Fortolkning af kvantitativ Cytomegalovirus DNA-test: forståelse af Laboratorieperspektivet | Jiotower
analytiske Testkarakteristika
der er præstationsegenskaber ved virale belastningstest, der skal forstås for korrekt anvendelse og fortolkning af testresultater. Disse inkluderer detektionsgrænsen (LOD), nedre og øvre lokalitet, lineært interval, præcision (Reproducerbarhed) og nøjagtighed. LOD, defineret som den laveste koncentration af DNA, der kan påvises i 95% af replikater, anvendes typisk til kvalitative molekylære tests; imidlertid kan udtrykket også anvendes på kvantitative virale belastningstest. De øvre og nedre Lok ‘ er er de højeste og laveste koncentrationer af DNA, der kan kvantificeres med “acceptabel præcision” . I øjeblikket er der ingen aftalt definition for “acceptabel præcision”; derfor definerer individuelle laboratorier dette lokalt. Den måde, hvorpå “acceptabel præcision” defineres, kan i høj grad påvirke lokummet. LOD kan svare til den nedre Loke, eller den kan være lavere end den nedre Loke. I sidstnævnte situation kan testen detektere CMV DNA, men værdien kan ikke kvantificeres nøjagtigt. I disse tilfælde kunne laboratoriet rapportere resultatet som” opdaget, men under Loken”; nogle laboratorier rapporterer dette som ” lavt positivt.”Laboratoriet skal være i stand til at levere både LOD og Lok; for eksempel i vores laboratorium er LOD for CMV viral load test 100 kopier/mL, mens Lok er 300 kopier/mL. Efter konsultation med klinikere blev det besluttet at rapportere værdier på 100-300 kopier/mL som “lave positive” resultater, mens de >300 kopier/mL rapporteres som en heltalsværdi.
selvom meget følsomme molekylære tests ofte er vigtige for påvisning af infektiøse patogener, er dette muligvis ikke tilfældet for CMV DNA-test. Den kliniske betydning af lave niveauer af CMV-DNA (< 100-500 kopier/mL) kan være vanskelig at fortolke, især hvis der testes fuldblodsprøver, fordi lave niveauer af CMV-DNA i fuldblod eller plasma ikke altid korrelerer med sygdomsudviklingen. Nogle undersøgelser er blevet udført for at bestemme tærsklen for behandling, herunder en naturhistorisk undersøgelse af CMV-sygdom hos levertransplantationsmodtagere . Ved hjælp af COBAS Amplicor Monitor-testen (Roche Molecular Diagnostics) viste forfatterne, at en viral belastningsværdi på 2000-5000 kopier/mL korrelerede med udviklingen af endorgan-sygdom. Denne afskæringsværdi er testafhængig og kan være højere eller lavere for andre ldt ‘ er. Undersøgelser har også vist, at både viral belastningsværdi og ændringshastigheden i viral belastning er vigtige forudsigere for udviklingen af aktiv sygdom . Jo hurtigere stigningen i viral belastningsværdi er, desto større er risikoen for at udvikle CMV-sygdom. Når testene er kalibreret med den internationale standard, kan en universel klinisk relevant LOD og lavere Lok identificeres. Baseret på aktuelt tilgængelige data og erfaringer kan 250-500 IE/mL være en passende LOD og/eller lavere Lok.
da de fleste ldt ‘ er bruger polymerasekædereaktionsteknologier i realtid, er det lineære interval for CMV-virusbelastningstest normalt mindst 6 log10; for eksempel kan testen detektere fra 2,0 log10 kopier/mL (100 kopier/mL) til 7,0 log10 kopier/mL (10 millioner kopier/mL). En gennemgang af CMV viral load test udført i 2009 på Emory Medical Laboratories viste, at af de cirka 8500 CMV DNA viral load test udført på plasmaprøver, 671 (7,9%) var positive. Af disse var 394 (58,7%) <1000 kopier/mL, 169 (25,2%) mellem 1000 og 10 000 kopier/mL og 63 (9,4%) mellem 10 000 og 100 000 kopier/mL. Derudover havde 45 (6,7%) en CMV DNA-viral belastning på >100 000 kopier/mL. Selvom lave virale belastningsværdier er almindelige, er deres kliniske betydning uklar. Meget høje virusbelastningsværdier er ualmindelige, og når de forekommer, ses de normalt hos immunsupprimerede patienter med primær CMV-infektion eller hos dem med meget alvorlig sygdom. Da virale belastningsværdier så høje som 10 millioner kan være til stede hos nogle individer, bør den øvre grænse for kvantificering af en test være i dette interval.
fortolkningen af vigtige forskelle i langsgående virale belastningsværdier hos en individuel patient kræver en forståelse af testens præcision eller Reproducerbarhed. Typisk er variabiliteten af virusbelastningstest størst nær den nedre og øvre lok og lavest i det midterste interval af analysen. Som et resultat er små ændringer i lave virale belastningsværdier ikke signifikante; for eksempel findes der ingen klar forskel mellem resultaterne hos en patient, hvor den virale belastningsværdi er steget fra 200 kopier/mL til 500 kopier/mL, fordi denne forskel er inden for variabiliteten af analysen. De mest nyttige data vedrørende klinisk vigtige ændringer i virale belastningsværdier kommer fra erfaring med HIV-1. For disse FDA-godkendte tests varierer testens variabilitet fra 0,1 log10 kopier/mL til 0,2 log10 kopier/mL sammenlignet med den biologiske variabilitet observeret hos kronisk inficerede ubehandlede individer, hvilket er omkring 0,3 log10 kopier/mL. Derfor antages ændringer i viral belastning på > 0,5 log10 kopier/mL at repræsentere biologisk vigtige ændringer i viral replikation. Selvom værdien 0,5-log10 kopier/mL er blevet bredt vedtaget til brug sammen med mange andre virale patogener, er den muligvis ikke nøjagtig for CMV. Fordi den biologiske variation af CMV ikke er kendt, vigtige ændringer i virale belastningsværdier er historisk blevet vurderet ud fra testvariabiliteten. Yderligere arbejde med HIV-1 viste, at testens SD skulle være 0, 15 log10 kopier/mL for at skelne 5 gange ændringer i virale belastningsværdier . For CMV ldt ‘ er forventes variabiliteten af analysen ikke at være bedre end det, der ses for de FDA-godkendte HIV-1 virale belastningstest, og det kan godt være højere, især nær den nedre LOC . Derfor, når der detekteres CMV virale belastningsværdier på <1000 kopier/mL, ændres <5 gange (0.7 log10) vil sjældent afspejle klinisk vigtige ændringer i viral replikation. For værdier > 1000 kopier/mL kan 3 gange (0,5 log10) ændringer i viral belastning være signifikante, selvom dette kan variere blandt ldt ‘ er. Nogle centre rapporterer virale belastninger som kopier/mL og som log10 kopier / mL, fordi klinikere kan være mindre tilbøjelige til at overfortolke små ændringer i virale belastningsværdier, når de udtrykkes som log10-værdier.
en baseline-prøve til viral belastningstest skal indsamles den dag, CMV-behandling påbegyndes, selvom CMV-viral belastningstest blev udført et par dage tidligere. Hurtige stigninger i CMV-virusbelastninger kan forekomme over et par dage hos patienter med ubehandlet sygdom, hvilket gør det vigtigt at have CMV-virusbelastningsværdien på behandlingstidspunktet. Hvis virusbelastningsværdierne overstiger den øvre Lok, anbefales det, at laboratoriet fortynder prøven for at bestemme den faktiske virusbelastningsværdi. Når behandlingen er påbegyndt, er det ideelle interval for overvågning ugentligt, fordi halveringstiden for CMV-DNA i plasma er 3-8 dage . En anden grund til at bruge dette interval er, at det ikke er ualmindeligt, at CMV-DNA-virusbelastningen øges hos en patient et par dage efter påbegyndelse af behandlingen, og dette kan fortolkes fejlagtigt som behandlingssvigt. Da patienter med vedvarende DNA i plasma eller fuldblod har øget risiko for tilbagefald , anbefaler de nuværende retningslinjer fortsat antiviral behandling, indtil virale belastningsværdier ikke kan påvises. Nogle patienter har vedvarende lave niveauer af CMV-DNA i plasma eller fuldblod og udvikler aldrig CMV-sygdom eller tilbagefald. Hos disse individer er det mere nyttigt at følge tendenser i virale belastningsværdier over tid end at vurdere betydningen af en given viral belastningsværdi. Virale belastningsmønstre , der er bekymrende for lægemiddelresistent virus, inkluderer dem, der ikke falder efter 2 ugers tilstrækkelig terapi, dem med et plateau i hastigheden af viral belastningsnedgang, og dem, der har et indledende fald og derefter en efterfølgende stigning i viral belastning under behandling. Disse patienter skal evalueres for resistent virus ved sekventering af UL97-og/eller UL54-generne (polymerase) direkte fra en plasmaprøve.
CMV DNA virale belastningstest er designet således, at de ikke krydsreagerer med andre herpesvirus. I en immunkompromitteret patient afspejler påvisning af 2 herpesvirus, for eksempel CMV og Epstein-Barr-virus, reaktivering af begge vira og skyldes ikke krydsreaktivitet.
