ポリオウイルス/C型肝炎ウイルス(HCV)キメラの遺伝子解析:ポリオウイルスCloverleafとHCV5’非翻訳領域の配列との相互作用が複製表現型をもたらす
ABSTRACT
内部リボソームエントリサイト（Iress）は、外来ウイルスゲノムまたは人工ジシストロニックMRNAで機能することができます。 我々は、野生型c型肝炎ウイルス（HCV）特異的配列とポリオウイルス（PV）5’末端クローバーリーフPV/HCVキメラウイルス（HCV IRESを含む）の間の相互作用を記述し、複製表現型 ヌクレオチド（ｎ Ｔ）２ ９における点突然変異またはＨＣＶ５’非翻訳領域におけるｎｔ４ ０までの欠失のいずれかが、複製ブロックを除去し、高力価に複製するＰＶ／ＨＣＶ IRESベースのジシストロニック発現ベクターが構築されているときに、IRESと周囲の異種RNAとの間の偶然まだ壊滅的な相互作用を考慮する必要があります。
すべてのpicornavirusのゲノムは5’および帽子独立した方法のウイルスのゲノムmrnaの翻訳を可能にする内部リボソームエントリサイト(IRES)と示される遺伝の要素(5, 12, 13, 16, 20, 25). 同様の遺伝的要素は、C型肝炎ウイルス（HCV）（24）、ヘパシウイルス、およびウシウイルス下痢ウイルス（21）、テフラビウイルス科のペスティウイルスのゲノムでも発見されている。 IRESsはゲノムの5’末端セグメントに位置し、ポリタンパク質合成の開始を制御する。 しかし、特定の昆虫RNAウイルス、例えばPlautia staliintestineウイルスは、同族のIRESがゲノムの5’末端の下流に数千ヌクレオチドをマッピングし、二つの異なるポリタンパク質をコードする二つのシストロンを分離するという点で例外的である（23）。 これは、我々は以前にPVポリタンパク質（16）のコード領域に脳心筋炎ウイルスのIRESを挿入することによってdicistronicポリオウイルス（PV）を設計していることが興味 ＩＲＥＳ要素によって分離された二つのポリタンパク質をコードするこのジシストロニックＰ Ｖの遺伝的組織は，Ｐ．ｓｔａｌｉ腸ウイルスのそれと密接に類似している。
IRES要素は、ヌクレオチド配列ではなく機能によって定義されます。 実際、PV、ピコルナウイルス、およびHCV、フラビウイルスのIRESsは、共通の任意の配列であればほとんど持っていない、まだ両方の翻訳の開始のための内部リボソームエントリのプロモーターとして機能します。 この現象は、同族のＰＶ ＩＲＥがＨＣＶのそれと交換されたキメラＰＶ／ＨＣＶウイルスにおいて最も明白である（１ ５、２ ８）。 予期せぬことに、HCV IRESは、そのポリタンパク質を開始するAUGコドンの下流の配列を含む（15、22）。 生存可能なＰＶ／ＨＣＶキメラウイルスを構築する際には、生存可能なウイルスを得るためにコアタンパク質をコードする配列の一部が必要であった（図１）。1、Δコア）（15）。 Δ Ｃｏｒｅ配列は、Δ Ｃｏｒｅ／ＰＶ融合ポリタンパク質の形成をもたらし、これは、Δ Ｃｏｒｅ＊１ａ接合部におけるＰＶウイルスプロテイナーゼ２Ａｐｒｏによる切断を介して処理されなけ 1) (28). しかし、Δ Core配列の翻訳から生じるコア配列コードされたペプチドの産生は、P/H710-d17*におけるHCV IRESの機能には必要ではない（28）。 （以前の研究では、キメラゲノムがHCVゲノムのヌクレオチド18〜710からHCV特異的配列を含んでいたので、P/H710-d17はP/H701-2Aと命名された。 この論文におけるHCV5’非翻訳領域の番号付けは、全長HCV5’NTRの番号付けに準拠しています。)
