Cytotoxicité dépendante du complément
Anticorps thérapeutiques
Le développement d’anticorps thérapeutiques antitumoraux implique une analyse in vitro de leurs fonctions effectrices, y compris leur capacité à déclencher la destruction des cellules cibles par les CDC. L’approche classique consiste à incuber des anticorps avec des cellules cibles et une source de complément (sérum). Ensuite, la mort cellulaire est déterminée avec plusieurs approches:
- Méthode radioactive: les cellules cibles sont marquées avec 51Cr avant le test CDC, le chrome est libéré pendant la lyse des cellules et la quantité de radioactivité est mesurée.
- Mesure de l’activité métabolique des cellules vivantes (coloration des cellules vivantes): après incubation des cellules cibles avec des anticorps et du complément, un colorant perméable à la membrane plasmique est ajouté (par exemple calcéine-AM ou résazurine). Les cellules vivantes le métabolisent en un produit fluorescent imperméable qui peut être détecté par cytométrie en flux. Ce produit ne peut pas être formé dans les cellules mortes métaboliquement inactives.
- Mesure de l’activité des enzymes intracellulaires libérées : enzyme de libération des cellules mortes (p. ex. LDH ou GAPDH) et l’ajout de son substrat entraîne un changement de couleur, qui est généralement quantifié comme un changement d’absorbance ou de luminiscence.
- Coloration des cellules mortes: un colorant (fluorescent) pénètre à l’intérieur des cellules mortes à travers leur membrane plasmique endommagée. Par exemple, l’iodure de propidium se lie à l’ADN des cellules mortes et le signal fluorescent est mesuré par cytométrie en flux.
Test de typage et d’appariement HLADIT
Les tests CDC sont utilisés pour trouver un donneur approprié pour une greffe d’organe ou de moelle osseuse, à savoir un donneur avec un phénotype correspondant du système d’histocompatibilité HLA. Au début, le typage HLA est effectué pour que le patient et le donneur déterminent leurs phénotypes HLA. Lorsqu’un couple potentiellement approprié est trouvé, un test de correspondance croisée est effectué pour exclure que le patient produise des anticorps anti-HLA spécifiques au donneur, ce qui pourrait provoquer le rejet du greffon.
La forme CDC de typage HLA (autres termes typage sérologique) utilise un lot d’anticorps anti-HLA à partir d’anticorps antisérums allogéniques caractérisés ou monoclonaux. Ces anticorps sont incubés un par un avec les lymphocytes du patient ou du donneur et la source du complément. La quantité de cellules mortes (et donc le résultat positif) est mesurée par la coloration des cellules mortes ou vivantes. De nos jours, le typage CDC est remplacé par le typage moléculaire, qui permet d’identifier les séquences nucléotidiques des molécules HLA via la PCR.
Le test CDC est généralement utilisé pour effectuer un test de correspondance croisée. La version de base implique une incubation du sérum du patient avec les lymphocytes du donneur et une deuxième incubation après l’ajout d’un complément de lapin. La présence de cellules mortes (test positif) signifie que le donneur ne convient pas à ce patient particulier. Il existe des modifications disponibles pour augmenter la sensibilité du test, notamment l’extension du temps d’incubation minimal, l’ajout de globuline antihumaine (AHG), l’élimination des anticorps non liés avant l’ajout du complément, la séparation du sous-ensemble des lymphocytes T et des lymphocytes B. Outre le crossmatch CDC, il existe un crossmatch cytométrique en flux, qui est plus sensible et peut détecter même les anticorps non activateurs du complément.
