サイトケラチン5/6およびサイトケラチン8/18発現:南アジア集団における臨床病理学的意義

Methods

tnbcの合計150例が病理学部門アーカイブの記録から選択された。 外科的標本は修正根治的乳房切除術，単純乳房切除術およびセンチネルリンパ節郭清を伴う広い局所切除術を含んでいた。 すべての患者は、2008年から2013年までの6年間にわたって、カラチのLiaquat国立病院で手術を受けた。 調査は施設の研究そして倫理的な検討委員会によって承認され、インフォームドコンセントは外科の時にすべての患者から取られました。 症例のヘマトキシリンおよびエオシン染色スライドおよびパラフィンブロックを検索し，必要に応じて新しい切片を切断した。 全例のスライドを二人の上級組織病理学者によってレビューし，組織型，腫ようグレード，Ｔ期，Ｎ期，リンパ血管浸潤，壊死，線維症，リンパ球浸潤（腫よう浸潤リンパ球），ｉｎｓｉｔｕ成分の存在，パゲトイドスプレッドおよび皮膚リンパ浸潤のような病理学的特徴を評価した。 すべての患者の臨床記録はまた、患者の年齢、放射線および化学療法の病歴および再発状態を評価するために、施設記録からレビューされた。 さらに、各症例の代表的なブロックを選択し、ER、PRおよびHer2Neu免疫組織化学は、トリプル陰性状態を再確認するために行われた。

ER、PR、Her2NeuおよびKi67IHCは、製造業者のプロトコルに従って、EnVision™FLEX、high pH DAKO kitを用いて、以下のようにDAKO抗体を用いて実施した。

1. 屈曲のmonoclonalウサギの反人間のエストロゲンの受容器のアルファ、クローンEP1。

2. FLEXモノクローナルマウス抗ヒトプロゲステロン受容体クローンPgR636。

3. ポリクローナルウサギ抗ヒトc-erbB-2オンコプロテイン。

4. FLEXモノクローナルマウス抗ヒトKi67抗原クローンMIB-1。

癌細胞の>1％におけるERおよびPRの核染色は陽性であると考えられた。 Her2neuの場合、症例はCAPガイドラインに従って1+、2+および3+をスコア化した。 あいまいなケース（2+）のために、fishは製造業者の議定書に従ってPath Vysion Her2Neu probe kitを使用して行われました。 結果は、ＡＳＣＯ／ＣＡＰガイドラインに従って、ＣＥＰ１ ７信号と比較したｈｅｒ２ｎｅｕ信号の比として表された。

Ki67免疫染色は、陽性染色された癌細胞の割合に基づいて連続変数として記録した。 さらに、Ki67指数に基づいて、症例は<15、16-24、25-44および>44％ki67指数カテゴリに分類された。

CK5/6IHCは、フレックスモノクローナルマウス抗ヒトサイトケラチン5/6、クローンD5/16B4を製造業者のプロトコルに従ってDAKO envision法により行った。 10％以上の細胞における強い細胞質および膜性染色への中間体は陽性と考えられた。 ＜４ ９ ４ ５＞での中間染色に弱い１ ０％を焦点陽性としたが、染色は陰性とはみなさなかった（追加ファイル１：図Ｓ１）。

ck8/8IHCは、モノクローナルマウス抗ヒトサイトケラチン5/6、クローンD5/16B4を用いて、DAKO envision法に従って行った。 50％以上の細胞における強い細胞質および膜性染色への中間体は陽性と考えられた。 10-50%における弱い中間染色（細胞質、膜反応性の喪失を伴う）を焦点陽性とし、一方、<10%における染色または弱い染色は陰性とみなされた（追加ファイル1：図S1）。

再発状況とフォローアップは、病院のカルテを見直して評価しました。 全生存期間は外科的切除から死亡または最後のフォローアップまでの時間とし、無病生存期間は外科的切除と局所再発または遠隔metastasis、死亡または最後

社会科学のための統計パッケージ（SPSS21）は、データの編集と分析に使用されました。 定量的変数について平均および標準偏差を計算した。 頻度と割合は、質的変数について計算した。 協会を決定するためにChi squareを適用しました。 群間の平均の差を比較するために，ｓｔｕｄｅｎｔｔ検定またはＭａｎｎｗｈｉｔｎｅｙ検定を適用した。 P値≤0.05として重要です。 生存曲線をＫａｐｌａｎ–Ｍｅｉｅｒ法を用いてプロットし，生存曲線間の差の有意性を対数ランク比を用いて決定した。 P値≤0。05は重要なものとして取られました。

結果

この研究に関与した患者の平均年齢は48.9歳であり、最も一般的な年齢層は31-50歳であった。 患者のほとんどは高い平均ki67指数すなわち46.9％でステージT2で提示した。 症例の42.7％が結節metastasisを有していた。 84％の症例は従来の浸潤性乳管癌であったが、NST;しかし、症例のかなりの割合は化生組織学（9.3％）であった。 大多数の症例は高グレード（86.7％グレードIII）であった。 ほとんどの腫ようはリンパ球浸潤および壊死を示す。 腫瘍のほとんどはinsituの部品（61%）を欠いています。 局所再発または後期遠隔metastasisは、症例の17.8％で認められた（表1）。

陽性（>10％）CK5/6発現は、tnbcの8％（12例）で認められたが、2.4％（4例）は焦点陽性（<10％）を示し、89.3％（134）はCK5/6で陰性であった。 CK8/18発現の完全な損失は4.7％（7例）で見られたが、32.7％（49例）はCK8/18の焦点損失を明らかにし、62.7％（94例）はck8/18の無傷の正常な発現を示した。 CK5/6およびCK8/18と様々な臨床病理学的パラメータとの有意な関連は観察されなかった（表2および3）。 同様に、CK5/6およびCK8/18と患者の再発状態との有意な関連は認められなかった（追加ファイル2：図S2）。

議論

本研究では、我々の集団におけるTNBCにおける一つの基底（CK5/6）と一つの管腔マーカー（CK8/18）の発現を評価し、ことがわかった;TNBCの8と2.7％は、それぞれck5/6と4.7と32の陽性と焦点陽性の発現を示した。TNBCの7％は、それぞれCK8/18式の完全な損失と焦点損失を明らかにした。 焦点損失CK8/18が認められたすべてのケースでは、細胞質染色はいくつかの細胞で保持された間、膜反応性の損失があった。 しかし，これらのサイトケラチンの異常発現パターンとＴＮＢＣの種々の臨床病理学的および予後的パラメータとの間に有意な関連は観察されなかった。 乳癌は若い年齢の南アジアの人口の共通の敵意の1つ特にです。

遺伝子発現プロファイリングは、EGFR、基底サイトケラチン5/6、C–kit、増殖クラスター、Her2Neuおよびホルモン受容体関連遺伝子の低発現を含む遺伝子の基礎クラスターを示すものとして基底乳がんを定義している。 但し基底の乳癌は単一の実体ではないし、2つの基底のようなサブタイプ（BL1およびBL2）、mesenchymal、mesenchymal茎そっくりの、immunomodulatoryおよびluminalの男性ホルモンのサブタイプを含 それに加えてインターフェロンの豊富な、claudin低いサブタイプはまた定義されました。 基底の乳癌のSubtypingはASCO/CAPによって推薦されません。 CK5/6発現は、以前の研究で報告されているように、TNBCで24から72％まで変化する。 他の研究者はまたノード否定的な乳癌のCK5/6の予後の重大さを提案しました。 Nielson et al. CK5/6肯定的な乳癌に腫瘍の等級、T段階およびホルモン性/Her2Neuの状態のより悪い予想の独立者があることを提案しました。 同様に、別の研究では、CK5/6は、乳癌の他の予後因子とは無関係に、より短い無病生存期間のマーカーであることが提案された。 Inanc et al. 報告された50。リンパ節転移および腫瘍サイズとのCK5/6TNBCの正の相関を有するCK5/6の5％発現。 しかし、これらの研究とは対照的に、我々はさらなる研究で検討する必要がある我々の集団におけるTNBCの異なるゲノムプロファイルを表すことができ、我々の研究集団におけるTNBCにおけるCK5/6発現の低発現を発見した。 CK5/6の予後の役割は、体の他の癌で提案されています。

CK8/18は、主に膜状および細胞質パターンで乳房上皮に発現する管腔内サイトケラチンである。 Cimpean et al. 乳癌のCK8/18のこれらの異なったパターンを定義しました;拡散細胞質、membranousおよび結合された細胞質およびmembranous。一部の研究者は、CK8/18発現の喪失/低CK8/18は予後が悪化し、転移のリスクが高いことに関連していることを提案している。 しかし、我々はTNBCにおける様々な予後因子と再発とCK8/18発現の損失の任意の予後の意義を見つけることができませんでした。

TNBCの32.7％が発現CK8/18の焦点損失を示すことがわかった。 細胞質染色は、いくつかの細胞に保持されたが、すべてのこれらのケースでは、CK8/18の膜性反応性の損失があった。 Aiad et al. 乳がんの70例を含む研究では、世界のさまざまな部分で乳がんのサイトケラチン発現の異質性の多くを示唆しているエジプトの乳がんの70％でCK8/18（細胞質）の異常な発現を発見しました。