Quantification des niveaux de ROS en utilisant CM-H2DCFDA et HyPer

À de faibles niveaux, les espèces réactives de l’oxygène (ROS) peuvent agir comme molécules de signalisation dans les cellules. Lorsque la production de ROS dépasse largement la capacité des systèmes antioxydants endogènes, ou que les niveaux d’antioxydants sont réduits, les niveaux de ROS augmentent encore. Ce dernier est associé à l’induction du stress oxydatif et à la transduction du signal associée et caractérisé par des modifications induites par le ROS de l’homéostasie redox cellulaire et/ou des effets néfastes sur les biomolécules (p.ex. ADN, protéines et lipides). Compte tenu des mécanismes complexes impliqués dans la production et l’élimination de ROS, en combinaison avec l’absence de molécules rapporteuses vraiment spécifiques à un type particulier de ROS, la quantification des niveaux de ROS (sous)cellulaires est une tâche difficile. Dans ce chapitre, nous décrivons deux stratégies pour mesurer les ROS: one approach to assess general oxidant levels using the chemical reporter CM-H2DCFDA (5-(and-6)-chloromethyl-2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate), and a second approach allowing more specific analysis of cytosolic hydrogen peroxide (H2O2) levels using protein-based sensors (HyPer and SypHer).