kvantificering af ROS-niveauer ved hjælp af CM-H2DCFDA og HyPer

ved lave niveauer kan reaktive iltarter (ROS) fungere som signalmolekyler i celler. Når ROS-produktionen i høj grad overstiger kapaciteten af endogene antioksidantsystemer, eller antioksidantniveauer reduceres, øges ROS-niveauerne yderligere. Sidstnævnte er forbundet med induktion af oksidativ stress og tilhørende signaltransduktion og karakteriseret ved ROS-inducerede ændringer i cellulær homeostase og/eller skadelige virkninger på biomolekyler (f. eks. DNA, proteiner og lipider). I betragtning af de komplekse mekanismer, der er involveret i ROS-produktion og fjernelse, i kombination med manglen på reportermolekyler, der virkelig er specifikke for en bestemt type ROS, er kvantificering af (sub)cellulære ROS-niveauer en udfordrende opgave. I dette kapitel beskriver vi to strategier til måling af ROS: one approach to assess general oxidant levels using the chemical reporter CM-H2DCFDA (5-(and-6)-chloromethyl-2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate), and a second approach allowing more specific analysis of cytosolic hydrogen peroxide (H2O2) levels using protein-based sensors (HyPer and SypHer).