バージンココナッツオイルは、繰り返し加熱されたパーム油を与えたラットの血圧上昇を防止し、内皮機能を改善する

要約

この研究は、繰り返し加熱されたパーム油を与えた雄ラットにおけるバージンココナッツオイル（VCO）が血圧、血漿一酸化窒素レベル、および血管反応性に及ぼす影響を調べるために行われた。 三十から二雄Sprague-Dawleyラットは、四つのグループに分けられた：（i）コントロール（基礎食）、（ii）VCO（1.42mL/kg、経口）、（iii）五回加熱パーム油（15％）（5HPO）、および（iv）五回加熱パーム油（15％）とVCO（1。４ ２ｍｌ／ｋｇ、経口）（５ＨＰＯ＋ＶＣＯ）。 血圧は、対照群と比較して5HPO食を与えられた群で有意に増加した。 5HPO+VCO群の血圧は、5hpo群よりも有意に低かった。 5HPO群の血漿一酸化窒素（NO）レベルは対照群と比較して有意に低かったが、5hpo+VCO群では、血漿NOレベルは5hpo群と比較して有意に高かった。 5HPO群からの大動脈リングは、アセチルコリンとニトロプルシドナトリウムに応答して減衰緩和だけでなく、対照群に比べてフェニレフリンへの 5HPO+VCOグループからの大動脈リングは、5hpoグループに比べてフェニレフリンにのみ減衰血管収縮を示した。 ＶＣＯは，繰り返し加熱したパーム油を与えたラットの血圧上昇を防止し，内皮機能を改善した。

1. はじめに

心血管疾患は、世界的に主要な死因となっています。 高血圧または血圧の上昇は、冠状動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化症、および脳卒中などの心血管合併症を引き起こす要因の一つです。 しかし、不健康な生活様式は、高血圧の発生率の増加の主な原因である。

以前の研究では、加熱されたパーム油が血圧の有意な上昇を引き起こすことが示されています。 高血圧は、フリーラジカルの過剰産生と体内のより低い抗酸化メカニズムに関連しています。 高温で繰り返し加熱されたパーム油はフリーラジカルを生成する。 ビタミンEのような酸化防止剤の存在は、加熱プロセス中に破壊される。 パーム油を繰り返し加熱すると、フリーラジカルが生成されるだけでなく、酸化ストレスにつながる抗酸化物質やビタミンの含有量も減少します。 酸化ストレスは、フリーラジカルの産生と体内の抗酸化活性の低下との間の不均衡のために生じる。 酸化ストレスはまた、低密度リポタンパク質（LDL）酸化につながる。

高温で加熱された油は酸化プロセスを経て、cis異性体からtransへの脂肪酸配置の変化を引き起こす。 Transの脂肪の取入口は心循環器疾患の危険の増加と相関します。 繰り返し加熱された油のために酸化される脂肪酸は、血管拡張反応の障害、炎症および高血圧のリスクの増加、および総血清コレステロールおよびLDLをもたらす内皮機能の変化を引き起こす。 以前の研究では、揚げ物の摂取量が高密度リポタンパク質（HDL）レベルの低下と相関することが示されています。

この研究では、パーム油を繰り返し加熱して、同じ油を使用して食品を複数回炒める状況を模倣しています。 この方法は、費用を削減するための手段として、マレーシアの間で一般的です。 Azman et alによって行われた以前の研究。 夜間市場のベンダーは、繰り返し加熱された食用油が健康に有害であることに同意したにもかかわらず、彼らはまだ繰り返し同じ食用油を使用する練習を続けたことを示しました。

今日では、バージンココナッツオイル（VCO）は、その有益な効果のために人気となっています。 VCOは、抗炎症性、鎮痛性、および解熱性を有することが示されている。 VCOは、LDL脂質過酸化と同様に、血清および組織中の脂質レベルを低下させることが示されている。 VCOの消費は血小板凝固および低いコレステロール値の阻止と関連しているantithrombotic効果を高めます。 VCOは精製されたココナッツ油と比較されるより高い酸化防止活動があると知られていました。 また、vcoは抗酸化活性を増強し、ラットの脂質過酸化を阻害することが証明されている。 したがって，繰り返し加熱したパーム油を与えた雄ラットにおいて，ＶＣＯが高血圧を予防できるかどうかを調べることは大きな関心事である。

2. 材料および方法

2.1. 動物および実験デザイン

体重が200〜250gの雄Sprague-Dawleyラット32匹を、Laboratory Animal Resource Unit,Universiti Kebangsaan Malaysiaから入手した。 それらはランダムに八つの動物からなる四つのグループに均等に分割された。 この研究の倫理的承認は、マレーシア動物倫理委員会（PP/FAR/2010/QODRIYAH/14-JULY/309-AUGUST-2010-AUGUST-2011）から得られた。 すべての動物管理および手順は、推奨されるガイドラインに従って実施した。

ラットをステンレス製のケージに入れ、室温27℃±2℃で12時間の明暗サイクルで飼育した。 すべてのラットは実験を通して食物と水に自由にアクセスできました。 順化の1週間後、ラットの各グループは、以下の食事に供給されました: （ｉ）基礎食（市販ラットチャウ）（対照）、（ｉ ｉ）経口1.42mL/kg VCOと共に基礎食（VCO）、（ｉｉｉ）15％重量/重量（w/w）五回加熱パーム油（5HPO）で強化された基礎食、および（ｉ ｖ）15％重量/重量（w/w）経口1.42mL/kg vco（5HPO+VCO）で16週間強化された基礎食。 体重および食物摂取量を毎週測定した。 血圧は、ベースラインおよび4週間の間隔で16週間の総持続時間で測定した。 治療前およびこの研究の終了時に、眼窩洞へのアクセスを介して血液サンプルを収集した。 研究の最後に、動物を屠殺し、血管反応性の測定のために胸部大動脈を単離した。

2.2. Virgin Coconut Oil

本研究で使用したVCOはOrganic Gain Sdnから購入した。 Bhd.、バンダールバルバンギ、セランゴール、マレーシア。 これは、ヒトにおける1日あたり10mLの最小推奨用量に従って、1.42mL/kgの用量で経口強制投与によって投与された。

2.3. 食事の準備

使用したパーム油（Cap Buruh,Lam Soon Edible Oils,Kuala Lumpur,Malaysia）は地元の店から購入した。 本研究では、Owuらによって記載された方法に従って、パーム油を5回加熱した。 . 加熱プロセスは、ステンレス鋼の中華鍋でサツマイモの1キロを揚げるために油の2.5Lを使用して関与しました。 加熱された油の温度は180℃に10分間達した。 油を五回加熱するために、油を加熱の間に5時間冷却し、その後、新鮮な油を添加せずにサツマイモの新しいバッチで全揚げプロセスを繰り返した。 このプロトコルは、私たちの研究室で使用されている以前の実験手順に従っていました。 標準的なラットチョウ（金貨、Kepong、マレーシア）を使用した。 ラットチャウを粉砕し、15％（w/w）の五回加熱されたパーム油と混合した。 この混合物をペレットにし、これを室温で一晩乾燥させた。

2.4. 血圧＜９ ２ ２ ９＞＜６ ４ ２ ５＞収縮期血圧の測定は、Ｐｏｗｅｒｌａｂ ｄａｔａ ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍｓ（Ａｄｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｃａｓｔｌｅ Ｈ Ｉｌｌ，ＮＳＷ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）を使用してテールカフ法により測定した。

2.5. 血漿一酸化窒素の測定

酸化窒素含有量は、その代謝産物の亜硝酸塩によって間接的に測定した。 採取した血液試料を遠心分離してその血漿を得、−７ ０℃に保った。５ ０μ ｌの血漿試料を９ ６ウェルのマイクロタイタープレートに入れ、５ ０μ ｌの修飾Ｇｒｉｅｓｓ試薬（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ． 暗環境下で室温で１ ５分間インキュベーションした後、ｓｏｆｔｍａｘ Ｐｒｏソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，Ｃ Ａ，ＵＳＡ）を使用して、ｅｍａｘ ＥＬＩＳＡ ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ ｒｅａｄｅｒ上で、５ ４ ０ｎｍ波長で亜硝酸塩濃度を測定した。 次いで、亜硝酸塩濃度を、亜硝酸ナトリウム濃度の増加に伴って標準曲線をプロットすることによって決定した（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．

2.6. 血管反応性の測定

大動脈輪は、AjayおよびMustafaによって記載されたように調製した。 胸部大動脈を切開し，余分な脂肪と結合組織を除去した。 大動脈を3〜5mmの幅のリングセグメントに切断し、以下の組成（mM）のクレブス溶液を含む5mLの器官浴に懸濁した：NaCl118.0、2KCl4.7、Cacl2・2H2O2.5、KH2PO4 1.2、Mgso4 1.2、グルコース11.7、Nahco3 25.0、およびEDTA0.026。 入浴溶液に酸素と二酸化炭素の混合物を連続的に供給した。 組織等尺性張力（ｇ）を、Ｍａｃｌａｂ記録システム（Ｍａｃｌａｂ ｍｏｄｅｌ８Ｓ，Ａｄｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｃａｓｔｌｅ Ｈ Ｉｌｌ，ＮＳＷ，Ａｕｓｔｒａｌｉａ）に取り付けられた力−変位変換器（ＦＴ０ ３Ｅ，Ｇｒａｓｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，ｗｅｓｔ Ｗａｒｗｉｃｋ，ＲＩ，ＵＳＡ）を用いて記録した。 大動脈輪を１ｇの基底張力に再調整し、３ ０〜４ ５分にわたって平衡化させた。 この期間中、入浴溶液を必要に応じて15分ごとに交換した。

平衡化期間に続いて、大動脈環は等張KCl溶液（高K+、60mM）に対する収縮応答を達成することができた。 高K+への応答のウォッシュアウトに続いて、リングはフェニレフリン（PE、10-7M）アセチルコリン（Ach、10-5M）の添加によって誘導された内皮の完全性を評価 Achに対する50％以上の緩和を有する内皮無傷のリングのみがさらに評価された。 さらに、これらの大動脈リングは、Ach（10-10Mから10-5M）とニトロプルサイドナトリウム（SNP10-10Mから10-5M）の濃度の増加に対する緩和応答を試験し、PE（10-5M） PEの濃度の増加に対する収縮応答（10-10Mから10-5M）もリングに記録された。 無傷の内皮を有する異なる大動脈輪を各実験で使用した。

2.7. 薬物

血管反応性試験に使用された薬物には、塩化アセチルコリン、フェニレフリン-HCI（Sigma Chemical Co. Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）およびｎｉｔｒｏｐｒｕｓｓｉｄｅナトリウム（ＢＤＨ Ｌｉｍｉｔｅｄ ａｎｄ ＢＤＨ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｕｐｐｌｉｅｓ，Ｐｏｏｌｅ，Ｅｎｇｌａｎｄ）。

2.8. 統計分析

結果は平均±SEMとして提示した。 データの正常性は、Ｓｈａｐｉｒｏ−Ｗｉｌｋ検定を用いて決定した。 統計的差異は、対になったＳｔｕｄｅｎｔ検定または一方向Ａ ＮＯＶＡを用いて決定し、続いてＴｕｋｅｙのｈｓｄ事後検定を用いて決定し、ＳＰＳＳバージョン１ ６.０（ＳＰＳＳ Ｉｎｃ．、シカゴ、イリノイ州、米国）。 の値は有意であると考えられた。

3. 結果

3.1. 体重

すべてのグループの体重がベースラインと比較して16週目に有意に増加しました。 対照群（）と比較して5HPO群（）の体重に有意差はなかった。 しかし、VCO()群および5HPO+VCO()群の体重は、16週目の対照群と比較して有意に低かった(図1)。

フィギュア1

研究治療中の体重の変化。 データは平均±ＳＥＭとして表される。 VCO、バージンココナッツオイル;五回加熱パーム油、5HPO。 *各グループの第16週の有意差（）と第0週の有意差（）。 #第16週の対照と比較した有意差（）。

3.2. 食物摂取量

5HPO()および5HPO+VCO()群は、対照群()と比較して有意に低い平均食物摂取量を示した。 対照群と比較してＶＣＯ（）の食物摂取量に有意差はなかった。 また、5HPO群と比較して、5HPO+VCOの食物摂取量に有意差はなかった（図2）。

フィギュア2

研究治療中の食物摂取。 データは平均±ＳＥＭとして表される。 VCO、バージンココナッツオイル;五回加熱パーム油、5HPO。 #コントロールと比較した有意差()。

3.3. 血圧

8週目から16週目にかけて、5HPO群は対照群と比較して血圧の有意な上昇を示した。 5HPO+VCO群の血圧は、第8週から第16週までの5hpo群と比較して有意に低い。 VCO群（）の血圧は、第8週のみで対照群（）と比較して有意に低い（図3）。

フィギュア3

研究治療中の血圧の変化。 データは平均±ＳＥＭとして表される。 VCO、バージンココナッツオイル;五回加熱パーム油、5HPO。 #コントロールと比較した有意差()。 •グループ5HPOと比較した5HPO+VCOの有意な差。

3.4. 血漿一酸化窒素代謝物レベルの変化

5HPO群（）は、対照群（）と比較して一酸化窒素レベルの有意な減少を示した。 VCO（）および5HPO+VCO（）グループは、対照群と比較して一酸化窒素レベルの増加を示した。 5HPO+VCO群では、5HPO群と比較して一酸化窒素レベルが有意に増加しました（図4）。

フィギュア4

研究治療中の血漿一酸化窒素代謝物の変化。 データは平均±ＳＥＭとして表される。 VCO、バージンココナッツオイル;五回加熱パーム油、5HPO。 #コントロールと比較した有意差()。 •グループ5HPOと比較した5HPO+VCOの有意な差。

3.5. 血管応答

3.5.1. アセチルコリン（Ach）に応答した緩和

10-5Mおよび10-6M濃度での緩和の割合は、5HPO群の対照群と比較して有意に低かった。 すべての濃度で5HPO群と比較して、5HPO+VCO群の緩和率に有意差はなかった（図5）。

フィギュア5

基底食（コントロール）、バージンココナッツオイル（VCO）、五回加熱パーム油（5HPO）、および五回加熱パーム油と一緒にVCO（5HPO+VCO）異なる濃度で供給されたラットから単離された大動脈輪のアセチルコリンに応答して内皮依存性の緩和。 データは平均±ＳＥＭとして表される。 #コントロールと比較した有意差()。

3.5.2. ニトロプルシドナトリウム（SNP）に応答して緩和

最高試験濃度（10-5M）に応答して血管拡張が有意に5HPO（）群から得られた大動脈輪で減衰した対照群（）に比 5HPO+VCO群()では、5HPO群と比較して血管弛緩反応に有意差はなかった(図6)。

フィギュア6

基底食（コントロール）、バージンココナッツオイル（VCO）、五回加熱パーム油（5HPO）、および五回加熱パーム油と一緒にVCO（5HPO+VCO）異なる濃度で供給されたラットから単離された大動脈輪におけるニトロプルシドナトリウムに応答して内皮非依存的な緩和。 データは平均±ＳＥＭとして表される。 #コントロールと比較した有意差()。

3.5.3. フェニレフリン（PE）に対する収縮応答

PEに対する応答における血管収縮は、5hpo群の大動脈リングにおいて、10-6-10-5Mの濃度で対照群と比較して有意に増強された。5hpo+VCO群の大動脈リングは、5hpo群の10-6-10-5Mの濃度で比較して血管収縮の有意な減少を示した（図7）。

フィギュア7

異なる濃度でvco（5HPO+VCO）と一緒に基礎食（コントロール）、バージンココナッツオイル（VCO）、五回加熱パーム油（5HPO）、および五回加熱パーム油を与えたラットから単離された大動脈 データは平均±ＳＥＭとして表される。 #コントロールと比較した有意差()。 •グループ5HPOと比較した5HPO+VCOの有意な差。

4. 考察

本研究では、繰り返し加熱された油食の食物摂取量が対照群に比べて低いことが判明した。 しかし、5HPO食と16週目の対照群との間に体重に有意差がないことが観察された。 同様の結果は、Ｌｅｏｎｇらによって行われた研究からも得られた。 、繰り返された熱くするオイルを使用して。 VCOおよび対照食の食物摂取量は類似していたにもかかわらず、vco食群は16週目に対照群と比較して体重が減少していることが判明した。 5HPO+VCO食事の食物摂取量は5hpo食事と同じでしたが、5hpo+VCO食事群のラットは16週目に対照群と比較して体重の減少を経験しました。 これは、VCOの補給が体重の減少を引き起こすことを示しています。 ヒトにおける以前の研究では、VCOが腹部肥満の減少を促進するように見えることが示されている。 St-Ongeが実施した研究によると、中鎖脂肪酸（MCFA）は、長鎖脂肪酸と比較して、エネルギー消費を増加させ、より速い満腹感をもたらした。 VCOで見つけられるMCFAは十分を促進し、また熱の支出を高めるのを助けるように食事療法の他の脂肪のための有利な取り替えとして助けるかもしれ 脂肪含量は、胃を空にするのを遅くするのに役立ちます。 それとは別に、MCFAも直接分解され、燃料として肝臓に輸送されます。 したがって、VCOはエネルギーに利用され、脂肪として貯蔵される可能性が低く、これはおそらく、ヒトの腹部肥満および研究動物の体重を減少させるこ

繰り返し加熱される油には、不飽和脂肪酸よりも飽和脂肪酸が多く含まれています。 飽和脂肪酸の摂取量が組織脂肪を増加させることができるため、食物摂取量が低いにもかかわらず、5HPO食のラットの体重増加は対照群と比較して有意に異ならない。 関与するメカニズムは、ホルモン感受性リパーゼの減少および脂肪組織における交感神経活性によるものである。 転写発現因子であるペルオキシソーム増殖因子活性化受容体（ＰＰＡＲ）は，アポトーシスを引き起こす増殖と脂肪分化に役割を果たしている。 それは体重の増分を引き起こすadiposityの増分（脂肪質のティッシュの成長）をもたらす飽和させた脂肪酸によってそれから影響を及ぼされます。

5HPO食事は血圧上昇を引き起こす。 この研究は、繰り返し加熱されたパーム油を摂食すると、高血圧リスクを増加させることによってラットの健康に害を及ぼすことを示している。 以前の研究では、酸化された油を投与されたラットで血圧の増加が起こることも示されていました。 これはおそらく酸化ストレスの増加によるものであり、酸化窒素レベルの変化を引き起こす。 活性酸素種（ROS）は高血圧の形成に重要な役割を果たし、rosは加熱プロセス中に形成される。 ROSの過剰産生は、細胞を損ない、血圧上昇を引き起こす可能性がある。 細胞膜は、多価不飽和脂肪酸（PUFA）の含有量が高いため、酸化的攻撃に敏感な構造です。 血圧の上昇は、noレベルを低下させるフリーラジカルの産生によるものです。

VCO補充は、5HPOの血圧上昇効果を防止します。 ＶＣＯの血圧低下効果はポリフェノール成分の高さに起因すると考えられた。 以前の研究では、ポリフェノールが高血圧患者の血圧を低下させることができることも示されています。 単独でVCOの食事療法のラットに対照と比較される週8でだけ血圧の一時的な減少がありました。 Dieboltらによる研究。 ポリフェノール化合物の短期投与は、正常血圧ラットにおける血圧を低下させることを示した。 彼らは、ポリフェノールが内皮から放出されたNOを刺激することができ、血管拡張および血圧低下を引き起こすと仮定した。 血漿一酸化窒素レベルは、血圧測定のように毎月ではなく、研究の開始時および終了時に採取されたため、短期的な効果の理由は不明である。 ポリフェノールの部品はまたLDLの酸化を防ぐために示されVCOの補足を含んでいる食事療法はラットの酸化防止状態を高めます。 組織および血清中のコレステロール値および他の脂質パラメータは正常範囲内に維持され，ＶＣＯ中のポリフェノール含量によるＨＤＬ濃度の増加も認められた。

5HPO食の摂取は、血漿NOレベルを有意に低下させることが判明した。 フリーラジカルの過剰産生は、NOの不活性化を増加させ、NOの生物学的利用能の低下をもたらす。 したがって、NOの減少は血圧上昇を引き起こす。 ＶＣＯ食餌の摂取は対照群よりも高い血漿Ｎ Ｏレベルを示した。 それはまた5HPOの食事療法と与えられるラットの血しょうレベルを高めません。 これは生物学的利用能を増加させるために責任があるVCOで見つけられる酸化防止部品のポリフェノールが原因であると考えられます。 VCO中の抗酸化物質含量は、酸化ストレスを減少させ、したがってNO生物学的利用能を維持することによって保護効果を提供することが可能である。

本研究では、アセチルコリン依存性内皮によって誘導される緩和は、5HPO食餌を与えたラットで減衰したことが判明した。 ＮＯの放出は，血管平滑筋弛緩と血管収縮との間のバランスを決定する役割を果たす。 生物学的利用能が低下しない場合、これは血管平滑筋弛緩および血管収縮の減衰をもたらす。 パーム油を繰り返し加熱すると、油中の抗酸化保護効果が低下する可能性があります。 ＜２ １ １ ９＞＜６ ４ ２ ５＞ＳＮＰは内皮血管拡張剤である。 ＳＮＰは組織中にＮＯを放出することにより弛緩を誘導し，ＳＮＰ分子の破壊はグアニル酸シクラーゼを活性化して血管平滑筋弛緩を引き起こす環状ジグアニル酸一リン酸の形成を増加させるＮＯを生成する。 しかし、SNP非依存性内皮によって誘導される緩和は、5HPO食事を与えられたラットで減衰した10-5Mの最高濃度で対照群と比較してこれは多分血管拡張に関与しているNOの生物学的利用能の低下によるものである。

5HPO+VCO食餌のラットは、5hpo食餌と比較してフェニレフリン依存性内皮によって誘導される弱毒化血管収縮を示した。 アニオンスーパーオキシドのようなフリーラジカルは、血管収縮を含む血管反応性の増加に関連している。 この研究の血圧上昇効果は、繰り返し加熱された油が血管反応性の減衰を引き起こすことを示した以前の研究と同様であった。 繰り返し加熱された油はまた、血圧を上昇させる可能性のある有毒な生成物を生成し、内皮バランスを中断する。 ビタミンや抗酸化物質を含む食品は、血管反応性を改善し、高血圧を防ぐことができる血管への悪影響を減少させることができ、内皮バランスを維 VCOの補足は酸化防止剤で豊富であるのでendothelial機能を改善することができます。

5. 結論

この研究は、繰り返し加熱されたパーム油を与えた雄ラットにおけるVCO補充が血圧の上昇を防止し、一酸化窒素の失活を減少させることができ さらに、VCOは弛緩に影響を与えませんが、内皮の血管収縮を減少させます。

謝辞

この研究は、助成金UKM-FF-03-FRGS0031-2010によって資金提供されました。 Juliana Abdul Hamid氏、Fadhlullah Zuhair氏、Sinar Suriya Muhammad氏、マレーシア大学Kebangsaan大学およびマラヤ大学の薬理学部門のスタッフの技術支援に感謝したいと思います。