골수종 종양의 클론 다양성:세포 세대에서 치료 의미에 이르기까지

클론 다양성의 개념은 암의 특징으로 잘 받아 들여지고 있습니다. 종양이 성장하고 진행됨에 따라 세포 집단의 유전 적 경관이 바뀔 수 있습니다. 이러한 변화는 주로 각 세포 분열 동안 또는 다양한 노출에 의해 자극 된 돌연변이 사건을 통해 발생하는 무작위 오류로 인한 것입니다. 이 무작위 사건 중 하나가 오른쪽 궤적에서 발생하면 그 초기 세포의 모든 후속 자손에 대한 생존 이점이 발생합니다. 클론 다양성의 토대를 이해 약물 선택을 안내 하 고 특정 치료에 반응/저항 수 있습니다 클론의 비율을 결정 하는 데 도움이 환자에 대 한 치료 계획의 필수적인 부분이 될 증명할 수 있습니다. 또한,골수종 치료에 사용되는 많은 치료법은 행동 메커니즘 또는 예기치 않은 2 차 효과를 통해 돌연변이를 유발할 수 있습니다. 종양 인구의 다양성을 모는 근본적인 돌연변이 비율에 개인적인 치료 그리고 특정 조합의 효력을 이해하는 것은 근본적인 돌연변이 비율을 증가하고 공격적인 복제품 개발의 증가한 리스크에 환자를 두는 식이요법을 확인하는 것을 도울 것입니다. 이러한 변화는 그 인구에서 선택 된 단일 셀 클론에 비해 대량 종양 인구의 차세대 시퀀싱에 의해 식별할 수 있습니다. 대량 종양 인구에서 발견 하는 돌연변이의 다양성을 식별 하기 위해 단일 셀 부모 인구를 복제 하 고 다음 시퀀싱 및 여러 개별 클론에 걸쳐 비교 같은 부모 인구에서 발생 하는 개별 셀에 존재 하는 돌연변이의 무작위 다양 한 더 나은 아이디어를 줄 것 이다 제안 합니다.

골수종 세포의 무작위 인구에 존재하는 다양성을 식별하기 위해 우리는 모델 시스템으로 인간 골수종 세포주 킬로미터-18 을 선택했다. 우리는 가능한,단일 셀에만 따라 선택 기준 팩스에 의해 킬로미터-18 부모 인구에서 단일 세포를 정렬. 이 개별적으로 정렬 된 세포는 집단이 분석을 위해 수집 할 수있을만큼 충분히 커질 때까지 몇 주 동안 확장되었습니다(약 5 초 세포 대상). 이러한 단일 세포 클론 중 4 개를 분석을 위해 선택하였다. 우리는 전체 게놈 라이브러리를 준비하고 애질런트 슈어 셀렉트 키놈 캡처 키트를 사용하여 3.2 메가 바이트 영역을 캡처. 최종 캡처 라이브러리 200 배의 평균 대상 영역 깊이에 일루미나 미섹 플랫폼에서 시퀀싱 했다.

결과 다른 비교 한 하위 콘에 독점적으로 존재 하는 돌연변이의 수를 식별 하도록 필터링 했다. 이러한 이벤트는 원래 단일 셀에 존재하거나 단일 셀 클론의 확장 초기에 발생했습니다. 원래 단일 셀에 존재 하는 이벤트 분석을 제한 하거나 매우 일찍 두 배로 과정에서 우리>20%의 주파수에서 발견 된 변종을 확인 합니다. 이러한 이벤트의 대부분은 각 원래 셀의 클론 관계를 정의 할 수있는 여러 단일 셀 클론에 존재했지만 이러한 변형의 10%는 단일 서브 클론에 고유했습니다. 평균적으로 우리는 대상 영역의 메가 바이트 당 1.6 돌연변이를 관찰했다. 이 같은 돌연변이 속도가 전체 게놈에 걸쳐 사실이라면,우리는 대량 종양 샘플에서 채취 한 두 개의 무작위 세포 사이에 5000 개가 넘는 독특한 돌연변이를 볼 것으로 예상 할 것입니다.

서브콘 세대 간의 클론 다양성을 조사하기 위한 연구가 현재 진행 중이다. 다른 골수종 아형 사이의 클론 다양성의 변화를 살펴보기 위해 더 많은 연구가 진행 중이며,다음과 같은 더 공격적인 아형이 더 다양한 클론 개체군으로 이어질 수 있다는 가설이 있습니다. 더 다양한 클론 집단이 더 공격적인 종양 아형과 상관 관계가있는 경우,이것은 적절한 치료법에 대한 질문에 완전한 원을 반환하고,특정 치료법이 실제로 종양 집단에서 다양성을 증가시키고 질병의 더 공격적인 재발을 초래할 수 있다면.

관련 이해 상충을 선언 할 필요가 없습니다.