Interprétation des tests quantitatifs de l'ADN des Cytomégalovirus: Compréhension du Point de vue du laboratoire | Jiotower
Caractéristiques des tests analytiques
Il existe des caractéristiques de performance des tests de charge virale qui doivent être comprises afin d’utiliser et d’interpréter correctement les résultats des tests. Il s’agit notamment de la limite de détection (LOD), de la LOQ inférieure et supérieure, de la plage linéaire, de la précision (reproductibilité) et de la précision. La LOD, définie comme la plus faible concentration d’ADN pouvant être détectée dans 95% des répliques, est généralement utilisée pour des tests moléculaires qualitatifs; cependant, le terme peut également être appliqué aux tests de charge virale quantitatifs. Les LQ supérieures et inférieures sont les concentrations d’ADN les plus élevées et les plus faibles qui peuvent être quantifiées avec une “précision acceptable”. À l’heure actuelle, il n’existe pas de définition convenue de la ” précision acceptable”; par conséquent, les laboratoires individuels la définissent localement. La façon dont la ” précision acceptable” est définie peut grandement influencer le LOQ. La LOD peut être équivalente à la LOQ inférieure ou elle peut être inférieure à la LOQ inférieure. Dans cette dernière situation, le test peut détecter l’ADN CMV, mais la valeur ne peut pas être quantifiée avec précision. Dans ces cas, le laboratoire pourrait déclarer le résultat comme “détecté mais inférieur à la LQ”; certains laboratoires le signalent comme “faible positif.”Le laboratoire devrait être en mesure de fournir à la fois la LOD et la LOQ; par exemple, dans notre laboratoire, la LOD du test de charge virale du CMV est de 100 copies / mL, tandis que la LOQ est de 300 copies / mL. Après consultation des cliniciens, il a été décidé de déclarer des valeurs de 100 à 300 copies / mL comme résultats “faibles positifs”, tandis que celles > 300 copies / mL sont déclarées comme une valeur entière.
Bien que les tests moléculaires très sensibles soient souvent importants pour la détection des agents pathogènes infectieux, cela peut ne pas être le cas pour les tests d’ADN du CMV. La signification clinique de faibles niveaux d’ADN du CMV (< 100-500 copies / mL) peut être difficile à interpréter, en particulier si des échantillons de sang total sont testés, car les faibles niveaux d’ADN du CMV dans le sang total ou le plasma ne sont pas toujours en corrélation avec le développement de la maladie. Certaines études ont été menées pour déterminer le seuil de traitement, y compris une étude d’histoire naturelle de la maladie du CMV chez les greffés du foie. En utilisant le test COBAS Amplicor Monitor (Roche Molecular Diagnostics), les auteurs ont montré qu’une valeur de charge virale de 2000 à 5000 copies / mL était en corrélation avec le développement d’une maladie des organes terminaux. Cette valeur de coupure dépend du test et peut être supérieure ou inférieure pour les autres LDT. Des études ont également montré que la valeur de la charge virale et le taux de variation de la charge virale sont des prédicteurs importants du développement de la maladie active. Plus le taux d’augmentation de la valeur de la charge virale est rapide, plus le risque de développer une maladie à CMV est élevé. Une fois les tests recalibrés avec la norme internationale, une LOD universelle cliniquement pertinente et une LOQ inférieure peuvent être identifiées. Sur la base des données et de l’expérience actuellement disponibles, 250 à 500 UI / mL peuvent être une LOD appropriée et / ou une LOQ inférieure.
Étant donné que la plupart des LDT utilisent des technologies de réaction en chaîne par polymérase en temps réel, la gamme linéaire des tests de charge virale du CMV est généralement d’au moins 6 log10; par exemple, le test peut détecter de 2,0 log10 copies / mL (100 copies / mL) à 7,0 log10 copies / mL (10 millions de copies / mL). Un examen des tests de charge virale du CMV effectués en 2009 aux laboratoires médicaux Emory a montré que sur les environ 8 500 tests de charge virale de l’ADN du CMV effectués sur des échantillons de plasma, 671 (7,9%) étaient positifs. Parmi ceux-ci, 394 (58,7%) contenaient < 1000 copies/mL, 169 (25,2%) se situaient entre 1000 et 10 000 copies/ mL et 63 (9,4 %) se situaient entre 10 000 et 100 000 copies/mL. De plus, 45 (6,7 %) avaient une charge virale d’ADN CMV > 100 000 copies/mL. Bien que de faibles valeurs de charge virale soient courantes, leur signification clinique n’est pas claire. Des valeurs de charge virale très élevées sont rares et, lorsqu’elles se produisent, sont généralement observées chez les patients immunodéprimés atteints d’une infection primaire à CMV ou chez ceux atteints d’une maladie très grave. Étant donné que des valeurs de charge virale aussi élevées que 10 millions peuvent être présentes chez certaines personnes, la limite supérieure de quantification d’un test devrait se situer dans cette plage.
L’interprétation des différences importantes dans les valeurs de charge virale longitudinale chez un patient individuel nécessite une compréhension de la précision ou de la reproductibilité du test. En règle générale, la variabilité des tests de charge virale est la plus élevée près de la LOQ inférieure et supérieure et la plus faible dans la plage médiane du test. Par conséquent, de petits changements dans les valeurs de faible charge virale ne sont pas significatifs; par exemple, il n’existe pas de différence claire entre les résultats chez un patient chez qui la valeur de la charge virale est passée de 200 copies / mL à 500 copies / mL car cette différence se situe dans la variabilité du test. Les données les plus utiles concernant les changements cliniquement importants des valeurs de la charge virale proviennent de l’expérience avec le VIH-1. Pour ces tests approuvés par la FDA, la variabilité du test varie de 0,1 log10 copies / mL à 0,2 log10 copies / mL, par rapport à la variabilité biologique observée chez les individus non traités infectés chroniquement, qui est d’environ 0,3 log10 copies / mL. Par conséquent, on pense que les changements de charge virale > 0,5 log10 copies / mL représentent des changements biologiquement importants dans la réplication virale. Bien que la valeur de 0,5 log10 copies / mL ait été largement adoptée pour de nombreux autres agents pathogènes viraux, elle peut ne pas être exacte pour le CMV. Étant donné que la variation biologique du CMV n’est pas connue, des changements importants dans les valeurs de la charge virale ont toujours été évalués en fonction uniquement de la variabilité des tests. D’autres travaux avec le VIH-1 ont montré que le SD du test devait être ≤0,15 log10 copies / mL pour discerner des changements de 5 fois dans les valeurs de la charge virale. Pour les LDT à CMV, la variabilité de l’essai ne devrait pas être meilleure que celle observée pour les tests de charge virale VIH-1 approuvés par la FDA et elle pourrait bien être plus élevée, en particulier près de la LOQ inférieure. Par conséquent, lors de la détection de valeurs de charge virale du CMV < 1000 copies / mL, les changements de < 5 fois (0.7 log10) reflétera rarement des changements cliniquement importants dans la réplication virale. Pour les valeurs > 1000 copies / mL, les variations de la charge virale par 3 fois (0,5 log10) peuvent être significatives, bien que cela puisse différer selon les TDL. Certains centres signalent les charges virales sous forme de copies/ mL et de copies log10/ mL, car les cliniciens peuvent être moins susceptibles de surinterpréter de petits changements dans les valeurs de la charge virale lorsqu’elles sont exprimées en valeurs log10.
Un échantillon de référence pour le test de la charge virale doit être prélevé le jour du début du traitement au CMV, même si le test de la charge virale au CMV a été effectué quelques jours plus tôt. Des augmentations rapides de la charge virale du CMV peuvent survenir sur quelques jours chez les patients atteints d’une maladie non traitée, ce qui rend important d’avoir la valeur de la charge virale du CMV au moment du traitement. Si les valeurs de la charge virale dépassent la LOQ supérieure, il est recommandé que le laboratoire dilue l’échantillon pour déterminer la valeur réelle de la charge virale. Une fois le traitement initié, l’intervalle idéal pour la surveillance est hebdomadaire car la demi-vie de l’ADN du CMV dans le plasma est de 3 à 8 jours. Une autre raison d’utiliser cet intervalle est qu’il n’est pas rare que la charge virale de l’ADN du CMV augmente chez un patient quelques jours après le début du traitement, ce qui peut être mal interprété comme un échec du traitement. Étant donné que les patients présentant un ADN persistant dans le plasma ou le sang total courent un risque accru de rechute, les lignes directrices actuelles recommandent de poursuivre le traitement antiviral jusqu’à ce que les valeurs de la charge virale soient indétectables. Certains patients présentent de faibles taux persistants d’ADN du CMV dans le plasma ou le sang total et ne développent jamais de maladie ou de rechute du CMV. Chez ces personnes, il est plus utile de suivre les tendances des valeurs de charge virale au fil du temps que d’évaluer l’importance d’une valeur de charge virale donnée. Les profils de charge virale qui sont inquiétants pour les virus pharmacorésistants comprennent ceux qui ne diminuent pas après 2 semaines de traitement adéquat, ceux dont le taux de diminution de la charge virale atteint un plateau et ceux qui ont une baisse initiale puis une augmentation ultérieure de la charge virale pendant le traitement. Ces patients doivent être évalués pour le virus résistant en séquençant les gènes UL97 et / ou UL54 (polymérase) directement à partir d’un échantillon de plasma.
Les tests de charge virale de l’ADN du CMV sont conçus de manière à ne pas réagir de manière croisée avec d’autres herpèsvirus. Chez un patient immunodéprimé, la détection de 2 herpèsvirus, par exemple le CMV et le virus d’Epstein-Barr, reflète la réactivation des deux virus et n’est pas due à une réactivité croisée.
