Cnidium officinale MakinoおよびLigusticum chuanxiong Hortのフリーラジカル掃気活性。 メタノール抽出物 | Jiotower
結果と考察
炎症過程、冠動脈疾患、老化現象などのいくつかの病理学的事象は、ROSの生成に関連している。 したがって、本研究では、C.officinaleとL.chuanxiongの抽出物は、酸化的損傷から細胞を保護し、ROSの生成を阻害することができるため、抗酸化特性を有することを実証した。
TEACアッセイの場合、表1は、abtsラジカルをアッセイすることによって測定された水性系におけるC.officinaleおよびL.chuanxiongの抗ラジカル容量を示しています。 ABTSの試金が植物材料の総酸化防止活動を測定するのに使用されていました。 Rice-EvansとMillerによって使用されているように、TEACはTroloxのそれと比較して、ABTSラジカルカチオンを捕捉するための水素または電子供与性酸化防止剤の相対的 本研究では、C.officinaleおよびL. 0-150μ g/mlの範囲のchuanxiongは抗ラジカル活性を示し、これらのサンプルの抗ラジカル活性は抽出物の濃度の増加とともに増加し、C.officinaleおよびL.chuanxiongがフリーラジカル 表1に見ることができるように、ABTSラジカルカチオンに対するC.officinaleおよびL.chuanxiongの捕捉能力をアスコルビン酸のそれと比較した。 さらに，Ｃ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅはＴＥＡＣを介して測定した標準アスコルビン酸と比較してＡＢＴＳカチオンラジカルに対して顕著な掃気効果を示した。
Table 1
Antioxidant activities of methanol extracts of C. officinale and L. chuanxiong
| TEAC (mM TE/g) | ORAC (mM TE/g) | DPPH (mM TE/g) | |
|---|---|---|---|
| CO | 2.022 ± 0.538 | 0.484 ± 0.162 | 2.942 ± 0.495 |
| LC | 1.249 ± 0.224 | 0.260 ± 0.015 | 4.658 ± 1.183 |
| AAa | 0.828 ± 0.010 | 0.030 ± 0.018 | 1.332 ± 0.027 |
値は、３つの測定値の平均±ＳＤである。 CO:C.officinale、LC:L.chuanxiong、AA:アスコルビン酸、TEAC:Troloxの等量の酸化防止容量、ORAC:酸素の根本的な吸光度容量、DPPH:1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl
また、表１に試料のORＡＣを示す。 紅藻の多数の種から得られる非常に蛍光蛋白質、ベータphycoerythrin(PE)は遊離基の損傷のターゲットとして使用されました。 AAPHの熱分解によって発生するペルオキシルラジカルはphycoerythrinの蛍光性を急冷しますが、ペルオキシルラジカルと急速に反応する酸化防止剤の添加は蛍光強度の損失を阻害し、この阻害は抗酸化活性に比例します。 最終結果は、ブランクとサンプルの間のフィコエリスリン崩壊曲線の下の面積の差を使用して計算することができ、Trolox等価物で表されます。 本研究では、結果は、C.officinaleとL.chuanxiongが同様のプロファイルを持つ抗酸化能力を示すことを示した。 さらに，ORＡＣアッセイは，アスコルビン酸と比較してＣ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ抽出物中の抗酸化content有量の明確な増強を標準として示した。
安定したDPPHラジカルモデルは、フリーラジカル掃気活性の評価に広く使用されている、比較的迅速な方法です。 DPPHの根本的な清掃に対する植物の酸化防止剤の効果は能力を寄付する水素が原因であると考えられます。 酸化防止剤分子とラジカルとの反応による酸化防止剤によるＤＰＰＨラジカルの吸光度の低下が進行し，水素供与によるラジカルの掃気をもたらす。 表1は、C.officinaleおよびL.chuanxiong抽出物および標準の両方の捕捉能力に起因するDPPHラジカルの濃度の有意な減少を示す。 フリーラジカル掃気活性も濃度の増加とともに増加した。 これらの結果は、両方の抽出物がフリーラジカルの清掃に顕著な効果を有することを示した。 Lのメタノール抽出物。 ｃ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅメタノール抽出物よりもｃ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅメタノール抽出物よりも強いＤＰＰＨ捕捉活性を示した。 アスコルビン酸を標準で使用した。
さらに、特定のラジカルを捕捉する能力を標的とすることができる。 異なるROSは異なる反応機構を有するため、広範囲のROSに対する抗酸化活性を完全に決定するためには、より包括的な一連のアッセイを実施する必要 スーパーオキシドアニオン(O2·–)ラジカルは、生物学的システムの重要な要因です。 ＮＢＴ還元の阻害がスーパーオキシドスカベンジャー活性に起因するかどうかを決定するために，スーパーオキシド生成の非酵素系を用いた。 ＰＭＳ-ＮＡＤＨ-ＮＢＴ系では，ＰＭＳ-ＮＡＤＨのカップリング反応からの溶存酸素から誘導されるスーパーオキシドアニオンはＮＢＴを減少させる。 酸化防止剤による560nmでの吸光度の減少は、反応混合物中のスーパーオキシドアニオンの消費を示す。 表2は、アスコルビン酸によって示されるものと比較して、0-150μ g/mlのC.officinaleおよびL.chuanxiongメタノール抽出物によるスーパーオキシドラジカル生成の阻害％を示す。 C. ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅとＬ．ｃｈｕａｎｘｉｏｎｇメタノール抽出物はスーパーオキシドラジカルの用量依存的阻害を示した。 C.officinaleとL.chuanxiongの両方の抽出物は、強力なスーパーオキシドラジカル掃気活性を有する（IC50=96.30および93.85μ g/ml）。 得られた結果を考慮すると，Ｃ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅとＬ．ｃｈｕａｎｘｉｏｎｇのメタノール抽出物はスーパーオキシドラジカルの掃気によって示される抗酸化活性を有することが予想される。 すべてのこれらの抽出物のIC50値は、IC50が8.76μ g濃度で達成されたアスコルビン酸のそれよりも大きかった。
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C.officinaleおよびL.chuanxiongのメタノール抽出物のフリーラジカル掃気および金属キレート活性（IC50μ g/ml）
| H2O2 | OH· | NO· | 金属キレート化 | ||
|---|---|---|---|---|---|
| コ | 96.259 ± 8.024 | 136.280 ± 2.307 | 119.442 ± 7.444 | 57.252 ± 8.973 | 138.425 ± 13.292 |
| LC | 93.848 ± 9.529 | 136.318 ± 2.626 | 113.107 ± 8.890 | 76.502 ± 3.033a* | 17.451 ± 5.858a* |
| AAb | 8.762 ± 4.569 | 8.053 ± 3.677 | 3.034 ± 0.191 | 9.885 ± 0.478 | 43.235 ± 8.543 |
Values are means ± SD of three measurements. CO: C. officinale, LC: L. chuanxiong, AA: Ascorbic acid, O2·–: superoxide radical, H2O2: hydrogen peroxide, OH·: hydroxyl radical, NO·: nitric oxide radical
両方の抽出物によるH2O2の清掃は、h2O2に電子を供与し、それを水に中和することができるそれらのフェノールに起因する可能性がある。 二つの抽出物の間のH2O2掃気能力は、それらの電子供与能力に起因する可能性があります。 両方の抽出物がH2O2を効果的に捕捉する能力を表2に表示し、ここではアスコルビン酸のそれを標準として比較した。 抽出物は、濃度依存的にH2O2を捕捉することができた。 C.officinaleおよびL. アスコルビン酸は8.05μ g/mlを示したが、chuanxiong抽出物（0-150μ g/ml）は、それぞれ136.28と136.32μ g/mlのIC50を示した。 Ｃ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ値とＬ．ｃｈｕａｎｘｉｏｎｇ値との間の相関は統計的に有意ではなかった。 H2O2自体はあまり反応性がありませんが、細胞内にヒドロキシルラジカルを生じさせることによって細胞毒性を引き起こすことがあります。 したがって、H2O2を除去することは、食品システム全体で非常に重要です。
C.officinaleとL. chuanxiongメタノール抽出物はまた、デオキシリボース分解アッセイを用いてヒドロキシルラジカルを捕捉する能力を評価した。 この研究では、結果は、すべてのサンプルが同様のプロファイルで、デオキシリボース分解（0-150μ g/ml）を阻害することができたことを示した。 生化学的研究により，Ｃ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅとＬ．ｃｈｕａｎｘｉｏｎｇがデオキシリボース分解の濃度依存的阻害を引き起こしたことが明らかになった。 IC50値レベルでは、C.officinale（119.44μ g/ml）とL.chuanxiong（113.11μ g/ml）は同じ効力を示した。 各抽出物の総Ｏ ｈラジカルスカベンジ能力をアスコルビン酸のそれと比較した。
植物抽出物を測定し、一酸化窒素ラジカルに対するフリーラジカル掃気活性を比較した。 Ｃ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅおよびＬ．ｃｈｕａｎｘｉｏｎｇメタノール抽出物のＮＯ＊捕捉活性をＮＯ＊ドナーとしてＳＮＰを用いて調べた。 SNPから放出されたNOは酸素と反応して亜硝酸塩を生成する。 Noスカベンジャーは、PBS中のSNP溶液から放出されたNO·と反応する際に酸素と競合する。 本研究では、C.officinaleおよびLからの抽出物。 chuanxiongは·清掃能力を示さなかったが、いくつかの違いが認められた。 Ｃ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅのＮＯ＊掃気活性はＬ．ｃｈｕａｎｘｉｏｎｇよりも有意であった。 この阻害は、抽出物によるＮＯ＊の直接捕捉の結果でもあり得る。 C.officinaleはラジカルをクエンチするための最大の活動を持っていませんでした。 IC50値は、それぞれC.officinaleおよびL.chuanxiongの57.25および76.50μ g/mlであった。
c.officinaleおよびL.chuanxiong抽出物による鉄イオンのキレート化は、フェロジンがFe2+と定量的に錯体を形成すると推定された。 キレート剤の存在下では、この複合体の形成が破壊され、それによって複合体によって付与される赤色の形成も阻害される。 したがって、この色の変化の測定は、共存するキレート剤のキレート活性の推定を可能にする。 このアッセイでは，抽出物と標準的な抗酸化化合物の両方が鉄–フェロジン複合体の形成を妨害し，それらがキレート活性を有し，フェロジンと複合体を形成する前に鉄イオンを捕捉することを示唆した。 表2に示すように、Fe2+–フェロジン錯体の形成は、C.officinaleおよびL.chuanxiongメタノール抽出物の存在下では完全ではなく、抽出物の両方が鉄をキレート化することを示 Fe2+-フェロジン複合体の吸光度は、用量依存的に直線的に減少した（0-150μ g/ml）。 Ｃ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅとＬ．ｃｈｕａｎｘｉｏｎｇの両抽出物と対照との差は統計的に有意であった。 C.officinaleとL.chuanxiong、およびアスコルビン酸（すべてIC50μ g/mlで）のメタノール抽出物の金属キレート能力は138.43、17.45、および43であった。これは、抽出物と対照との間の有意な差であることが証明された。
C.officinaleおよびL.chuanxiongが細胞生存率に及ぼす影響を決定するために、N2A細胞をC.officinaleおよびL.chuanxiong（50-500μ g/ml）に1時間のインキュベーション時間で暴露した。図1において、C.officinaleと1時間のインキュベーション後のMTT試験は、対照と比較して処理されたN2A細胞培養における有意な生存率の差を示していない。 L.chuanxiongとの1時間後のMTT試験によって、生存率の有意な増加がLで観察された。 chuanxiong500μ g/mlは、対照と比較してN2A細胞を処理した。 図2に示すように、C.officinaleおよびL.chuanxiong（50〜500μ g/ml）の存在下で1時間のインキュベーションの後、決定は行わなかった。 L.chuanxiongによる治療は、対照と比較してNOの放出を有意に減少させなかったが、500μ g/ml C.officinaleはNO放出を有意に減少させた。 この結果から，ｃ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅおよびＬ．ｃｈｕａｎｘｉｏｎｇのメタノール抽出物は，使用用量で毒性効果を有さないと結論した。
N2A細胞における細胞生存率に対するC.officinaleおよびL.chuanxiongメタン抽出物の効果。 値は、３つの測定値の平均±ＳＤである。 •未処理の正常値と比較したP<0.05(ANOVA/Tukey))
C.officinaleおよびL.の効果 N2A細胞における一酸化窒素放出に関するchuanxiongメタン抽出物。 値は、３つの測定値の平均±ＳＤである。 *P<0.05未処理の正常と比較した。 （ANOVA/Tukey)
