Genetisk Analyse Av Et Poliovirus/Hepatitt C-Virus (HCV) Chimera: Interaksjon Mellom Poliovirus Kloverblad og En Sekvens I HCV 5′ Ikke-Oversatt Region Resulterer I En Replikasjonsfenotype
ABSTRAKT
INTERNE RIBOSOMALE Inngangssteder (iress) Kan Fungere I Fremmede Virale genomer Eller i kunstige DICISTRONISKE mrnaer. Vi beskriver en interaksjon mellom villtype hepatitt c-virus (HCV)-spesifikk sekvens og poliovirus (PV) 5 ‘ – terminal kloverblad i ET pv/HCV kimært virus (som inneholder HCV IRES), noe som resulterer i en replikasjonsfenotype. Enten en punktmutasjon ved nukleotid (nt) 29 eller en delesjon opp til nt 40 i HCV 5’ ikke-oversatt region lettet replikasjonsblokken, noe SOM ga PV / HCV-varianter som replikerte til høye titere. Tilfeldige, men lammende interaksjoner mellom EN IRES og omkringliggende heterolog RNA må vurderes når IRES-baserte dicistronic uttrykk vektorer blir konstruert.
alle picornavirus-genomene inneholder et genetisk element kalt internal ribosomal entry site (IRES) som tillater oversettelse av virale genomiske mrnaer på en 5 ‘ -og cap-uavhengig måte (5, 12, 13, 16, 20, 25). Lignende genetiske elementer har også blitt oppdaget i genomer Av Hepatitt c-virus (HCV) (24), Et Hepacivirus og Bovint virus diarrhea virus (21), Et Pestivirus, av familien theFlaviviridae. IRESs er lokalisert i det 5 ‘ – terminale segmentet av genomene, hvor de kontrollerer initiering av polyproteinsyntese. Visse insekt-RNA-virus, f. eks. Plautia staliintestine-virus, er imidlertid eksepsjonelle ved at deres beslektede IRES kartlegger flere tusen nukleotider nedstrøms for 5 ‘ – enden av genomet, og separerer to cistroner som koder for to forskjellige polyproteiner (23). Det er av interesse at vi tidligere har utviklet et dicistronisk poliovirus (PV) ved å sette IRES av encefalomyokardittvirus inn i KODINGSOMRÅDET TIL pv polyprotein (16). Den genetiske organisasjonen av denne dicistroniske PV, som koder for to polyproteiner adskilt av ET IRES-element, ligner på P. stali tarmvirus.
IRES-elementer er definert av funksjon og ikke av nukleotidsekvens. Faktisk, IRESs AV PV, en picornavirus, OG HCV, en flavivirus, har liten eller ingen sekvens til felles, men begge fungerer som arrangører av intern ribosomal oppføring for initiering av oversettelse. Dette fenomenet er mest tydelig i kimære PV / HCV-virus der det beslektede PV IRES har blitt utvekslet MED HCV (15, 28). Uventet INNEHOLDER HCV IRES en sekvens nedstrøms AV AUG-kodonet som initierer sitt polyprotein (15, 22). Ved konstruksjon av et levedyktig pv/HCV kimært virus var en del av kjerneproteinkodingssekvensen nødvendig for å oppnå et levedyktig virus (Fig.1, Δ) (15). ③core-sekvensen fører til dannelsen av Et Hryvcore/pv fusion polyprotein som må behandles gjennom spaltning av pv viral proteinase 2Apro ved Δ*1a veikryss (Fig . 1) (28). Det er imidlertid ikke nødvendig å produsere kjernesekvenskodede peptider som følge av oversettelse av ③core-sekvensen for HCV-IRENES funksjon I P / H710-d17* (28). (I tidligere studier ble P/H710-d17 betegnet P / H701-2A fordi det kimære genomet inneholdt DEN HCV-spesifikke sekvensen fra nukleotider 18 til 710 AV HCV-genomet . Nummereringen AV HCV 5 ‘nontranslated region i dette papiret er i samsvar med nummereringen AV HCV 5’ NTR i FULL LENGDE .)
