콜라겐 합성

골 콜라겐 합성의 조절

설치류 갈바리 및 세포 배양의 장기 배양에서 콜라겐 합성은 여러 가지 다른 분석을 사용하여 평가되었습니다. 가장 널리 사용되는 분석에서,칼바리 아와 세포는 배양이 끝나기 몇 시간 전에 방사성 표지 된 프롤린과 함께 배양됩니다. 콜라게나제-소화성 단백질(콜라게나제 라벨링)과 비콜라겐 단백질(콜라게나제 라벨링)에 방사성 표지 된 프롤린의 결합은 고도로 정제 된 박테리아 콜라게나 제를 사용하여 배양 물의 추출물에서 측정됩니다. 비콜라겐 단백질에 비해 콜라겐의 프롤린이 더 풍부하다는 것을 보정 한 후 콜라겐 합성 백분율을 계산했습니다. 콜라겐 생산은 또한 하이드 록시 프롤린이 콜라겐에 거의 고유하기 때문에 세포 또는 기관 배양의 하이드 록시 프롤린 함량을 측정하여 결정할 수 있습니다. 이러한 방법은 다른 유형의 원 섬유 콜라겐을 구별하지 않습니다. 그러나 뼈 장기 배양 및 대부분의 조골 세포 배양에 의해 합성 된 콜라겐은 주로 제 1 형(>95%)이므로 일반적으로 제 1 형 콜라겐 합성을 반영합니다. 원하는 경우,다른 콜라겐 유형의 생산은 세포 또는 장기 배양의 방사성 표지 추출물의 이온 교환 크로마토 그래피 및 폴리 아크릴 아미드 겔 전기 영동에 의해 구별 될 수있다. 인간 세포 배양에서의 제 1 형 콜라겐 발현은 또한 프로콜라겐 말단 프로펩타이드의 분비를 측정함으로써 평가되었다. 마지막으로,노던 블로 팅 및 역전사 효소-중 합 효소 연쇄 반응 분석 실험에서 대립 유전자 특정 프라이머에서 특정 시디 유전자 프로브 뼈 모델에서 콜라겐 미르나 발현을 평가 하기 위해 사용 되었습니다. 2015 년 12 월 25 일에 확인함.비 콜라겐 단백질 합성에 거의 또는 전혀 영향을 미치지 않는 21 일 태아 쥐 칼바리 아 및 신생아 마우스 칼바리 아의 장기 배양에서 콜라겐 합성을 억제한다. 콜라겐 합성의 최대 억제 1,25(오)2 차원 3 쥐 칼바리 아(약 50%)에서 발생 10 나노. 또한 콜라겐 합성을 억제하지만 1,25(오)2 차 3 보다 덜 강력합니다. 콜라겐 합성을 100 나노 미터 이하로 변경하지 마십시오. 비타민 대사 산물은 콜라겐 합성을 억제하고 태아 쥐의 긴 뼈의 재 흡수를 자극하여 골격에 대한 대사 산물의 친 화성과 관련이있는 유사한 상대적 효능을 나타냅니다. 세포 선택도를 결정하기 위해 1,25(오)2 차원 3 콜라겐 합성 억제,태아 쥐 칼바리 아의 장기 배양 1,25(오)22 시간 동안 2 차원 3 으로 처리 한 다음 배양의 최종 2 시간 동안 삼중 프롤린으로 배양 하였다. 중앙 뼈(성숙한 조골 세포)는 골막(덜 성숙한 골다공증 및 섬유 아세포)없이 해부되었고 두 구획은 삼중 프롤린의 혼합을 위해 별도로 분석되었습니다. 1,25(오)2 차원 3 은 골막이 아닌 중앙 뼈의 콜라겐 합성을 감소시켜 성숙한 조골 세포에 대한 1,25(오)2 차원 3 효과의 선택성을 나타냅니다. 생체 내 프로토콜을 사용하여 신생아 쥐가 새로 합성 된 뼈 매트릭스를 방사성 표지판으로 삼중 프롤린을 여러 번 주사 한 결과,1 일,3 일 및 5 일에 주어진 1,25 의 25 은 경골과 칼바리의자가 방사선 사진의 조직 형태 측정법에 의해 평가 된 뼈 매트릭스 합성을 억제했습니다.또한 쥐 골아세포 골육종에서 콜라겐 생성을 억제하고,1 차 쥐 및 쥐 골아세포 세포,그리고 불멸화된 쥐 골아세포 세포주를 억제한다. 1,25(오)2 차원 3 은 합류시보다 1 차 쥐 조골 세포의 로그 단계 성장 동안 제 1 형 콜라겐 합성에 더 큰 억제 효과를 갖는다. 콜라겐 합성의 억제는 다른 세포보다 더 높은 배양량을 갖는 희소 배양 물에서 더 크다. 1,25(오)콜라겐 합성의 2 차원 3 억제는 드문 드문 및 합류 쥐 1 차 조골 세포 세포에서 동일하지만,세포 성장 중에 비구조 세포 수는 변하지 않았다. 함께 찍은,이러한 데이터를 보여 1,25(오)2 차원 3 에 의해 콜라겐 합성의 억제 정도 크게 세포 수량에 의해 결정 됩니다. 래트 1 차 골아세포의 장기 배양의 증식 단계에서 콜라겐 미르나 수준을 억제하고 이러한 배양에 의한 광물 화 된 뼈 결절의 형성을 방지한다. 이러한 연구는 보여 1,25(오)2 차원 3 차 쥐 골아 세포 배양에서 광물 결절을 형성 하는 골다공증의 분화를 억제. 그러나,1,25 에 의한 결절 형성의 억제는 배양에서 제 1 형 콜라겐 합성의 억제에 이차적 일 수있다.상기 설명된 억제 효과와는 대조적으로,1,25(오)2 차원 3 은 일시적으로 콜라겐과 비콜라겐 단백질 합성(약 2 배)을 자극한다. 이 연구에서는,문화(총 단백질 종합에 관련된 교원질)에 의해 종합된 퍼센트 교원질은 보고되지 않았습니다; 그 결과,콜라겐 합성에 대한 1,25(오)2 차원 3 효과의 선택성을 결정할 수 없었다. 또한,인간 골아세포의 1 차 배양에서 콜라겐 발현이 증가한다. 콜라겐 합성의 증가는 인슐린 유사 성장 인자 결합 단백질(5)에 의해 차단된다. 그러나,다른 연구에서는,1,25(오)2 차원 3 은%의 콜라겐 합성을 감소시키는 것으로 나타났다. 세포 성장을 억제하고 두 세포주 모두에서 오스테오칼신 발현 및 알칼리성 포스파타제 활성을 증가시킨다. 대부분의 불후의 조골 세포주와 마찬가지로 세포는 상당한 표현형 변이를 나타냅니다. 따라서 이러한 불일치 결과 중 일부는 실험에 사용 된 세포의 변화로 인한 것일 수 있습니다. 골아세포 혈통의 초기 세포에서 분화 호르몬으로 작용할 수 있으며,이로 인해 제 1 형 콜라겐 발현이 증가한다. 성숙한 조골 세포에서 제 1 형 콜라겐 발현을 억제합니다.