Expression de la cytokératine 5/6 et de la cytokératine 8/18 dans les cancers du sein triples négatifs: signification clinicopathologique dans la population d’Asie du Sud

Méthodes

Total 150 cas de TNBC ont été sélectionnés à partir des archives des services de pathologie. Les échantillons chirurgicaux comprenaient des mastectomies radicalaires modifiées, des mastectomies simples et de larges excisions locales avec dissection des ganglions lymphatiques sentinelles. Tous les patients ont subi des interventions chirurgicales à l’hôpital national Liaquat de Karachi de janvier 2008 à décembre 2013 sur une période de 6 ans. L’étude a été approuvée par le comité de recherche et d’examen éthique de l’établissement et le consentement éclairé a été obtenu de tous les patients au moment de la chirurgie. Des lames colorées à l’hématoxyline et à l’éosine et des blocs de paraffine des caisses ont été récupérés et de nouvelles sections ont été coupées si nécessaire. Les diapositives de tous les cas ont été examinées par deux histopathologues chevronnés et des caractéristiques pathologiques telles que le type histologique, le grade tumoral, le stade T, le stade N, l’invasion lymphovasculaire, la nécrose, la fibrose, l’infiltration lymphocytaire (lymphocytes infiltrant la tumeur), la présence de composant insitu, la propagation pagétoïde et l’invasion lymphatique cutanée ont été évaluées. Les dossiers cliniques de tous les patients ont également été examinés à partir des dossiers institutionnels pour évaluer l’âge du patient, les antécédents de radiothérapie et de chimiothérapie et l’état de récidive. De plus, des blocs représentatifs de chaque cas ont été sélectionnés et des immunohistochimies ER, PR et Her2neu ont été effectuées pour reconfirmer le statut triple négatif.

ER, PR, Her2neu et Ki67 IHC ont été réalisés à l’aide d’anticorps DAKO as under, avec le kit DAKO à pH élevé EnVision™ FLEX selon le protocole du fabricant.

1. Récepteur d’oestrogène anti-humain de lapin monoclonal FLEX alpha, clone EP1.

2. Souris monoclonale FLEX clone du récepteur de la progestérone anti-humaine PgR 636.

3. Oncoprotéine polyclonale anti-humaine c-erbB-2 de lapin.

4. Clone d’antigène Ki67 anti-humain de souris monoclonale FLEX MIB-1.

La coloration nucléaire de l’ER et de la PR dans > 1% des cellules cancéreuses a été considérée comme positive. Pour her2neu, les cas ont été notés 1+, 2+ et 3+ selon les lignes directrices du PAC. Pour les cas équivoques (2+), le FISH a été effectué à l’aide du kit de sonde Path Vysion Her2neu selon les protocoles du fabricant. Les résultats ont été exprimés en rapport des signaux her2neu par rapport aux signaux CEP17 selon les lignes directrices ASCO/CAP.

L’immunomarquage Ki67 a été enregistré en tant que variables continues basées sur la proportion de cellules cancéreuses colorées positives. De plus, sur la base de l’indice Ki67, les cas ont été classés en catégories < 15, 16-24, 25-44 et > 44% de l’indice ki67.

L’IHC CK5/6 a été réalisée en utilisant la Cytokératine 5/6 Anti-humaine de Souris monoclonale FLEX, clone D5/16 B4 par la méthode DAKO envision selon le protocole des fabricants. Une coloration cytoplasmique et membraneuse intermédiaire à forte dans plus de 10% des cellules a été considérée comme positive. Une coloration faible à intermédiaire chez < 10% a été considérée comme positive focale, alors qu’aucune coloration n’a été considérée comme négative (fichier supplémentaire 1: Figure S1).

L’IHC CK 8/8 a été réalisée en utilisant la cytokératine 5/6 anti-humaine de souris monoclonale, clone D5/16 B4, selon la méthode DAKO envision. Une coloration cytoplasmique et membraneuse intermédiaire à forte dans plus de 50% des cellules a été considérée comme positive. Une coloration faible à intermédiaire (cytoplasmique, avec perte de réactivité membranaire) chez 10-50% a été considérée comme focale positive, tandis qu’aucune coloration ou coloration faible chez < 10% n’a été considérée comme négative (fichier supplémentaire 1: Figure S1).

L’état de récidive et le suivi ont été évalués en examinant le dossier médical de l’hôpital. La survie globale a été prise comme le temps entre l’excision chirurgicale et le décès ou le dernier suivi et la survie sans maladie a été définie comme le temps entre l’excision chirurgicale et la récidive locale ou les métastases à distance, le décès ou le dernier suivi.

Le paquet statistique pour les sciences sociales (SPSS 21) a été utilisé pour la compilation et l’analyse des données. La moyenne et l’écart type ont été calculés pour les variables quantitatives. La fréquence et le pourcentage ont été calculés pour les variables qualitatives. Le Chi carré a été appliqué pour déterminer l’association. Le test t de Student ou le test de Mann whitney ont été appliqués pour comparer les différences de moyennes entre les groupes. Valeur P ≤ 0,05 comme significative. Les courbes de survie ont été tracées à l’aide de la méthode de Kaplan–Meier et l’importance de la différence entre les courbes de survie a été déterminée à l’aide du rapport log-rang. Valeur P ≤ 0.05 a été considéré comme significatif.

Résultats

L’âge moyen des patients impliqués dans l’étude était de 48,9 ans et le groupe d’âge le plus courant était de 31 à 50 ans. La plupart des patients présentaient au stade T2 un indice ki67 moyen élevé soit 46,9%. 42,7% des cas présentaient des métastases nodales. Bien que 84% des cas étaient de carcinome canalaire invasif conventionnel, NST; cependant, une proportion significative des cas étaient d’histologie métaplasique (9,3%). La majorité des cas étaient de grade élevé (86,7 % de grade III). La plupart des tumeurs présentent une infiltration lymphocytaire et une nécrose. La plupart des tumeurs manquent de composant insitu (61%). Une récidive locale ou des métastases tardives à distance ont été observées dans 17,8 % des cas (tableau 1).

Une expression positive (> 10%) de CK5/6 a été notée dans 8% (12 cas) de TNBC tandis que 2,4% (4 cas) ont montré une expression focale positive (< 10%) et 89,3% (134) étaient négatifs avec CK5/6. Une perte complète de l’expression de CK8 / 18 a été observée dans 4,7% (7 cas) tandis que 32,7% (49 cas) ont révélé une perte focale de CK8 / 18 et 62,7% (94 cas) ont montré une expression normale intacte de CK8 / 18. Aucune association significative de CK5/6 et CK8/18 avec divers paramètres clinicopathologiques n’a été observée (tableaux 2 et 3). De même, aucune association significative de CK 5/6 et de CK8 / 18 avec le statut de récidive des patients n’a été notée (fichier supplémentaire 2: Figure S2).

Discussion

Dans la présente étude, nous avons évalué l’expression d’un marqueur basal (CK5 / 6) et d’un marqueur luminal (CK8 / 18) dans le TNBC dans notre population et constaté que; 8 et 2,7% du TNBC présentaient une expression positive et focale positive de CK5 / 6 respectivement et 4,7 et 32.7% du TNBC ont révélé une perte complète et une perte focale de l’expression de CK 8/18 respectivement. Dans tous les cas où la perte focale CK8/18 a été notée, il y a eu perte de réactivité membranaire alors que la coloration cytoplasmique a été conservée dans peu de cellules. Cependant, aucune association significative n’a été observée entre ces patrons d’expression anormaux des cytokératines et divers paramètres clinicopathologiques et pronostiques du TNBC dans notre population. Le cancer du sein est l’une des tumeurs malignes les plus courantes dans la population sud-asiatique, en particulier chez les jeunes.

Le profilage de l’expression génique définit les cancers du sein basaux comme ceux présentant des grappes de gènes basaux comprenant l’EGFR, la cytokératine basale 5/6, le C–kit, le cluster de prolifération et une faible expression des gènes liés à Her2neu et aux récepteurs hormonaux. Cependant, le cancer du sein basal n’est pas une entité unique et il comprend plusieurs sous-types dont deux sous-types de type basal (BL1 et BL2), mésenchymateux, mésenchymateux, immunomodulateurs et sous-types d’androgènes luminaux. En plus de cela, des sous-types riches en interféron et faibles en claudine ont également été définis. Le sous-typage des cancers basaux du sein n’est pas recommandé par ASCO/CAP. L’expression de CK 5/6 varie de 24 à 72% dans le TNBC comme indiqué dans des études précédentes. D’autres chercheurs ont également proposé une signification pronostique de la CK 5/6 dans les cancers du sein à nœuds négatifs. Nielson et coll. a suggéré que le cancer du sein CK5 / 6 positif ait un pronostic pire indépendamment du grade tumoral, du stade T et du statut hormonal / Her2neu. De même, dans une autre étude, il a été proposé que CK5 / 6 est un marqueur de survie sans maladie plus courte, indépendamment des autres facteurs pronostiques du cancer du sein. Inanc et coll. signalé 50.Expression de 5% de CK5 / 6 avec corrélation positive de CK5 / 6 TNBC avec métastase nodale et taille de la tumeur. Cependant, contrairement à ces études, nous avons trouvé une faible expression de l’expression de CK5 / 6 dans le TNBC dans notre population étudiée, ce qui peut représenter un profil génomique différent du TNBC dans notre population, ce qui doit être exploré dans d’autres études. Le rôle pronostique de CK5/6 a été proposé dans d’autres cancers du corps.

CK8/18 est une cytokératine luminale principalement exprimée dans l’épithélium mammaire selon un schéma membraneux et cytoplasmique. Cimpean et al. a défini ces différents modèles de CK8 / 18 dans le cancer du sein; cytoplasmique diffus, membraneux et cytoplasmique et membraneux combinés.Certains chercheurs ont proposé que la perte d’expression de CK8 / 18 / une faible CK8 / 18 soit associée à un pronostic plus mauvais et à un risque élevé de métastases. Cependant, nous n’avons trouvé aucune signification pronostique de la perte de l’expression de CK8 / 18 avec divers facteurs pronostiques et récurrence dans le TNBC.

Nous avons constaté que 32,7% des TNBC présentent une perte focale d’expression CK8/18. Dans tous ces cas, il y a eu perte de réactivité membraneuse de CK8/18 alors que la coloration cytoplasmique était conservée dans peu de cellules. Aiad et coll. dans une étude portant sur 70 cas de cancer du sein, on a trouvé une expression anormale de CK8 / 18 (cytoplasmique) dans 70% des cancers du sein égyptiens, ce qui suggère une grande hétérogénéité dans l’expression de la cytokératine du cancer du sein dans différentes parties du monde.