Komplementafhængig cytotoksicitet

terapeutiske antistofferredit

udvikling af antitumorterapeutiske antistoffer involverer in vitro analyse af deres effektorfunktioner, herunder evne til at udløse CDC til at dræbe målceller. Klassisk tilgang er at inkubere antistoffer med målceller og kilde til komplement (serum). Derefter bestemmes celledød med flere tilgange:

• radioaktiv metode: målceller er mærket med 51cr før CDC-analyse, krom frigives under cellelyse, og mængden af radioaktivitet måles.
• måling af den metaboliske aktivitet af levende celler (farvning af levende celler): efter inkubation af målceller med antistoffer og komplement tilsættes plasmamembranpermeabelt farvestof (f.eks. Levende celler metaboliserer det til uigennemtrængeligt fluorescerende produkt, der kan detekteres ved strømningscytometri. Dette produkt kan ikke dannes i metabolisk inaktive døde celler.
• måling af aktiviteten af frigivne intracellulære celler: døde celler frigiver f. eks. LDH eller GAPDH) og tilsætning af dets substrat fører til farveændring, der normalt kvantificeres som ændring af absorbans eller luminiscens.
• døde celler farvning: et (fluorescerende) farvestof kommer ind i de døde celler gennem deres beskadigede plasmamembran. For eksempel binder propidiumiodid til DNA fra døde celler, og fluorescerende signal måles ved strømningscytometri.

HLA typing and crossmatch testEdit

CDC-analyser bruges til at finde en passende donor til organ-eller knoglemarvstransplantation, nemlig donor med matchende fænotype af histokompatibilitetssystem HLA. Først udføres HLA-typning for patient og donor for at bestemme deres HLA-fænotyper. Når der findes potentielt egnet par, crossmatch-test udføres for at udelukke, at patienten producerer donorspecifikke anti-HLA-antistoffer, hvilket kan forårsage transplantatafstødning.

CDC-form for HLA-typning (andre ord serologisk typning) bruger batch af anti-HLA-antistoffer fra karakteriserede allogene antisera-eller monoklonale antistoffer. Disse antistoffer inkuberes en efter en med patientens eller donorens lymfocytter og kilde til komplement. Mængden af døde celler (og dermed positivt resultat) måles ved døde eller levende celler farvning. I dag erstattes CDC-typning med molekylær typning, som kan identificere nukleotidsekvenser af HLA-molekyler via PCR.

CDC-analyse bruges normalt til at udføre crossmatch-test. Den grundlæggende version involverer inkubation af patientens serum med donorens lymfocytter og anden inkubation efter tilsætning af kaninkomplement. Tilstedeværelse af død celle (positiv test) betyder, at donor ikke er egnet til denne særlige patient. Der er modifikationer til rådighed for at øge testfølsomheden, herunder forlængelse af minimal inkubationstid, tilsætning af antihuman globulin (AHG), fjernelse af ubundne antistoffer før tilsætning af komplement, adskillelse af T-celle og B-celle delmængde. Udover CDC crossmatch er der strømningscytometrisk crossmatch tilgængelig, der er mere følsom og kan detektere endda komplementere ikke-aktiverende antistoffer.