Klinisk udførelse af Roche Cobas 4800 HPV-Test | Jiotower

tekst

humant papillomavirus (HPV) er en af de mest almindelige seksuelt overførte vira på verdensplan og en stor bidragyder til kræft, hvilket forårsager næsten 60.000 nye kræfttilfælde om året i Europa (1) og fører til udvikling af livmoderhalskræft hos kvinder. HPV16 og HPV18 er de mest kræftfremkaldende (2, 3), Da ca.70% af alle livmoderhalskræft er til stede med HPV16 eller HPV18 infektioner (4). Næsten 30% af livmoderhalskræft savnes ved indledende screening af cervikal cytologi (5), så nøjagtige og objektive tests for HPV-associeret livmoderhalskræft, der bruger mere følsomme molekylære teknikker, er nødvendige for at tilvejebringe effektiv forebyggelse og behandling for at reducere fremtidige risici og forekomst af livmoderhalskræft.

Roche Cobas 4800 HPV-test (Cobas) er en ny molekylær metode baseret på realtids PCR (RT-PCR) (6, 7) Med et fuldautomatisk system, der muliggør hurtig og effektiv prøvebehandling. Cobas kan registrere HPV16, HPV18, 12 andre højrisiko HPV ‘er (HRHPV’ er) (HPV31, -33, -35, -39, -45, -51, -52, -56, -58, -59, -66, og -68, som et samlet resultat), og den samme PCR-styrende kontrol er uafhængig af den samme globin. Det primære formål med vores undersøgelse var at evaluere Cobas ‘ tekniske og kliniske præstationsegenskaber. Cervikale prøver fra 6.056 kvinder henvist til Institut for patologi ved Icahn School of Medicine på Mount Sinai til rutinemæssig undersøgelse af cervikale læsioner mellem November 2011 og februar 2012 blev indsamlet i et væskebaseret cytologimedium (PreservCyt; Hologic, Marlborough, MA) og opbevares ved 4 liter C indtil brug.

hundrede og firs prøver blev testet for hrhpv-genotyper ved både Roche Cobas 4800 HPV-test og Digene Hybrid Capture 2 (HC2) HRHPV DNA-test (tabel 1), Hvor eventuelle uoverensstemmelser blev løst ved hjælp af Linear Array (LA) HPV-genotypetest (Roche Molecular Systems, Pleasanton, CA) (8). Ifølge Pearsons chi-kvadrat-test var der en signifikant forskel i antallet af positive og negative prøver identificeret ved de to HPV-tests (P < 0,001). Imidlertid var overensstemmelsen mellem de to tests statistisk stærk med et aftaleniveau på 88,33% (P = 0,0218) og Cohens kappa-koefficient på 0,767 (95% konfidensinterval, 0,674 til 0,860; P < 0,001), hvor 95% konfidensintervaller for kappa-værdierne blev udledt fra en binomial fordeling.

i de uoverensstemmende prøver påviste la HPV-testen HPV-genotyper med lav risiko (lrHPV) i 50% (2/4) af prøverne, der var HC2-positive og Cobas-negative og hos 13,33% (2/15) af de prøver, der var HC2-negative og Cobas-positive. HPV53 blev fundet i to prøver, der var HC2-positive og Cobas-negative, hvilket antyder, at proberne i Digene-kittet krydsreagerede med denne HPV-genotype. Denne observation er ikke overraskende, da KRYDSREAKTIVITETEN af HC2-testen med lrHPV-genotyper, specifikt HPV53, tidligere blev observeret (9). Konsekvensen af lrhpv genotype krydsreaktivitet i en HPV-test er et øget antal falsk-positive resultater. Dette kan føre til overundersøgelse og overbehandling gennem opfølgningstest af kvinder, der kun har lrhpv-genotyper og faktisk har lav risiko for at udvikle livmoderhalskræft. I to HC2-negative/Cobas-positive prøver blev HPV62 og HPV89 (CP6108) påvist i begge prøver, og HPV42, HPV54, HPV55, HPV61, HPV70 og HPV84 blev påvist i en af prøverne, hvilket antyder, at Blandet HPV-infektion fører til falske positive resultater ved Cobas HPV-testen.

LA HPV-testen påviste hrhpv-genotyper i ingen af prøverne, der var HC2-positive og Cobas-negative (0/4), og i 80% (12/15) af prøverne, der var HC2-negative og Cobas-positive. HC2-testen kunne ikke påvise hrHPV i disse prøver, hvilket indikerer, at HC2-testen savnede flere hrhpv-genotyper end Cobas-testen, hvilket antyder, at Cobas er et potentielt mere effektivt screeningsassay på grund af bedre følsomhed og nøjagtighed. I modsætning hertil blev HPV ikke påvist ved La HPV-testen i 6,67% (1/15) af de HC2-negative/Cobas-positive prøver. Samlet set var forskellen i detektion af hrHPV mellem HC2-og Cobas-test dog stadig statistisk ubetydelig (kr2 = 2,901, P = 0,0885).

otteogtres prøver blev derefter brugt til at bestemme reproducerbarheden af Cobas HPV-testen. Reproducerbarheden mellem de indledende og gentagne tests, som beregnet med en standard 2-til-2 beredskabstabel, var 93,55%; kappa-koefficienten mellem resultaterne af den første og anden runde af Cobas-test var 0,869 (95% CI, 0,744 til 0,993; P < 0,001). Styrken af denne aftale betragtes som meget god, hvilket tyder på, at analysen er meget pålidelig.

hundrede syvogfirs prøver blev testet ved Cobas HPV-testen for at bestemme forskellen i HPV-detektion mellem præalitiserede og postalitiserede prøver. Kun 7 prøver var uoverensstemmende med en hastighed på 3,74% (95% CI, 1,02% til 6,46%). Statistisk analyse viste, at forskellen mellem præalitiserede og postalitiserede prøver ikke var signifikant (LR2 = 0,233, P = 0,36290). Da der ikke blev observeret nogen stigning i HPV-positiv rate før og efter cytologiprocessen (præalivot versus postalivot), er krydskontaminering af prøver under cytologibehandling ekstremt sjælden. HPV-test efter cytologi kan forbedre arbejdsgangen betydeligt og reducere unødvendig aliktering, når en refleks HPV-test for unormal cytologi er beregnet.

endelig blev 5.621 prøver testet ved hjælp af Cobas HPV-testen for at bestemme virkningerne af hvirvel og hvirvlende (før Cobas-test) på svigtfrekvenser. Blandt 1.380 prøver behandlet ved hvirvel var fejlfrekvensen 4.57% (95% CI, 3, 65% til 5, 91%). I modsætning hertil var fejlfrekvensen blandt 4.241 prøver behandlet ved hvirvling 1,16% (95% CI, 0,84% til 1,48%). Pearsons chi-kvadrat-test afslørede, at forskellene i fejlfrekvenserne mellem hvirvlede og forsigtigt hvirvlede prøver var ekstremt signifikante (lyr2 = 59.983, P < 0.0001), hvor blid hvirvling anbefales for at reducere Cobas’ fejlrate.

afslutningsvis viste Cobas 4800 HPV-testen en større grad af følsomhed og specificitet ved påvisning af hrhpv-genotyper end Digene HC2 hrhpv-testen. Cobas-testen havde også et lavere niveau af krydsreaktivitet med lrHPV-genotyper end HC2-testen, hvilket fremgår af de færre falsk-positive tilfælde. Forskellen i den samlede præstation mellem disse to tests er imidlertid statistisk ikke signifikant.