解剖学と生理学

本研究は、動物の家の実験動物のケアと使用のための規則と規制で行われ、それぞれの実験は中央動物倫理委員会によって承認された。 平均年齢45日と25-35gmの体重を持つ25女性スイスアルビノマウスは、異なる繁殖コロニーから、動物の家からランダムに選択されました。 これらの女性の非妊娠成人は、さらなる世代の10匹の子犬を調達することを目的として、同じ品種の雄マウスによって意図的に交尾された。 ステンレス鋼のトッピング単一の強く、頑丈なヘテロ接合性の男性とプラスチック製のポリカーボネートケージでは、継続的に20-25Cと55±5％の湿度、12hrs後 雌マウスは膣クロスプラグを調べ、よく視覚化プラグの存在は確認された妊娠としてマークされ、妊娠のゼロ日が割り当てられた。 7日目に、妊娠差し込まれた女性の8と9は、腹部触診によって妊娠のためにチェックされました。

AgNpsの特性評価

研究購買源からの銀ナノ粒子は、temによってその一次サイズと光子相互相関分光法（PCCS）と紫外可視（UV–Vis）分光法、動的光散乱とゼータ電位によ Ａｇｎｐｓの代表的なＴＥＭ写真を示した。 PVP被覆AgNpsのTEM画像を1に分散懸濁させた。5M NaClは製造業者によって示される第一次粒度を確認しました。 コーティングされていない銀ナノ粒子は、50-100nmの範囲内の不均一な分布を発見し、そのほとんどは71nmの周りにある。

懸濁粉末AgNpsの場合、TEM画像は、水性環境下で銀ナノ粒子が凝集し、大きな凝集体を形成し、その多くは50nmよりも大きいことを示した。 この結果は、動的光散乱法（ゼータサイザ）から得られた流体力学的サイズ分布の結果と一致する。 ＥＤＸ分析により，コロイド状および乾燥粉末Ａｇｎｐの両方に元素銀のみが存在することが確認された。 ICP-AESの結果によると、コロイドおよび懸濁粉末AgNpsの酸消化ストック中のAgイオンの濃度は、それぞれ1908.1および447.2mgl-1であった。 また、ＸＲＤパターンの結果は、粉末型Ａｇｎｐの結晶性および元素結晶性銀の存在を確認し、また、金属銀以外の他の相も、試料中に存在しなかった。 さらにXRFの結果は粉にされたタイプAgNpsの純度が97.86%であったことを示しました。

繰り返し経口投与によるAgNpsコロイド溶液の暴露

妊娠マウスに、通常の生理食塩水（偽対照）をビヒクルとして二重投与し、5、10、15、20mg/kg b.w.の用量で、鈍い先端 偽対照動物は、処理動物および未処理動物を用いた実験に含まれる。

解剖および摘出

GD18では、妊娠した母親の子宮の左右の角を、深いエーテル/クロロホルム麻酔下で腹側開腹術後に摘出し、解剖によって採取された新鮮なダム250をペトリ皿上で水道水で洗浄して血液および羊水を除去し、ろ紙で乾燥させ、95％アルコール中で48時間脱水し、最後に1％KOHに曝して一貫性の摘出およびアリザリン染色プロトコルを行った。正常か異常な骨の適切な視覚化のため。13

方法（抜去およびアリザリン染色の技術による骨格異形学の評価）-：

骨格異形学の研究は、抜去およびアリザリン染色の技術によって行われた。 各群からの全ての標本（５ ０匹の仔）を、９ ５％のアルコール（整流された精）中で４ ８時間脱水し、次いで除去し、水道水を流して洗浄し、次いで１％ＫＯ ｈ溶液（ＫＯ Ｈ１ｇｍ＋１ ０ ０ｍｌ ｄ．ｗ．） 腹側開腹術を行った後、重要な器官が除去される。 標本は、肉、腱、筋肉および内臓が透明&明確であり、骨および軟骨の透明な可視性が続く解散するまで、少なくとも2-4日間、1％水酸化カリウム（KOH）溶液に十分 それは変色し、廃棄物になると毎日のソリューションが変更されました。

透明な骨および軟骨の可視標本を同じ1％KOHに入れ、6-8滴の1％アリザリン染色を加えて深い紫がかった赤色に着色した。 溶液を１時間に数回穏やかに振盪した。 その後、同じ手順をさらに2-3日間継続し、骨および軟骨に深い紫色の赤色を与える。 サンプルの染色および平滑化のために、40％、80％（40mlグリセロール+60ml蒸留水、80mlグリセロール+20ml蒸留水）および1-2結晶チモールを長期保存のために添加し、最終的に100％グリセロールに維持し、写真&強力な手のレンズ観察のために供される。

合計250個の胎児を25人の母親から1、2、3、4、および5群から採取し、そのうちすべてのサンプルを骨格異形実験に曝露した。 60胎児は再吸収が観察された。

統計

骨格奇形の割合は、各グループから評価され、異形に関与する骨の数によって評価され、最後に、用量依存性催奇形性因子について、グループ間とグループ内 この目的のために使用される多重ANOVAおよび記述統計量（事後分析）検定。

観察と所見

骨格異形の割合は、15mg AgNpsおよび20mg AgNps/kg b.w.処理されたグループの子犬で高く、最も高かった（表1）。

低用量AgNps治療群（0.5&1mg/kg b.w。）は、骨格異常の非常に最小限の割合が観察されたので、これらの治療群は、ほぼ対照群胎児と考えられていた（図1）。

図1対照胎児アリザリン染色背側図（A）および側面図（B）。

5mg AgNps/kg b.w.治療されたグループpupの一つは、胸骨バーからの未骨化5番目の胸骨セグメントと胸骨裂と診断された未骨化Manumbriumセグメントを示した。 他の胎児は、上顎および下顎形成不全、未分類の前頭骨、頭頂骨および鼻骨、股関節骨の後部セグメントの融合の失敗、胎児の一つの左側に初歩的な見られる10,11および12番目の肋骨を示した。 6-12番目の肋骨の中間軸の欠如は、連続した肋骨間の空間の増加とともに、異なるグループからの複数の胎児で示され、ウェブ空間の増加と診断された、体&棘突起の欠如は、この治療群の胎児から1％の症例で近いタイプの神経管欠損と診断された胸椎セグメント全体から見られる。 このグループで計算された骨格異形の割合は32％であった（図2）。

図2 5mg AgNps処理群胎児アリザリン染色背側図(A)および(B)、横側図(C)腹側図(D)および背側図(E)

10mg AgNpsによって扱われるグループの胎児は腰神経およびsacral椎骨の不在、情報通の骨の不在、軟骨のないひどく退化させた肋骨の形で骨格dysmorphologyを示しました、前頭および頭頂の骨は未分類および未開発を示しました、脊柱側弯症は胎児の1つの胸部および腰神経地域で観察されます、頚部椎骨の不在は見られます、上顎の形成不全、矢状の開示 冠状縫合も見られる。 未発達の下肢の骨は、胎児の一方の両側に見られる。 このグループで計算された骨格異形の割合は44％であった（図3）。

図3 10mg AgNps処理群胎児アリザリン染色背側図(A,B)。

15mg AgNps治療群のうち、8匹の仔には頚椎がなく、12番目の肋骨がなく、残りの椎骨が未発達の棘突起が観察され、胎児の足の背側には中足骨が見られ、腹側には未分類の股関節骨が見られ、&線維症も見られ、頭蓋骨の側方に線維化した未分類の側頭骨が見られ、無名骨の近位セグメントが見られ、脊柱異常が初歩的な6番目と見られた。9日肋骨と10日、11日、12日の不在が観察されます 一方の胎児には肋骨、未骨化頭頂骨も見られ、一方の胎児にはl1-L5に脊柱側弯症を伴う無脳症が見られ、一方の胎児の背側視には両側の未骨化肩甲骨が見られ、一方の胎児には6番目から12番目の肋骨に軟骨の欠如が見られた。 このグループで計算された骨格異形の割合は60％であった（図4）。

図4 15mg AgNps治療群胎児アリザリン染色背側図（A、B）および腹側図（C）)

20mg/kg b.w。 AgNps治療群胎児は、骨格異形学（76％）の最も高い割合を提示されました。 一方の胎児では腰部に脊柱側弯症が認められ，一方の胎児では後頭骨，肩甲骨，股関節骨に未骨化が認められ，上顎骨，前頭骨，頭頂骨に大きな線維症が認められ，胸骨の第二-第六セグメントにも同様の症状が認められた。、足関節に裂け目が観察され、胎児の一方の左側の第1肋骨と第2肋骨と第5肋骨から第8肋骨の間にスペースの増加が観察され、また、胎児の一方の恥骨関節に裂け目が観察され、未骨化下顎形成不全、波状肋骨を伴う棘突起の欠如も観察され、一方の胎児では第2頚椎から第8頚椎の完全な融合が観察され、第1頚椎の残りの部分と明確に区別された。 また、軽度の脊柱側弯症と未分類の後頭骨と頭頂骨を観察し、胎児の右側に肩甲骨がなく、hypo plastic椎骨も見られました（図5）。

図5 20mg AgNps治療群胎児アリザリン染色背側図。