定量的サイトメガロウイルスDNA検査の解釈：実験室の視点を理解する | Jiotower

分析試験特性

試験結果を適切に使用して解釈するためには、ウイルス負荷試験の性能特性が理解されなければならない。 これらには、検出限界（LOD）、loqの下限と上限、線形範囲、精度（再現性）、および精度が含まれます。 LODは、複製物の95％で検出できるDNAの最低濃度として定義され、通常は定性的な分子試験に使用されます。; しかしながら、この用語は、定量的ウイルス負荷試験にも適用することができる。 上側および下側のＬｏｑは、「許容される精度」で定量することができるＤＮＡの最高および最低濃度である。 現在、「許容可能な精度」について合意された定義はないため、個々の研究室ではこれを局所的に定義しています。 “許容精度”が定義される方法は、LOQに大きく影響する可能性があります。 ＬＯＤは、下位ＬＯＱと同等であってもよいし、下位ＬＯＱよりも低いものであってもよい。 後者の状況では、試験はＣＭＶ ＤＮＡを検出することができるが、その値を正確に定量することはできない。 これらの場合、実験室は結果を”検出されたがLOQ以下”と報告することができ、一部の実験室はこれを”低陽性”と報告する。 例えば、私たちの研究室では、CMVウイルス負荷試験のLODは100コピー/mLであり、LOQは300コピー/mLである。 臨床医との協議の後、100〜300コピー/mLの値を「低い陽性」結果として報告することを決定し、>300コピー/mLの値は整数値として報告された。

感染性病原体の検出には非常に敏感な分子検査が重要であることが多いが、CMV DNA検査ではそうではない可能性がある。 低レベルのCMV DNA（<100-500コピー/mL）の臨床的意義は、特に全血または血漿中の低レベルのCMV DNAが必ずしも疾患の発症と相関するとは限らないため、全血サンプル 肝臓移植レシピエントにおけるCMV疾患の自然史研究を含む、治療の閾値を決定するためのいくつかの研究が行われている。 COBAS Amplicorモニターテスト（Roche Molecular Diagnostics）を用いて、著者らは、2000-5000コピー/mLのウイルス負荷値が末期臓器疾患の発症と相関することを示した。 このカットオフ値はテストに依存し、他のLdtでは高くても低くてもかまいません。 研究はまた、ウイルス負荷値およびウイルス負荷の変化率の両方が、活動性疾患の発症の重要な予測因子であることを示している。 ウイルス負荷値の増加速度が速いほど、CMV疾患を発症するリスクが高くなる。 テストが国際規格と再校正されれば、普遍的な臨床的に関連したLODおよびより低いLOQは識別することができます。 現在入手可能なデータおよび経験に基づいて、２ ５ ０〜５ ０ ０ＩＵ／ｍＬは、適切なＬＯＤおよび／またはより低いＬＯＱであり得る。

ほとんどのLdtがリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応技術を使用していることを考えると、CMVウイルス負荷試験の線形範囲は、通常、少なくとも6log10であり、例えば、試験は2.0log10コピー/mL（100コピー/mL）から7.0log10コピー/mL（1000万コピー/mL）を検出することができる。 2009年にEmory Medical Laboratoriesで行われたCMVウイルス負荷試験のレビューでは、血漿サンプルで行われた約8500のCMV DNAウイルス負荷試験のうち、671（7.9％）が陽性であったことが示された。 これらのうち、394（58.7％）は<1000コピー/mLであり、169（25.2％）は1000と10 000コピー/mLの間であり、63（9.4％）は10 000と100 000コピー/mLの間であった。 加えて、45(6.7%)は、>100,000コピー/mLのCMV DNAウイルス量を有していた。 低ウイルス負荷値が一般的であるが、それらの臨床的意義は不明である。 非常に高いウイルス負荷の価値は珍しく、起こるとき、通常一次CMVの伝染のimmunosuppressed患者または非常に厳しい病気とのそれらで見られます。 一部の個体には1000万という高いウイルス負荷値が存在する可能性があるため、試験の定量化の上限はこの範囲であるべきである。

個々の患者における縦方向のウイルス負荷値の重要な違いの解釈には、試験の精度または再現性の理解が必要です。 典型的には、ウイルス負荷試験の変動性は、下部および上部のLOQの近くで最大であり、アッセイの中間範囲で最も低い。 その結果、低いウイルスの負荷の価値の小さい変更は重要ではない;例えば、明確な相違はこの相違が試金の可変性の内にあるのでウイルスの負荷の価値が200コピー/mLから500コピー/mLに増加した患者の結果の間に存在しない。 ウイルス負荷値の臨床的に重要な変化に関する最も有用なデータは、HIV-1の経験から来ています。 これらのFDA承認試験では、慢性的に感染した未治療の個体で観察された生物学的変動性（約0.3log10コピー/mL）と比較して、試験の変動性は0.1log10コピー/mLから0.2log10コピー/mLの範囲である。 したがって、>0.5log10コピー/mLのウイルス量の変化は、ウイルス複製の生物学的に重要な変化を表すと考えられている。 0.5-log10コピー/mLの価値は他の多くのウイルスの病原体との使用のために広く採用されましたが、CMVのために正確ではないかもしれません。 ＣＭＶの生物学的変動は知られていないので、ウイルス負荷値の重要な変化は、歴史的に、試験変動性のみに基づいて評価されてきた。 HIV-1を用いたさらなる研究は、ウイルス負荷値の5倍の変化を識別するために、試験のSDが≤0.15log10コピー/mLである必要があることを示した。 CMV Ldtの場合、アッセイの変動性は、FDA承認のHIV-1ウイルス負荷試験で見られるものよりも良好ではないと予想され、特に低いLOQの近くでは、より高い可能性があります。 したがって、<1000コピー/mLのCMVウイルス負荷値を検出すると、<5倍の変化（0.7log10)はほとんどウイルスの複製の臨床的に重要な変更を反映しません。 値>1000コピー/mLでは、ウイルス量の3倍（0.5log10）の変化が有意である可能性がありますが、これはLdt間で異なる可能性があります。 臨床医は、log10値として表現されたときにウイルス負荷値の小さな変化を過剰に解釈する可能性が低い可能性があるため、いくつかのセンターは、ウイル

ウイルス負荷試験のためのベースラインサンプルは、CMVウイルス負荷試験が数日前に行われた場合でも、CMV治療が開始された日に収集する必要があ CMVのウイルス負荷の急速な増加は処置の時にCMVのウイルス負荷の価値があることを重要にする未処理の病気の患者で数日に起こるかもしれません。 ウイルス負荷値が上部LOQを超える場合は、実験室で標本を希釈して実際のウイルス負荷値を決定することが推奨されます。 治療が開始されると、血漿中のCMV DNAの半減期は3-8日であるため、モニタリングのための理想的な間隔は毎週である。 この間隔を使用する別の理由は、治療開始後数日後に患者においてCMV DNAウイルス負荷が増加することが珍しくなく、これは治療失敗と誤解され 血漿中または全血中に持続的なDNAを有する患者は再発のリスクが高いため、現在のガイドラインでは、ウイルス負荷値が検出されないまで抗ウイルス療法を継続することが推奨されている。 一部の患者は、血漿または全血中のCMV DNAの持続的な低レベルを有し、CMV疾患または再発を発症することはない。 これらの個体では、任意の所与のウイルス負荷値の有意性を評価するよりも、経時的にウイルス負荷値の傾向を追跡することがより有用である。 薬剤抵抗力があるウイルスのために心配であるウイルスの負荷パターンは十分な療法の2週後に減っていないそれら、ウイルスの負荷低下の率のプラトーとのそれら、およびウイルスの負荷の最初の低下そしてそれに続く増加があるそれらが療法で間、含まれています。 これらの患者は、血漿試料から直接UL97および/またはUL54（ポリメラーゼ）遺伝子を配列決定することによって耐性ウイルスを評価すべきである。

CMV DNAウイルス負荷試験は、他のヘルペスウイルスと交差反応しないように設計されています。 免疫不全患者では、２つのヘルペスウイルス、例えば、ＣＭＶおよびＥｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルスの検出は、両方のウイルスの再活性化を反映し、交差反応性に起因しない。