馬のClostridiumnovyiのタイプBによって引き起こされる伝染性の壊死性肝炎:theliteratureのケースのレポートそして検討 | Jiotower

伝染性の壊死性肝炎(INH)はClostridiumのnovyitype B.によって引き起こされます。この病気は普通この病気から死んでいる動物の死体で見られるsubcutaneousティッシュの暗い変色を与えられる”黒い病気”とまた言われるヒツジに影響を与えます。6INHは牛、ヤギ、馬などの他の種にも発生すると考えられていますが、羊以外の無生物については非常に限られた情報があります。2,3,19,15さらに、その厳格な嫌気性の性質のために、C.novyiタイプBの単離および同定はめったに達成されない。このため、INHの報告は、一般に、組織病理学、蛍光抗体検査（FAT）、および/または免疫組織化学（IHC）に基づく推定診断に限定される。 C.novyiのタイプはまれである決定される。 ここでは、Cによって引き起こされる馬INHの確認されたケースを提示します。novyi B型であり、この疾患に関する文献もレビューしている。

14歳、511kgのベイクォーター馬のゲルディングが、カリフォルニア動物衛生食品安全研究所システムのSan Bernardinobranchに死後検査と診断検査のために提出されました。 この動物は、進行性神経学的徴候の3次元病歴、38.8-40.5℃の直腸温度を有し、死の前に非ステロイド性抗炎症薬で失敗した。完全な剖検は、死の後-6時間行われました。

剖検では、馬は良好な栄養状態であり、十分な量の脂肪が保存され、死後分解の中等度の状態であった。 強膜，皮下および脂肪組織，関節血管の黄色異色が認められた。 多巣性斑状出血は大部分に存在した筋肉、腸管のしょう膜、腸間膜、ひ臓、胸膜、および心臓の乳頭筋。 静脈血は深赤黒であった。 心膜嚢は大量の血清血流で膨張し、腹腔内に豊富なフィブリンストランドを含む類似の流体の-5Lがあった。肝臓は著しく拡大し、縁は丸みを帯びており、左葉はしっかりしており、暗赤色から黒色であり、多数の被膜下および深い実質ガスバブルを有し、カプセル上に豊富なフィブリンを有していた（図）。 1A）。 この葉の切断部分には、直径約15cmの薄い出血性の縁に囲まれた薄い領域があった（図。 1B）。 脳と脊髄を覆う髄膜はびまん性に充血し，大脳皮質全体に点状出血があった。 枝肉の残りの部分では他の有意なgrosslesionsは観察されなかった。

脳、肺、心臓、横隔膜、肝臓、脾臓、胃、腸、膵臓、副腎、腸間膜、腎臓、および膀胱のサンプルを収集し、10％緩衝ホルマリン（pH7.2）で48時間固定し、4μ m厚のヘマトキシリンおよびエオシン（H&E）染色切片の生産のために日常的に処理した。 肝臓および腎臓切片もそれぞれグラムおよび岡島染色で染色した。

肝臓のサンプルを無菌的に採取し、5％ヒツジ寒天プレート上で好気性および嫌気性培養を48時間行った。 PCRは、中枢神経系プールされたサンプル上の西ナイルウイルス（WNV）と鼻スワブ上の等ヘルペスウイルス1（EHV-1）のために行われました。 肝臓試料に対して鉛，マンガン，鉄，水銀，ひ素，モリブデン，亜鉛，銅，カドミウムを含む重金属スクリーンを行った。間接脂肪を用いてＳａｒｃｏｃｙｓｔｉｓｎｅｕｒｏｎａに対する抗体について脳脊髄液を試験した。 肝臓塗抹標本は、Ｆａｔｆｏｒ Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｃｈａｕｖｏｅｉ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｅｐｔｉｃｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｓｏｒｄｅｌｌｉ、およびｃ．ｎｏｖｙｉによって商業コンジュゲート（ＶＭＲＤ、Ｐｕｌｍａｎ、Ｗ Ａ）を用いて処理された。 さらに、市販のキット（ＲＴＵ Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎｅｌｉｔｅ ＡＢＣ ｓｙｓｔｅｍ，Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，Ｃ Ａ）を使用して、肝臓のホルマリン固定パラフィン包埋切片を、Ｃ．ｎｏｖｙｉのための間接ｉｍｍｕｎｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅｔｅｃｈｎｉｑｕｅによって処理した。 内因性ペルオキシダーゼ活性は、抗原検索のためのpepsintreatmentに続いて、3％過酸化水素溶液で消滅しました。 次いで、試料をBackgroundPunisher(Biocare Medical,Concord,CA)とインキュベートして非特異的結合を遮断し、その後、ヤギ抗C.novyiポリクローナル抗体(VMRD)と37℃で60分間インキュベートした。 Ｖｅｃｔｏｒｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（ｖｅｃｔｏｒｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を可視化のために使用した。 陰性対照として原抗体の代わりに正常ヤギ血清とインキュベートした肝臓切片を用いた。 牛からの肝臓c。 ｎｏｖｙｉは培養によって同定されており、ＰＣＲは陽性対照として使用された。＜４ ３ ４ ５＞＜３ ３ ３ ２＞肝臓試料を、製造業者の指示に従って、ＤＮＡ抽出のために処理した（Ｑｉａａｍｐ ＤＮＡ ＦＦＰＥ ｔｉｓｓｕｅ ｋｉｔ，Ｑｉａｇｅｎ，Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。 抽出したＤＮＡを，ｃ．ｓｅｐｔｉｃｕｍ，Ｃ．ｎｏｖｙｉ型Ａ，Ｃのフラジェリンゲン（ｆｌｉｃ）のセグメントを増幅するための多重ＰＣＲアッセイのテンプレートとして使用した。 ｎｏｖｙｉ型Ｂ，Ｃ．ｃｈａｕｖｏｅｉ，Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍを記載した。さらに、本発明者らは、ＴＨＥＣのセグメントを増幅するための従来のＰＣＲを開発した。 novyiのタイプBのアルファ毒素（TcnA）の遺伝子（GenBankのaccession JENV01000127.1）、thismicroorganismの主要な病原性の要因。 以下のオリゴヌクレオチド配列を設計した：５’−ＴＧＡＴＧＴＴＧＡＣＣＡＴＣＣＴＴＧＣＴＣＴ−３’（Ｃｎｔｂａｆ）および５’−ＣＣＴＴＡＴＧＣＡＡＡＧＧＧＡＴＧＧＣＧ−３’（Ｃｎｔｂａｒ）、これは、標的遺伝子の〜３ ４ ２−ｂｐ ＤＮＡ断片を増幅する。 従来のPCRは、抽出されたDNAの5μ l、0を含む25μ lの総体積で行われた。５、５ ０Ｕ／ｍＬ）、ｄＮＴＰｓ（４ ０ ０μ Ｍ）、およびＭｇｃｌ２（３ｍ Ｍ）を含有するＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（２Ｘ，Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗ Ｉ）。 サーモサイクラープロファイルは以下の通りであった：94℃で5分間、30サイクルの94℃で1分間、55℃で1分間、および72℃で1.5分間、続いて72℃で7分間の最終 試料を４°Ｃｕｎｔｉｌで保持し、ＰＣＲ反応を、エチジウムブロミド（Ａｍｒｅｓｃｏ、Ｓｏｌｏｎ、Ｏ Ｈ）染色１％アガロースゲル（Ａｇａｒｏｓｅ ＳＦＲ、Ａｍｒｅｓｃｏ）中で紫外光下で可視化した。 Cから抽出されたDNAextracted。 ｎｏｖｙｉ ｂ型（ＡＴＣＣ２ ５ ７ ５ ８）、Ｃ．ｎｏｖｙｉ ａ型、Ｃ．ｓｅｐｔｉｃｕｍ、Ｃ．ｃｈａｕｖｏｅｉ、およびＣ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍ培養物を陽性対照として使用した。 DNAの代わりに水を陰性対照に使用した反応。

顕微鏡的には、肝嚢はセルデブリと混合した豊富なフィブリンで覆われており、様々な大きさの被膜下および深部実質気腫性水疱があった。 最も顕著な所見は、多数の生存可能なおよび変性好中球、出血、フィブリン、細胞破片、およびグラム陽性細菌ロッドの大きな凝集体の縁に囲まれた多巣性から局所的に広範囲の凝固性壊死であり、そのうちのいくつかは終末下胞子を有していた（図。 1C,,D)。D）。 介入した実質および影響を受けていない肝臓では、胆汁うっ滞、多焦点出血、および血管の分節からびまん性フィブリノイド壊死があり、多くはフィブリン血栓も含まれていた。 腎尿細管上皮は軽度の細胞質空胞化を有し，腎尿細管内に蛋白質およびか粒キャストが存在した。 このキャストは岡島染色で陽性に染色された（図。 1E）。 脳では、びまん性鬱血、多巣性およびランダムに散在する血管周囲出血、および酸性浮腫を伴うVirchow-Robin空間の中等度から顕著な拡張があった。 内臓腹膜は豊富なフィブリンで覆われており，多数の生存および退化した好中球が混在していた。 副腎の皮質および髄質のいくつかの小動脈および静脈もフィブリン血栓を有していた。 Thespleenは血管鬱血および多巣性実質および莢膜出血を有していた。 肺はびまん性に充血し，多巣性出血および浮腫を有し，フィブリン血栓を含むいくつかの血管に加えていた。 多発性心内膜出血，心膜下出血，胸膜下出血を認めた。

肝臓で観察された病巣内グラム陽性桿体の大部分は、C.novyi IHCに対して陽性であった（図。 1階）。 脂肪はＣ陽性であった。novyi、しかしテストされた他のclostridial種のために否定的。 肝臓サンプルは、Ｃ．ｎｏｖｙｉ型Ｂ ｆｌｉｃａｎｄ Ｔｃｎａ遺伝子に対して陽性であり、試験した他のクロストリジウムのｆｌｉｃ遺伝子に対して陰性であった（図１ ０Ａ）。 2). 脳脊髄液の試料はＳ．ｎｅｕｒｏｎａ免疫蛍光抗体アッセイで陰性であった。 WNVおよびEHV-1のPCRは陰性であった。 好気性または嫌気性培養によって有意な細菌増殖は達成されなかった。 重金属スクリーンは鉄のinliverサンプル（1,500ppm;参照間隔:100-300ppm）の高い集中を明らかにした。

ｃ．ｎｏｖｙｉに対する脂肪およびＩＨＣの結果と相まって，肉眼的および顕微鏡的変化に基づいてＩＮＨの推定診断を行った。 Ｃ．ｎｏｖｙｉ型Ｂによって産生されたＩＮＨの診断は，この微小生物のＦＬＩＣ遺伝子とＴｃｎａ遺伝子のＰＣＲ検出により確認された。 私たちの知る限り、ihnの疑いのある6例のみが報告されています以前は馬で行われていました。 オーストラリア、8、9、11、ニュージーランド、23スコットランド、19、米国（モンタナ）で発生した。これらの場合、推定診断は、脂肪、9、16、19IHC、23および/または培養によるC.novyiの検出と相まって、肉眼的および顕微鏡的所見に基づいていた。9,19しかし、C.novyiinvolvedのタイプは、それらの症例のいずれにおいても決定されなかった。

c.novyiはグラム陽性の胞子形成嫌気性桿菌であり、動物の土壌および糞便中に一般的に見られる。15それは作り出される毒素の範囲に基づいてタイプA、BおよびCに分類されます。4C. novyiのタイプAは主に致命的な、浮腫誘発のalphatoxin（TcnA）、および非致命的なホスホリパーゼ、ガンマの毒素を作り出します;この細菌は通常withotherのclostridiaと機能する人およ Ｃ．ｎｏｖｙｉ型Ｂはまた，壊死性および溶血性ベータ毒素に加えてＴｃｎａを産生するが，前者はＩＮＨの病因にとって最も重要な病原因子であると考えられている。 C.novyiタイプCは非毒性であると考えられており、非病原性である。13,15C.haemolyticumは以前はCとして知られていました。 novyitype Dであり、一部の著者によってこの名前で言及されているため、ここではこの微生物について説明する。 C.haemolyticumはC.novyitype Bより大いにたくさんのベータ毒素を、しかしalsoproduces;この毒素はこの微生物の主要な病原性の要因として考慮され、bacillary hemoglobinuria(bh)、inhに臨床的にそして病理学的に非常に類似している病気のaffectingmainly牛に責任があります。11,10,14

Cの胞子。 novyiは環境条件に対して非常に耐性があり、胞子が土壌中に一般的に見られることを考えると、放牧動物はそれらを頻繁に摂取することがあります。6,19完全に証明されていないが、現在の教義は、摂取後、C.novyiタイプBの胞子が腸から吸収され、門脈循環を介して肝臓に到達し、その後、他の器官に到達す 胞子は貪食され、肝臓のKupffercells、および脾臓および骨髄のマクロファージに潜伏したままである。2,6INHは、両方の疾患が肝障害後に発生し、壊死を引き起こし、潜在胞子の発芽および毒素の産生に必要な関連する嫌気性条件を引き起こすことから、BHの対応物と考えられている。14未成熟型の肝筋膜の移動肝臓は、BHおよびINHin反芻動物の両方にとって最も重要な素因と考えられており、両方の疾患は、筋膜症の有病率が高い地域でより一般的である。反すう動物の1INHはまたFascioloidesmagna、Dicrocoelium dendriticumおよびandThysanosoma actinoidesを含むCysticercustenuicollisおよび他の寄生虫と、病気の病因におけるofthese寄生虫の役割が示されていないが、2、6、15、21関連付けられています。しかし、嫌気性条件の生成につながる任意の肝損傷は、INHのためのapredisposing因子である可能性があります。 これらには、肝切除、生検、脂肪変化、毛細血管拡張症、および毒性物質が含まれるが、これらに限定されない。 一度TcnAが生産され、cの栄養型によって放出される。 novyi B型は、そのモノグリコシルトランスフェラーゼ活性は、いくつかのグアノシン5′-三リン酸（GTP）-アクチン細胞骨格のinalterationと再分布の結果、ホストの細胞に結合3TcnAはまたvimentinおよびtubulinシステムを破壊します。7,18ThesechangesはINH15で見られるthewidempended流動extravasationおよびおそらくourreportの馬で観察されるmultisystemic血栓症の原因となる毛管内皮でより劇的であるようです。 羊では、この病気の非常に急性の性質は、臨床的徴候は困難であり、通常は動物が死んでいることが判明している。 徴候が観察された場合、それらは非特異的であり、衰弱、嗜眠、食欲不振、温熱療法、頻呼吸、過呼吸、および最終的には臥床が含まれる。 Clinicopathologicchangesは左の転位、azotemia、新陳代謝のアシドーシスおよび上昇したレバーおよび筋肉酵素の活動を用いる好中球増加を含むかもしれません。15,19

推定INHの6例のみがウマで以前に記載されていることを考えると、利用可能な疫学的、臨床的、および病理学的情報は乏しい。 この限られた数の症例に基づいて、ウマINHの明らかな性別または品種素因はなく、若年動物および成体動物の両方が影響を受ける可能性がある。 臨床経過は通常、反芻動物よりも馬で長く、12-72時間持続し、結果は常に致命的であった。 臨床徴候は、軽度から重度まで様々である運動失調および頭痛、充血および/またはicteric粘膜および眼強膜、腹痛、および臥床を含む神経学的徴候を含む抑制およ20,23腹部穿刺を行ったある症例では、タンパク質濃度の上昇と特異的重力を伴う濁った液体の量の増加が得られた。9

INHを持つ馬の臨床病理学的プロファイルは非常に可変であり、彼らは毒血症と肝臓障害の異なる段階を表すかもしれません。 これらの変化は、左シフトを伴う好中球増加、肝臓酵素活性の上昇、血小板減少、高フィブリノゲン血症、高ビリルビン血症、および電解質の減少した濃縮を含む可能性がある。9,16,19さらに、活性化部分トロンボプラスチン、プロトロンビン、およびトロンビン時間の増加が報告されている。23これらの変化は、観察された毛細管マイクロトロンビと組み合わせて、播種性血管内凝固のsuggestive、大型動物における毒血症および溶血の経過中に起こ22,23凝固因子のTheresulting消費、肝障害のための合成の減少、および血管内皮に対するTcnAの相乗作用は、ofINHの症例で観察された広範な出血の原因となる。

反芻動物にはicterusは記載されていないが、ウマはINHに関連するこのサインを示すことがある。19,23黄疸は、岡島染色によって腎尿細管にヘモグロビンが可視化された場合のように、肝障害の重症度とある程度溶血に関連していると思われる。 私たちの馬研究は肝臓中の鉄濃度を適度に増加させ、溶血過程を示唆していた。しかし、肝臓中のこのレベルの鉄は、さまざまな原因から馬に共通する所見であり、しばしば鬱血および死後の自己分解に関連する付随的な所見と

馬はC.novyitype Bによって産生される溶血性ベータ毒素の作用により他の種よりも感受性が高いと仮定することができるが、hemoglobinuric変化は推定例ofINHでは記載されていない。16,23C.haemolyticumと比較されて、C.novyiのタイプBはベータ毒素の低レベルを作り出します;したがって、INHの病因への寄与は、ウマにおいてある程度の溶血を引き起こすbeminorと推定されるが、有意なヘモグロビン尿症関連の変化を誘導するのに十 さらに、以前の症例のいずれも、病気の原因物質としてのc.haemolyticumの役割を除外していないため、最終的な結論はそれらの症例から引き出すことはできま Ｃ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｍはｍａｌｄｉ-ＴＯＦによる同定により敗血症性腹膜炎の症例に関与しているが，その特定の症例ではＰＣＲまたは毒素の同定は試みられなかった。11

馬におけるINHの素因は必ずしも決定されていないが、f.hepaticaおよび関連するtrematodesの肝移動は、Strongylidaeファミリーのメンバーと同様に、suggestedされている。9,12,19さらに、臨床徴候のtheonset前に駆虫治療は、おそらく移行寄生虫の破壊と関連した肝臓necrosisassociatedのある程度を引き起こすことにより、thedisease、9、16、23の潜在的なトリ しかし、この仮説を支持する科学的根拠は得られていない。 残念ながら、既知のものはありません私たちの場合には予測因子が決定されました。

我々の場合と同様に、以前のほとんどの報告では、一貫して左ローブに位置する肝臓に影響を及ぼす壊死の単一の（1つのケースでは複数の）焦点が記載されていた。 これは、無作為に分布している羊のINHとは対照的であり、小さな壊死病巣がより一般的である。6,15この理由分布の変動は不明である。 左葉の優勢oflesionsはtheliverの特定の葉への門脈の血の差動流れのためにisresponsibleいわゆる門脈の流出と関連していることは可能です。 C.novyiはおそらく小腸から吸収され、この器官からの血液は左ローブへの門脈ストリーミングに従うので、これはこの葉が主に影響を受ける可能性がある。6肝性脳症に関連する変化の欠如（例えば、高アンモニア血症に関連するアルツハイマー II型星状細胞腫）6は、この症例および以前の症例における神経学的徴候が、脳に認められる出血、鬱血、およ

INHは、神経学的臨床徴候、中毒症、急性肝不全、および腹膜炎を有する馬の鑑別診断のリストに含まれるべきである。 ペニシリンやテトラサイクリンを高用量で投与しても効果があると考えられている。 novyi、毒素の高度な産生は、通常、予後不良である。19この疾患が肝吸虫および/または他の寄生虫と明らかに関連している地域では、寄生虫の負担を軽減し、不十分な水はけの牧草地への動物のアクセ15

いくつかのクロストリジウム疾患が死後分解の促進に関連していると仮定されていることを考えると、inhの正確な診断のための重要な考慮事項は、動物の死亡後の組織の迅速な評価と保存の必要性である。6,23肝病変におけるC.novyiの臨床歴、ルーチン剖検、組織病理学、および免疫染色は、INHの推定診断を提供するために不可欠です。 単離は必ずしも成功するわけではないので、微生物の厳しい嫌気性要件を考えると、PCRによる分子同定は病因診断を提供し、c.novyiタイプBを他のクロストリジウム病原体から区別するための貴重なツールである。