Colony PCR

Colony PCR er en praktisk høy gjennomstrømningsmetode for å bestemme tilstedeværelse eller fravær AV innsats DNA i plasmid konstruksjoner. Individuelle transformatorer kan enten lyses i vann med et kort oppvarmingstrinn eller tilsettes DIREKTE TIL PCR-reaksjonen og lyseres under det første oppvarmingstrinnet. Dette innledende oppvarmingstrinnet forårsaker frigjøring av plasmid-DNA fra cellen, slik at det kan tjene som mal for forsterkningsreaksjonen. Primere designet for å spesifikt målrette innsatsen DNA kan brukes til å avgjøre om konstruksjonen inneholder DNA fragment av interesse. Alternativt kan primere rettet mot vektor DNA flankerer innsatsen brukes til å bestemme hvorvidt innsatsen er riktig molekylær størrelse. Sett inn spesifikke primere kan gi informasjon om både spesifisitet OG størrelse på innsatsen DNA mens bruk av vektorspesifikke primere tillater screening av flere konstruksjoner samtidig. Colony PCR kan også brukes til å bestemme innsatsorientering. PCR-forsterkning av plasmidet ved hjelp av en innsatsspesifikk primer parret med en vektorspesifikk primer kan utformes for å produsere et ampliikon av en bestemt størrelse bare hvis innsatsen er i riktig retning. I alle eksperimentelle design, tilstedeværelse eller fravær AV EN PCR amplicon og størrelsen på produktet bestemmes av elektroforese sammen MED EN DNA størrelse markør på en agarose gel.