콜로니 혼성화

콜로니 혼성화는 영양 한천 플레이트에 인구가 희박한 박테리아 콜로니를 배양하는 것으로 시작됩니다. 이 콜로니는 직접 접촉에 의해 니트로 셀룰로오스 필터에 대칭 적으로 복제 된 후 필터 막의 세포가 용해되고 유전자가 변성되어 필터에 결합 할 수 있습니다. 그 후,이들 유전자 클러스터는 원하는 방사능-라벨링된 아르자니나 또는 아르자니나 프로브(특별히 미리 선택됨)에 혼성화되고,자동 방사선 촬영법에 의해 스크리닝된다. 원하는 유전자를 전시 하는 유전자 클러스터 추가 성장 및 실험에 대 한 격리 될 수 있는 해당(살아있는)세균 식민지까지 일치 합니다.

콜로니 하이브리드 화의 정의:-콜로니 하이브리드 화는 박테리아 세포가 고체 영양 배지에서 흡수성 물질로 옮겨지는”얼룩 분석 기술”입니다. 콜로니 혼성화는 니트로셀룰로오스 멤브레인 필터에 의해 하이브리드 유전자를 포함하는 박테리아 세포로부터 특정 유전자 서열 또는 유전자를 분리하는 방법으로 정의할 수 있다. 이송 매체는 여러 가지 화학적 및 물리적 치료를 거칩니다.

콜로니 하이브리드의 전송 매체:-니트로 셀룰로오스 여과지는 마스터 플레이트의 복제본을 형성하는 콜로니 하이브리드의 전송 매체입니다. 니트로셀룰로오스는 주된 격판덮개의 그것에 유전자의 정확한 사본을 포함하는 막으로 작동합니다. 니트로 셀룰로오스 여과지는”블로 팅 패드”역할을합니다.

콜로니 혼성화는 다음 단계를 포함한다:

마스터 플레이트의 제조:-먼저 고체 한천 배지에 박테리아 세포 현탁액을 접종하여 마스터 플레이트를 준비합니다. 접종 후,박테리아 콜로니의 수는”마스터 또는 참조 플레이트”로 참조 다른 플라스미드와 함께 개발할 것입니다.

니트로 셀룰로오스 필터를 통한 복제물 형성:-그런 다음”니트로 셀룰로오스 필터”를 사용하여 박테리아 세포를 마스터 플레이트에서 멤브레인 또는 필터로 옮깁니다. 니트로 셀룰로오스 여과지를 마스터 플레이트 표면 위로 누릅니다. 이 필터 멤브레인의 압축은 박테리아 세포의 복제본 또는 사본을 마스터 플레이트의 복제본으로 형성합니다.

여과 매체 처리:-그 후 니트로 셀룰로오스 여과지를 세제와 같은 세제로 처리하여 박테리아 세포를 용해시킵니다.

알칼리 필터 매체의 처리:-단일 가닥으로 유전자를 분리하기 위해 수산화 나트륨과 같은 알칼리로 필터 매체를 처리하십시오.

:-니트로셀룰로오스 여과지에 고정을 위해 여과지를 섭씨 80 도에서 굽거나 자외선에 노출시킵니다.

방사성 프로브 추가:-방사성 프로브를 추가하여 플라스미드의 인쇄물을 포함하는 니트로 셀룰로오스 여과지를 혼성화한다. 이 방사성 프로브는 박테리아 세포에서 원하는 서열 유전자를 코딩합니다.

세척 및 자동 방사선 촬영:-여과지를 세척하여 결합되지 않은 프로브 입자를 제거하십시오. 그 후,이 방법으로 니트로 셀룰로오스 여과지를 엑스레이 필름에 노출 시키십시오. 자가 방사선 촬영 후에 나타날 식민지는 관심있는 유전자를 가지고있는”자가 방사선 촬영”으로 지칭됩니다.

원하는 유전자의 식별:-그런 다음 개발 된자가 방사선 사진을 마스터 플레이트와 비교하여 관심있는 유전자를 포함하는 콜로니를 식별합니다.

원하는 유전자를 포함하는 세포는 액체 배지에서 자랄 수 있으며 재조합 플라스미드의 분리를 위해 추가로 처리 할 수 있습니다.

결론:-따라서 우리는 콜로니 하이브리드 화 방법이 방사성 프로브를 사용하는”스크리닝 기술”이라고 결론 지을 수 있습니다. 방사능으로 레테르를 붙인 조사는 세균성 식민지의 수에서 그 때 특정한 유전자를 가리거나 고립시킵니다.