromosomalt materiale. Den dannede type CA afhænger af arten af læsionen induceret i DNA ‘ et og cellecyklusfasen, hvor cellerne blev eksponeret (Natarajan et al., 1996).

Lymfocytkulturer blev behandlet med tre koncentrationer af 2-CdA (10, 20 og 40 mg/mL) i forskellige faser af cellecyklussen. Den klastogene virkning af lægemidlet blev demonstreret ved den signifikante stigning (p < 0,05) i CA-frekvenserne for alle de koncentrationer, der blev testet i S-fasen af cellecyklussen. Til behandling i denne fase blev 2-CdA efterladt i 6 timer i kulturerne. For midler, der virker i en specifik fase af cellecyklussen, kan administrationssekvensen bestemme effektiviteten og toksiciteten af en kombinationsterapi (Smorenburg et al., 2001).

disse resultater er i overensstemmelse med dem, der er rapporteret af andre forfattere (Carson et al., 1983), hvilket antyder, at 2-CdA er inkorporeret i DNA, der producerer enkeltstrengede pauser (SSB ‘ er). SSB ‘ er kan opstå både direkte fra nedbrydning af beskadigede sukkerarter eller indirekte via spaltning af phosphodiester-rygraden. Direkte SSB ‘er stammer primært fra et angreb fra frie radikaler såsom reaktive iltarter, hvorimod indirekte SSB’ er hovedsageligt er normale mellemprodukter til DNA-baseudskæringsreparation (BER). SSB ‘ er er også de mest almindelige læsioner induceret af eksogene genotoksiner, såsom ioniserende stråling, alkyleringsmidler og topo1-giftcamptothecin og dets anticancerderivater (Caldecott, 2004).

nogle rapporter viser, at basisanalogen har brug for en længere periode for fosforylering at forekomme (Gandhi et al., 1997). Denne mekanisme kan forklare den øgede frekvens af totale kromosomafvigelser i S-fasen af cellecyklussen. Den samme mekanisme forekommer i celler behandlet med mitomycin C, En S-afhængig forbindelse, som kræver DNA-replikation for at omdanne DNA-skader til kromosomale aberrationer (Evans og Scott, 1964; Traganos et al., 1980). Andre antitumorale midler repræsenterer den samme mekanisme og virkning af 2-CdA, såsom fludarabin og 1-b-d-arabinosylcitosin (ara-C).

cytotoksiske nukleosidanaloger har en bred klinisk anvendelse. De var blandt de første kemoterapeutiske midler, der blev anvendt til behandling af ondartede sygdomme. Anticancernukleosiderne omfatter analoger af fysiologisk pyrimidin og purinnukleosider. Disse midler virker som antimetabolitter, der konkurrerer med naturlige nukleosider under DNA-eller RNA-syntese og som hæmmere af nøglecellesymmer., 2004), er s-specifikke og skal phosphoryleres for at aktivere triphosphater (Plunkett et al., 1980). I løbet af S-fasen af cellecyklussen, når det genetiske materiale duplikeres af DNA-replikationsmaskineriet, celler er især sårbare over for genotoksisk fornærmelse. Mens G1-og G2/M-kontrolpunkter arresterer cellecyklusprogression ved veldefinerede punkter gennem inhibering af cyclinafhængige kinaser, vides det, at intra-s-fase-kontrolpunkter forekommer når som helst inden for S-fasen og involverer flere signalveje (Sidorova og Breeden, 2003; Andreassen et al., 2003)

det er meget vigtigt at analysere mekanismen for lægemiddelrespons i forskellige faser af cellecyklussen. Det høje niveau af kromosomal læsion kan skyldes cytotoksiciteten af 2-CdA forårsaget af dets omdannelse til 2-CdATP, hvilket inducerer inhibering af DNA-syntese og DNA-reparation, der involverer ribonukleotidreduktase og DNA-polymeraser. Denne forbindelse viser resistens over for adenosindeaminase (ADA) aktivitet, som tildeles af et chloratom og udskiftning af hydrogen i position 2 af purinringadenosin (Balts og Montello, 1993).

SCE ‘ er betragtes ofte som en parameter til vurdering af genotoksicitet, fordi deres hyppighed klart øges ved eksponering for mange mutagene og kræftfremkaldende kemikalier. I det foreliggende forsøg viste frekvenserne af SCEs i kulturer behandlet med 2-CdA en lille stigning i forhold til kontrolkulturer. Stigningen observeret i begge faser varierede ikke signifikant.

da mange lægemidler aktiveres, efter at de er metaboliseret, anbefales in vivo mutagenicitetstest til vurdering af den klastogene aktivitet af de forbindelser, der kræver metabolisk aktivering. En sådan tilgang giver også lignende betingelser som dem, der findes hos mennesker (Legator og Afdeling Jr., 1991). Selvom der er forskelle mellem gnavere og mennesker, anbefales det, at enhver vurdering baseres på både in vitro-og in vivo-undersøgelser og ikke blot på nogen af dem (Huggett et al., 1996).

i den foreliggende undersøgelse blev den klastogene virkning af 2-CdA også analyseret i BALB/c-mus knoglemarvsceller i koncentrationer på 0,25, 0,375 og 0,5 mg/kg legemsvægt. Resultaterne viste, at 2-CdA ikke var effektiv til at inducere kromosomafvigelser. Manglen på effekt in vivo kan skyldes den begrænsede mængde 2-CdA til rådighed, fordi den blev doneret under fortyndede forhold. Genotoksiske virkninger af basisanalogen gemcitabin er rapporteret i musens knoglemarvsceller ved hjælp af testsystemerne mikronukleus og kromosomafvigelse. Aydemir og Bilaloglu (2003) viste, at gemcitabin ikke inducerede nogen signifikant CAs og hverken forårsagede reduktion i MI med en 6-timers behandlingsperiode ved doser på 2,0, 4,0 og 8,0 mg / kg legemsvægt sammenlignet med den negative kontrol; i modsætning hertil blev hyppigheden af total CAs signifikant øget med gemcitabin (p < 0, 0001) med en 24-timers behandlingsperiode med de samme doser.

afslutningsvis viste 2-CdA en klastogen virkning i humane lymfocytkulturer behandlet in vitro I S-fasen af cellecyklussen, men der blev ikke observeret signifikant klastogen effekt i celler behandlet i G1-og G2-faserne. I In vivo-analysen hos mus viste 2-CdA ingen klastogen effekt ved de testede dosisniveauer.

anerkendelser

vi er taknemmelige for Prof. Sakamoto Hojo og Dr. Lusania G. Antunes for værdifulde kommentarer til manuskriptet og til Mr. Augusto da Costa Jr., Mr. Silvio A. dos Santos og Fru Sueli A. Neves for værdifuld teknisk assistance. CAPES og FAPESP proces n. 99/10643 – 7 støttede denne forskning. Forskningsetikudvalget godkendte projektet (proces: CONEP n. 25000.074430/2001-88).

Andreassen PR, Od og Margolis RL (2003) G2-og spindelmonteringskontroltilpasning og tetraploidi-anholdelse: implikationer for iboende og kemisk induceret genomisk ustabilitet. Mutat Res 532: 245-53.

Aydemir N og Bilaloglu R (2003) genotoksicitet af to lægemidler mod kræft, gemcitabin og topotecan, i knoglemarv hos mus in vivo. Mutat Res 537: 43-51.

Balts JK og Montello MJ (1993) cladribin til behandling af hæmatologiske maligniteter. Klinisk Apotek 12: 805-813.

Caldecott KV (2004) DNA-enkeltstrengede brud og neurodegeneration. DNA reparation (Amst) 3: 875-82.

Carson da, VARSON DB, Taetle R og Yu A (1983) specifik toksicitet af 2-chlorodeoksyadenosin mod hvile og prolifererende humane lymfocytter. Blod 62: 737-743.

Degrassi F, de Salvia R, Tansarella C og Palitti F (1989) induktion af kromosomafvigelser og SCE af camptothecin, en hæmmer af pattedyrs topoisomerase I. Mutat Res 211:125-130.

Evans HJ og Scott D (1964) indflydelse af DNA-syntese på produktionen af kromatidaberrationer ved hjælp af røntgenstråler og maleinhydracid i Vicia faba Genetics 49:17-38.

Ford CE og Hamerton JL (1956) en colchicinhypotonisk citratkvassekvens for pattedyrskromosomer. Technol 3: 247-251.

Galmarini CM, Mackey JR og Dumontet C (2001) nukleosidanaloger: Mekanismer for lægemiddelresistens og reverseringsstrategier. Leukæmi 15: 875-890.

Gandhi V, Huang P, Chapman Aj, Chen F og Plunkett V (1997) inkorporering af fludarabin og 1-beta-D-arabinofuranosylcytosin 5 ‘ triphosphater af DNA-polymerase alfa: affinitet, interaktion og konsekvenser. Clin Kræft Res 3: 1347-1355.

genini D, Adachi S, Chao K, Rose DV, Carrera CJ, Cottam HB, Carson DA og Leoni LM (2000) deoksyadenosinanaloger inducerer programmeret celledød i kroniske lymfocytiske leukæmiceller ved at beskadige DNA ‘ et og ved direkte at påvirke mitokondrierne. Blod 96:3537-3543.

Huggett AC, Schilter B, Roberfroid M, Antignac E og Koeman JH (1996) sammenlignende metoder til toksicitetstest. Fødevarer Chem Toksikol 34: 183-92.

Korenberg JR og Freedlender EF (1974) Giemsa teknik til påvisning af søsterkromatidudvekslinger. Kromosomer 48: 355-360.

Laurencet FM, GUETTY-Alberto M, Iten PA, Betticher DC og Alberto P (1999) cladribin med cyclophosphamid og prednison til behandling af lymfoproliferative maligniteter af lav kvalitet. Br J Hæmatol 79: 1215-1219.

Legator MS og Afdeling Jr JB (1991) anvendelse af in vivo genetiske toksicitetsdata til risikovurdering. Mutat Res 250: 457-465.

Liliemark J og Juliusson G (1994) 2-chlor-2′-deoksyadenosin-kliniske, biokemiske og farmakokinetiske overvejelser. 42:7-10.

Mathe S, Lorsbach RB, Shearer P, Sandlund JT og Raimondi SC (2000) dobbelt minutters kromosomer og C-MYC-amplifikation hos et barn med sekundært myelodysplastisk syndrom efter behandling for akut lymfoblastisk leukæmi. Leukæmi 14: 1314-5.

Moore RC og Bender MA (1993) tidssekvens af begivenheder, der fører til dannelse af kromosomal aberration. Environ Mol Mutagen 22: 208-213.

Moorhead PS, Nuell PC, Mellman, Battipps DM og Hungerford DA (1960) Kromosompræparat af leukocytter dyrket fra perifert blod. Eksp Celle Res 20: 613-616.

Natarajan at, Balajee AS, Boei JJ, Darroudi F, Domingues i, Hande MP, Meijers M, Slijepcevic P, Vermeulen S og Y (1996) mekanismer til induktion af kromosomafvigelser og deres påvisning ved in situ hybridisering. Mutat Res 372: 247-58.

Perry PE og Ulff S (1974) ny Giemsa-metode til differentiel farvning af søsterkromatider. Natur 251: 156-158.

Plunkett V, Chubb S, Aleksandr L og Montgomery JA (1980) sammenligning af toksicitet og metabolisme af 9-b-d-arabinofuranosyl-2-fluoradenin og 9-b-d-arabinofuranosyladenin i humane lymfoblastoide celler. Kræft Res 40: 2349-55.

Pott-Hoeck C og Hiddemann h (1995) Purinanaloger til behandling af lavgradige lymfomer og kroniske lymfocytiske leukæmier. Ann Oncol 6: 421-433.

Preston RJ, Dean BJ, Galvay S, Holden H, McFee AF og Shelby M (1987) cytogenetiske analyser af pattedyr in vivo. Analyse af kromosomafvigelser i knoglemarvsceller. Mutat Res 189: 157-65.

Robak T (2001) cladribin til behandling af kronisk lymfocytisk leukæmi. Leuk Lymfom 40: 551-564.

Robak T, G Kurra-Tybor J, Urbanska H og Krikovski E (1999) Kombinationsregime af 2-chlorodeoksyadenosin (cladribin), mitoksantron og deksamethason (CMD) til behandling af refraktært og tilbagevendende non-Hodgkin lymfom af lav kvalitet. Leuk Lympho 32: 359-363.

Robertsson LE, Chubb S, Meyn RE, Story M, Ford R, Hitelman og Plunkett V (1993) induktion af apoptosecelledød ved kronisk lymfocytisk leukæmi med 2-chlor-2′-deoksyadenosin og 9-b-d-arabinosyl-2-fluoradenin. Blod 81:143-150.

Schrimer M, Mur E, Pfeiffer KP, Thaler J og Konvalinka G (1997) sikkerhedsprofilen for lavdosis cladribin ved refraktær reumatoid artrit. Et pilotforsøg. Scand J Rhematol 26:376-379.

Sidorova JM og Breeden LL (2003) Ældre G1/s overgange og genomisk ustabilitet: oprindelsesforbindelsen. Mutat Res 532: 5-19.

Smorenburg CH, Sparreboom A, Bontenbal M og Vervij J (2001) kombinationskemoterapi af taksaner og antimetabolitter: dets anvendelse og begrænsninger. Eur J Kræft 37: 2310-23.

Ssafraniec SI, Stachnik KJ og Skierski JS (2004) nye nukleosidanaloger til behandling af hæmatologiske lidelser. Acta Pol Pharm 61: 223-32.

Tallman MS, Hakimian D, Hogan D og Petersen L (1993) 2-Chlorodeoksyadenosin til behandling af hårcelleleukæmi (HCL): påvisning af minimal restsygdom (MRD) ved immunfarvning (IS). Præsenteret på det 8. Symposium om Molekylærbiologi af hæmatopoiesis i Basel, 9.-13. Juli.

Tallman MS, Hakimian D, Variakojis D, Koslo D, Sisney GA, Rademaker av, Rose E og Kaul K (1992) en enkelt cyklus med 2-chlorodeoksyadenosin resulterer i fuldstændig remission hos de fleste patienter med hårcelleleukæmi. Blod 80: 2203-2209.

Traganos F, Staiano-Coico L og Melamed MR (1980) virkninger af ellipticin på celleoverlevelse og cellecyklusprogression i dyrkede pattedyrceller. Kræft Res 40: 2390-2399.

Kaspers GJL. Pieters R, H R, Huismans DR, Harbott J, Slater RM, Creutsig U og Veerman AJP (2002) cellulær lægemiddelresistens i barndommen akut myeloid leukæmi er relateret til kromosomale abnormiteter. Blod 100: 3352-3360.