Klastogen aktivitet av 2-chlorodeoxyadenosin i pattedyr somatiske celler

MUTAGENESE
FORSKNINGSARTIKKEL

Klastogen aktivitet av 2-chlorodeoxyadenosin i pattedyr somatiske celler

Gilmara Ausech AntonucciI; Catherine He TakahashiI; II

Iuniversitetet Av S ④o Paulo, Fakulteter Av Medicina De Ribeir@o Preto, Departamento De Gené, Ribeirã Preto, SP, Brasil.
Iiuniversidade Av Sã Paulo, Fakultet For Filosofi, Vitenskap og Bokstaver Av Ribeirã Preto, Institutt For Biologi, Ribeirã Preto, SP, Brasil.

Korrespondanse

SAMMENDRAG

av basen analog 2-chlorodeoxyadenosin (2-CdA) som brukes til terapi ved kronisk resistente og avanserte lymfoproliferative lidelser, er cytotoksisk for både delende og ikke-delende lymfocytter. Det foreliggende arbeidet evaluerte det klastogene potensialet av dette legemidlet in vitro i humane lymfocytter i kultur og in vivo i BALB / c mus benmargceller. I humane lymfocytter ble den klastogene effekten av 2-CdA studert I g1 -, S-og G2-faser av cellesyklusen ved bruk av tre forskjellige konsentrasjoner (10, 20 og 40 mg/mL). Endepunktene som ble analysert inkluderte mitotisk indeks (MI), proliferasjonsindeks (PI), søsterkromatidutveksling (SCE) og kromosomavvik (CA). Statistisk analyse ved en varians (ANOVA) test viste en signifikant økning (p < 0.05) I CA-frekvenser for celler behandlet i s-fasen, men MI varierte ikke. Konsentrasjonene som ble testet, ga ikke en signifikant økning i Gjennomsnittlig frekvens Av SCEs, og de endret heller ikke celle PI I g1-og s-fasene. Konsentrasjonene som ble testet in vivo var 0,25, 0,375 og 0,5 mg / kg kroppsvekt. I denne analysen ble det ikke observert endringer I CA-frekvenser og MI ved dosenivåene som ble testet. Resultatene indikerer derfor en klastogen effekt av 2-CdA i humane lymfocyttkulturer.

Nøkkelord: humane lymfocytter, 2-CdA, kromosomavvik, SCE, cellesyklus.

Innledning

Purinanaloger er svært aktive i behandlingen av lymfoproliferative sykdommer(Pott-Hoeck og Hiddemann, 1995). Kladribin, 2-klorodeoksyadenosin (2-CdA), er en nukleosidanalog med et halogenatom erstattet i posisjon 2 i purinringen, som gir resistens mot deaminering av adenosindeaminase (ADA). 2-CdA er et stoff av valget i behandling av hårete celle leukemi, men det er også svært effektiv i andre lavgradige lymfoide maligniteter, inkludert kronisk lymfatisk leukemi (CLL). Rapportene i litteraturen har vist at 2-CdA gir tilsvarende komplett respons (cr) rate og total respons (OR) rate til fludarabin, men påvirkning av begge midler på overlevelsesraten for pasienter MED KLL er fortsatt usikker. CR-frekvensen indusert av 2-CdA er signifikant høyere enn hos pasienter behandlet med konvensjonell kjemoterapi (Robak, 2001). 2-CdA er en annen ny kjemoterapeutisk purinanalog, med spesifikk toksisitet for lymfocytter (Schrimer et al., 1997). Cytotoksisiteten forekommer i prolifererende og hvilende celler, noe som resulterer i hendelser som inhibering AV DNA og proteinsyntese, samt induksjon av apoptose (Robertsson et al., 1993). Til tross for toksisitet, gode resultater i terapeutisk respons er oppnådd, og dette stoffet er det viktigste alternativet i tricoleukemia behandling der pasienter viser hårete celle leukemi (HCL) (Tallman et al., 1992; Tallman et al., 1993).

Adenindeoksynukleosider induserer apoptose i hvilende lymfocytter og er nyttige stoffer for behandling av indolente lymfoproliferative sykdommer. Flere mekanismer har blitt foreslått for å forklare toksisiteten av deoksyadenosin og dets analoger i hvilende celler, inkludert direkte binding av dATP til Den pro-apoptotiske faktoren Apaf-1 og aktivering av caspase-9 og -3 veier (Genini et al., 2000).

en pasient med akutt myelogen leukemi behandlet med 2-CdA og Ara-C presenterte forsinket benmargsgjenoppretting, sinusitt og Candida tropicalis sepsis. Hun utviklet multisystem organsvikt og døde 1 måned etter oppstart AV aml-behandling. Post mortem undersøkelse, begrenset til brystet og magen, avslørte spredt candidiasis som involverer lungene, hjertet, leveren, nyrene og milten (Mathew et al., 2000).

Zwaan et al. (2002) observert at pasienter med t(9: 11) syntes å være signifikant mer følsomme enn ANDRE aml-pasienter for følgende legemidler: cytarabin (median: 2,9 ganger), doksorubicin (4,5 ganger), mitoksantron (8,0 ganger), 2-klorodeoksyadenosin (10,0 ganger).

Nukleosidanaloger (NA) som cytosin arabinosid, fludarabin, kladribin og gemcitabin er essensielle komponenter I aml (Akutt Myeloid Leukemi) induksjonsterapi; de er også effektive for å behandle lymfoproliferative sykdommer og har blitt brukt til behandling av noen faste svulster. Disse viktige forbindelsene deler noen felles egenskaper, nemlig når det gjelder å kreve transport av spesifikke membrantransportører, og metabolisme og interaksjon med intracellulære mål. Men de skiller seg med hensyn til typer transportører, og deres fortrinnsrett interaksjon med visse mål som kan forklare effektiviteten mot raske prolifererende svulster (Galmarini et al., 2001).

Med tanke på denne informasjonen Er det viktig å vurdere det klastogene potensialet for 2-CdA, på grunnlag av rapporter om at dette stoffet induserer cytotoksisitet (Tallman et al., 1992; Tallman et al., 1993) OG DNA single-strand pauser (Liliemark Og Juliusson, 1994). Formålet med denne studien var å evaluere kapasiteten til dette kjemoterapeutiske midlet ved å indusere kromosomskade i humane lymfocytter og benmargsceller FRA BALB / c-mus.

Materialer Og Metoder

Kjemisk middel

antitumoral 2-chlorodeoxyadenosin ble vennlig levert av Kjemoterapisenteret På Hospital De Clí Av Ribeirã Preto School Of Medicine (Faculdade De Medicina De Ribeirã Preto-USP) for in vitro og in vivo eksperimenter.

Humane perifere blodlymfocytter

Blodprøver ble tatt fra seks røykfrie friske frivillige (tre kvinner og tre menn) i alderen 25 til 35 år og ble behandlet under g1 -, S-og G2-fasene i cellesyklusen, for analyse av kromosomavvik (CA) og mitotisk indeks (MI). I tillegg ble lymfocytter fra tre individer (to kvinner og to menn) brukt til søsterkromatidutveksling (SCE) og proliferasjonsindeks (PI) analyse. Lymfocytter ble dyrket i 78% rpmi-1640 medium (Sigma Chemical Co., St. Louis, USA) supplert med 20% føtalt kalveserum (Cultilab, Brasil) og tilsatt penicillin (5 mg / mL) og streptomycin (10 mg/mL). Celler ble stimulert med 2% phytohemagglutinin (Life Technologies, Grand Island, NY). For hver 5 mL kulturmedium ble 1 mL plasma tilsatt, og kulturen ble inkubert ved 37 °C i 52 timer for CA-analyse. 2-CdA-oppløsninger ble fortynnet i deionisert vann ved følgende konsentrasjoner: 10, 20 og 40 mg/mL kulturmedium, Ifølge Preston et al. (1987). En negativ kontroll ble inkludert i alle eksperimenter. Slide forberedelse og farging ble utført ved standard teknikker (Moorhead et al., 1960). Lysbilder for analyse av søster kromatid utveksling (SCE) og spredning indeks (PI)ble oppnådd fra parallelle kulturer som 5-Bromo-2′-deoksyuridin (Sigma Chemical Co., St. Louis, USA; 10 mg / mL) ble tilsatt i tillegg til 2-CdA. Differensiell søsterkromatid-farging ble oppnådd ved fluorescens pluss Giemsa-teknikken ved Bruk Av Hoechst 33258 (Calbiochem-Behring Corp.; 0,05 mg / mL Hanks løsning) og 5% Giemsa (Merck). Denne metoden er en modifikasjon av De som Ble utgitt Av Korenberg And Freedlender (1974) og Perry and Wolff (1974). Lysbilder ble utsatt for hvitt lys over natten. Metafasepreparater med 46 ± 1 kromosomer ble analysert i en blindprøve. Kromosomene ble tegnet skjematisk for SCE-scoring, så vel som FOR CA-analyse.

behandlingsprotokoller

2-CdA behandling av lymfocyttkulturer i ulike faser av cellesyklusen

Kromosomavvik (CAs)

etter syv timer med oppstart av kultur (g1-fase) ble lymfocyttkulturene behandlet med 2-CdA i 1 time ved 37 °C i kulturmedium uten serum. Cellene ble løst 52 h etter initiering av kultur. Etter behandling med 2-CdA ble cellene vasket to ganger i serumfritt medium og reinkubert i komplett medium. For behandling I s-fase ble 24 h-kulturer behandlet med 2-CdA i 6 timer. Cellene ble vasket to ganger i serumfritt medium, reinkubert i komplett medium og festet etter 52 h inkubasjon. For G2fasebehandling ble 69 h-kulturer behandlet med 2-CdA for 3 h, og cellene ble løst etter 72 h inkubasjon. Kolchicin (Merck 0.016%) ble tilsatt 1.5 h før fiksering. FOR å bestemme MI ble 1000 celler scoret per kultur, og 100 metafaser fra hver kultur ble analysert for CA, henholdsvis 6000 celler og 600 metafaser for hver behandling.

søsterkromatidbytter (SCEs)

Lymfocyttkulturer fra 4 friske donorer (to kvinner og to menn) ble behandlet med 5-BrdU (10 µ / mL) i begynnelsen av inkubasjonen, og da cellene nådde g1-fasen (7 timer etter oppstart av kultur), ble 2-CdA pluss 5-BrdU tilsatt i 1 time ved 37 °C i kulturmedium uten serum. Etter behandling ble cellene vasket to ganger i serumfritt medium, 5-BrdU ble tilsatt igjen og deretter ble cellene reinkubert i komplett medium. For behandling i s-fasen ble 24 h-kulturer behandlet med 2-CdA pluss 5-BrdU i serumfritt medium i 6 h. etter behandlingen ble cellene vasket to ganger i serumfritt medium og reinkubert i komplett medium med 5-BrdU. For SCE-og PI-analyse ble cellene (G1-og s-faser) løst 72 h etter initiering av kultur. Femti andre divisjon metafaser per kultur ble scoret FOR SCE, og hundre metafaser fra hver kultur ble scoret for første, andre og tredje celledeling, totalt 200 metafaser og 400 celler per behandling, henholdsvis. PI ble oppnådd ved hjelp av følgende ligning:

PI =

Hvor M1 og m3 er tallene for henholdsvis første og tredje divisjon metafaser (Degrassi et al., 1989).

Dyr

dyrene som ble brukt var BALB / c-mus (Mus musculus), hentet fra Dyrehuset Til Medisinskolen I Ribeirã Preto.

in vivo-test På Balb/c-mus benmargceller

Mus som veide omtrent 30 g (5-6 uker) ble delt inn i grupper på 8 dyr (4 menn og 4 kvinner) og behandlet med intraperitoneal injeksjon med 0.5 mL / sluttvolum 2-CdA oppløsning fortynnet med destillert vann i følgende konsentrasjoner: 0,25, 0,375 og 0,5 mg / kg kroppsvekt. Tjuefire timer etter behandling (dvs. to timer før ofre) ble musene injisert med 0,3 mL / sluttvolum av en 1% kolkisinoppløsning (Sigma) og drept ved eterinhalasjon 2 timer senere. Den negative kontrollgruppen fikk destillert vann 0,5 mL / sluttvolum / dyr, og den positive kontrollgruppen fikk cyklofosfamid (CP), 25 mg/kg kroppsvekt. Benmargpreparater for metafaseceller ble oppnådd ved standardteknikken (Ford Og Hamerton, 1956). Lysbilder ble analysert i en blind test og 100 metafaser per dyr ble tegnet skjematisk. MI ble oppnådd ved å telle antall mitotiske celler i 1000 celler analysert per dyr, og 100 celler ble scoret FOR CA.

Statistisk analyse

Enveisanalyse av varians (ANOVA) ble utført på antall unormale metafaser og totalt antall CA, MI, SCEs og PI, med beregninger Av p-verdiene for hver fase av cellesyklusen. Når p < 0.05 ble funnet, middelverdiene for hver behandling ble sammenlignet Med Student-Newman Keuls-testen. Den statistiske analysen ble utført Ved Hjelp Av Sigma Stat (Jandel Corporation) programvarepakker.

Resultater

Humane lymfocytter

Perifere blodlymfocytter ble behandlet med forskjellige konsentrasjoner (10, 20 og 40 mg/mL) av 2-CdA i g1 -, S-og G2-fasene i cellesyklusen. Kromosomavvik (CA) og mitotisk indeks (MI) ble analysert i behandlede lymfocytter fra seks friske individer (tre kvinner og tre menn) (Tabell 1). For cellene som ble behandlet i s-fasen, ble det observert en signifikant økning I CA-frekvenser (p < 0,05) ved alle konsentrasjoner, sammenlignet med kontrollfrekvensene. De vanligste typene kromosomavvik observert var kromatid-og isokromatid-hull (data ikke vist) og brudd, etterfulgt av doble minutter, doble fragmenter og enkeltfragmenter. FOR celler behandlet I G1-og G2-fasene viste CA-frekvensene ingen statistisk signifikant forskjell mellom de behandlede kulturer og kontrollverdiene. SELV om DET var en liten variasjon FOR MI, ble det ikke observert en statistisk signifikant forskjell (p < 0,05) i noen av behandlingene i forhold til kontrollindeksene.

gjennomsnittlig frekvens av søsterkromatidutveksling (SCE) og proliferasjonsindeks (PI) ble bestemt i fire kontroller og i lymfocyttkulturer behandlet med 2-CdA i g1-og S-fasene i kulturer høstet etter 72 timer (Tabell 2). Konsentrasjonene som ble testet (10, 20 og 40 mg / mL) forårsaket ingen signifikant økning i Gjennomsnittlig Frekvens Av Sce, og de endret heller ikke CELLE PI i g1-og s-fasene (Tabell 2).

Balb / c benmargssystem

CA-og MI-frekvenser ble analysert i benmargsceller fra 8 Balb/c-mus (4 hunner og 4 hanner) etter intraperitoneal behandling med 0,25, 0,37 og 0,50 mg/kg kroppsvekt av 2-CdA (Tabell 3). I in vivo-analysen viste 2-CdA ikke cytotoksiske effekter for noen av de testede dosene angående CA-frekvenser så vel som MI-verdier, når alle behandlingsgrupper ble sammenlignet. De fleste aberrasjoner var kromatid-type pauser. Ingen signifikant forskjell (p < 0,05) ble funnet verken blant dyrene eller mellom hanner og hunner for de analyserte parametrene.

Diskusjon

i løpet av de siste årene har flere studier vist den antiproliferative effekten av legemidlene som brukes til behandling av lymfoide maligniteter. 2-CdA er en base analog ansatt i kjemoterapi for en bestemt type leukemi, hårete celle leukemi. Det er også noen data som viser at 2-CdA kan brukes i kombinasjon med andre legemidler, ved behandling av ildfast og tilbakevendende lavgradig non-Hodgkins lymfom (NHL) (Laurencet et al., 1999; Robak et al., 1999). I det foreliggende arbeidet ble det utført en cytogenetisk studie in vitro for å evaluere det klastogene potensialet for 2-CdA i humane lymfocytter angående induksjon AV CA og SCE. Ifølge Moore og Bender (1993) kan strukturell CAs føre til tap av kromosomalt materiale. DEN type CA dannet avhenger av arten av lesjonen indusert I DNA og cellesyklusfasen der cellene ble utsatt (Natarajan et al., 1996).

Lymfocyttkulturer ble behandlet med tre konsentrasjoner av 2-CdA (10, 20 og 40 mg/mL) i ulike faser av cellesyklusen. Den klastogene effekten av stoffet ble demonstrert ved den signifikante økningen (p < 0,05) I CA-frekvensene for alle konsentrasjonene testet under s-fasen av cellesyklusen. For behandling i denne fasen ble 2-CdA igjen i 6 timer i kulturer. For midler som virker i en bestemt fase av cellesyklusen, kan administrasjonssekvensen bestemme effekten og toksisiteten til en kombinasjonsterapi (Smorenburg et al., 2001).

disse resultatene er konsistente med de som er rapportert av andre forfattere (Carson et al., 1983), noe som tyder på at 2-CdA er innlemmet I DNA-produserende enkeltstrengbrudd (SSBs). Ssb kan oppstå både direkte, fra oppløsning av skadede sukkerarter, eller indirekte, via enzymatisk spaltning av fosfodiester-ryggraden. Direkte Ssb oppstår hovedsakelig fra et angrep av frie radikaler som reaktive oksygenarter, mens indirekte Ssb er hovedsakelig normale mellomprodukter AV DNA base excision repair (BER). Ssb er også de vanligste lesjonene indusert av eksogene gentoksiner som ioniserende stråling, alkyleringsmidler og topo1-giftkamptotecin og dets anticancerderivater (Caldecott, 2004).

noen rapporter viser at basen analog trenger en lengre periode for fosforylering å skje (Gandhi et al., 1997). Denne mekanismen kan forklare den økte frekvensen av totale kromosomavvik under s-fasen av cellesyklusen. Den samme mekanismen forekommer i celler behandlet med mitomycin C, En s-avhengig forbindelse, som krever DNA-replikasjon for å konvertere DNA-skader til kromosomale avvik (Evans Og Scott, 1964; Traganos et al., 1980). Andre antitumorale midler representerer samme mekanisme og virkning av 2-CdA, som fludarabin og 1-b-d-arabinosylcitosin (ara-C).

Cytotoksiske nukleosidanaloger har bred klinisk bruk. De var blant de første kjemoterapeutiske midlene som ble brukt til behandling av ondartede sykdommer. Anticancernukleosidene inkluderer analoger av fysiologisk pyrimidin og purinnukleosider. Disse midlene virker som antimetabolitter, konkurrerer med naturlige nukleosider under DNA-eller RNA-syntese og som hemmere av nøkkelcellenzymer (Szafraniec et al., 2004), Er s-spesifikke, og må fosforyleres for å aktivere trifosfater (Plunkett et al., 1980). Under s-fasen av cellesyklusen, når det genetiske materialet dupliseres AV DNA-replikeringsmaskineriet, er celler spesielt utsatt for gentoksisk fornærmelse. Mens G1-og G2/M-kontrollpunkter arresterer cellesyklusprogresjon ved veldefinerte punkter gjennom inhibering av syklinavhengige kinaser, er intra-s-fase-kontrollpunkter kjent for å forekomme når som helst i s-fasen og involvere flere signalveier (Sidorova og Breeden, 2003; Andreassen et al., 2003)

det er svært viktig å analysere mekanismen for legemiddelrespons i ulike faser av cellesyklusen. Det høye nivået av kromosomal lesjon kan skyldes cytotoksisiteten til 2-CdA forårsaket av omdannelsen til 2-CdATP, som induserer inhibering AV DNA-syntese og DNA-reparasjon, som involverer enzymene ribonukleotidreduktase og DNA-polymeraser. Denne forbindelsen viser motstand mot adenosindeaminase (ADA) aktivitet, som er gitt av et kloratom og erstatning av hydrogen i posisjon 2 av purinringen adenosin(Baltz Og Montello, 1993).

Sce anses ofte som en parameter for å vurdere gentoksisitet, fordi frekvensen tydelig økes ved eksponering for mange mutagene og kreftfremkallende kjemikalier. I det foreliggende eksperimentet presenterte frekvensene Av SCEs i kulturer behandlet med 2-CdA en liten økning i forhold til kontrollkulturer. Økningen observert i begge faser varierte ikke signifikant.

siden mange legemidler aktiveres etter at de metaboliseres, anbefales in vivo mutagenisitetstester for å vurdere den klastogene aktiviteten til de forbindelsene som krever metabolsk aktivering. En slik tilnærming gir også lignende forhold til de som finnes hos mennesker (Legator And Ward Jr., 1991). Selv om det er forskjeller mellom gnagere og mennesker, anbefales det at enhver vurdering baseres på både in vitro-og in vivo-studier, og ikke bare på noen av dem (Huggett et al., 1996).

i den foreliggende studien ble den klastogene effekten av 2-CdA også analysert I balb / c mus benmargsceller ved konsentrasjoner på 0,25, 0,375 og 0,5 mg/kg kroppsvekt. Resultatene viste at 2-CdA ikke var effektiv for å indusere kromosomavvik. Mangelen på effekt in vivo kan skyldes den begrensede mengden 2-CdA tilgjengelig, fordi den ble donert i fortynnede forhold. Gentoksiske effekter av base analog gemcitabin er rapportert i benmargsceller fra mus ved bruk av mikronukleus-og kromosomaberrasjonstestsystemer. Aydemir Og Bilaloglu (2003) viste at gemcitabin ikke induserte noen signifikant CAs og heller ikke forårsaket reduksjon I MI ved en 6-timers behandlingsperiode ved doser på 2,0, 4,0 og 8,0 mg / kg kroppsvekt, sammenlignet med den negative kontrollen. ; frekvensen av total CAs økte derimot signifikant av gemcitabin (p < 0,0001) med en 24-timers behandlingsperiode med de samme dosene.

avslutningsvis viste 2-CdA en klastogen effekt i humane lymfocyttkulturer behandlet in vitro i S-fasen av cellesyklusen, men ikke signifikant klastogen effekt ble observert i celler behandlet I G1-og G2-fasene. I in vivo-analysen hos mus viste 2-CdA ingen klastogen effekt ved dosenivåene som ble testet.

Takk

Vi er takknemlige For Prof. Dr. A. T. Natarajan, Dr. Elza T. Sakamoto Hojo og Dr. Lusania G. Antunes for verdifulle kommentarer til manuskriptet og Til Mr. Luiz Augusto Da Costa Jr., Mr. Silvio a. dos Santos og Ms. Sueli A. Neves for verdifull teknisk assistanse. CAPES og FAPESP prosess n. 99/10643-7 støttet denne forskningen. Forskningsetisk Utvalg godkjente prosjektet (Prosess: CONEP n. 25000.074430 / 2001-88).

Andreassen PR, Lohez OD og Margolis RL (2003) G2 og spindel montering sjekkpunkt tilpasning, og tetraploidy arrest: Implikasjoner for iboende og kjemisk indusert genomisk ustabilitet. Mutat Res 532:245-53.

Aydemir N Og Bilaloglu R (2003) Gentoksisitet av To legemidler mot kreft, gemcitabin og topotekan, i benmargen hos mus in vivo. Mutat Res 537: 43-51.

Baltz JK Og Montello MJ (1993) Kladribin til behandling av hematologiske maligniteter. Klinisk Apotek 12: 805-813.

Caldecott KW (2004) DNA enkelttrådsbrudd og nevrodegenerasjon. DNA-Reparasjon (Amst) 3: 875-82.

Carson DA, Wasson DB, Taetle R Og Yu A (1983) Spesifikk toksisitet av 2-chlorodeoxyadenosin mot hvile og prolifererende humane lymfocytter. Blod 62:737-743.

Degrassi F, De Salvia R, Tanzarella C Og Palitti F (1989) Induksjon av kromosomavvik og SCE av camptothecin, en hemmer av pattedyrstopoisomerase I. Mutat Res 211:125-130.

Evans HJ Og Scott D (1964) Påvirkning AV DNA-syntese på produksjon av kromatidaberrasjoner Ved Røntgenstråler og maleichydrazid I Vicia faba Genetics 49:17-38.

Ford CE Og Hamerton JL (1956) en colchicine hypoton citrate squash sekvens for pattedyr kromosomer. Teknologi 3: 247-251.

Galmarini CM, Mackey JR Og Dumontet C (2001) Nukleosidanaloger: Mekanismer for narkotikaresistens og reverseringsstrategier. Leukemi 15: 875-890.

Gandhi V, Huang P, Chapman AJ, Chen F Og Plunkett W (1997) Inkorporering av fludarabin og 1-beta-d-arabinofuranosylcytosin 5 ‘ trifosfater VED DNA-polymerase alfa: Affinitet, interaksjon og konsekvenser. Clin Kreft Res 3: 1347-1355.

genini D, Adachi S, Chao Q, Rose DW, Carrera CJ, Cottam HB, Carson DA Og Leoni LM (2000) deoksyadenosinanaloger induserer programmert celledød i kroniske lymfocytiske leukemi celler ved å skade DNA og ved direkte å påvirke mitokondriene. Blod 96:3537-3543.

Huggett AC, Schilter B, Roberfroid M, Antignac E og Koeman JH (1996) Komparative metoder for toksisitetstesting. Mat Chem Toxicol 34: 183-92.

Korenberg JR Og Freedlender EF (1974) Giemsa teknikk for påvisning av søsterkromatid utveksling. Kromosom 48:355-360.

Laurencet FM, ZULIAN GB, Guetty-Alberto M, Iten PA, Betticher DC og Alberto P (1999) Kladribin med cyklofosfamid og prednison i behandling av lavgradige lymfoproliferative maligniteter. Br J Haematol 79:1215-1219.

Legator MS Og Ward Jr JB (1991) Bruk av in vivo genetiske toksisitetsdata for risikovurdering. Endret 250:457-465.

Liliemark J Og Juliusson G (1994) 2-Klor-2′-deoksyadenosin-kliniske, biokjemiske og farmakokinetiske hensyn. Arch Immunol Ther Exp (Warszawa) 42: 7-10.

Mathew S, Lorsbach RB, Shearer P, Sandlund JT OG Raimondi SC (2000) Doble minuttkromosomer og c-MYC-forsterkning hos barn med sekundær myelodysplastisk syndrom etter behandling for akutt lymfoblastisk leukemi. Leukemi 14:1314-5.

Moore RC og Bender MA (1993) tidssekvens av hendelser som fører til dannelse av kromosomavvik. Miljø Mol Mutagen 22:208-213.

Moorhead PS, NOWELL PC, Mellman WJ, Battipps DM og Hungerford DA (1960) Kromosompreparasjon av leukocytter dyrket fra perifert blod. Exp Celle Res 20: 613-616.

Natarajan AT, Balajee AS, Boei JJ, Darroudi F, Dominguez I, Hande MP, Meijers M, Slijepcevic P, Vermeulen S og Xiao Y (1996) Mekanismer for induksjon av kromosomavvik og deres deteksjon ved in situ hybridisering. Mutat Res 372:247-58.

Perry PE og Wolff S (1974) Ny Giemsa-metode for differensialfarging av søsterkromatider. Natur 251: 156-158.

Plunkett W, Chubb S, Alexander l OG Montgomery JA (1980) Sammenligning av toksisitet og metabolisme av 9-B-d-arabinofuranosyl-2-fluoroadenin og 9-b-d-arabinofuranosyladenin i humane lymfoblastoide celler. Kreft Res 40: 2349-55.

Pott-Hoeck C Og Hiddemann W (1995) Purinanaloger ved behandling av lavgradige lymfomer og kronisk lymfatisk leukemi. Ann Oncol 6:421-433.

Preston RJ, Dean BJ, Galloway S, Holden H, McFee AF OG Shelby M (1987) Pattedyr in vivo cytogenetiske analyser. Analyse av kromosomavvik i benmargsceller. 189, 157-65.

Robak T (2001) Kladribin i behandlingen av kronisk lymfocytisk leukemi. Leuk Lymfom 40:551-564.

Robak T, Gó-Tybor J, Urbanska H Og Krikowski E (1999) Kombinasjonsregime av 2-klorodeoksyadenosin (kladribin), mitoksantron og deksametason (CMD) ved behandling av refraktær og tilbakevendende lavgradig non-Hodgkin lymfom. Leuk Lympho 32: 359-363.

Robertsson LE, Chubb S, Meyn RE, Historie M, Ford R, Hitelman WN OG Plunkett W (1993) Induksjon av apoptose celledød i kronisk lymfatisk leukemi av 2-klor-2′-deoksyadenosin og 9-b-d-arabinosyl-2-fluoradenin. Blod 81:143-150.

Schrimer M, Mur E, Pfeiffer KP, Thaler J Og Konwalinka G (1997) sikkerhetsprofilen til lavdose kladribin ved refraktær revmatoid artritt. En pilotforsøk. Scand J Rhematol 26:376-379.

Sidorova JM og Breeden LL (2003) Veslevoksne g1 / S overganger og genomisk ustabilitet: opprinnelse tilkobling. Mutat Res 532: 5-19.

Smorenburg CH, Sparreboom A, Bontenbal M Og Verweij J (2001) Kombinasjon kjemoterapi av taxaner og antimetabolitter: dens bruk og begrensninger. Eur J Kreft 37: 2310-23.

Szafraniec SI, STACHNIK KJ Og Skierski JS (2004) Nye nukleosidanaloger ved behandling av hematologiske lidelser. Acta Pol Pharm 61:223-32.

Tallman MS, Hakimian D, Hogan D Og Petersen L (1993) 2-Chlorodeoxyadenosine i behandling av hårete celle leukemi (HCL): Påvisning av minimal rest sykdom (MRD) ved immunostaining (IS). Presentert på 8. Symposium Om Molekylærbiologi Av Hematopoiesis I Basel, juli 9-13.

Tallman MS, Hakimian D, Variakojis D, Koslow D, Sisney GA, Rademaker AW, Rose E Og Kaul K (1992) en enkelt syklus av 2-chlorodeoxyadenosine resulterer i fullstendig remisjon i de fleste pasienter med hårete celle leukemi. Blod 80:2203-2209.

Traganos F, Staiano-Coico L, Darzynkiewicz Z Og Melamed MR (1980) Effekter av ellipticin på celleoverlevelse og cellesyklusprogresjon i dyrkede pattedyrceller. Kreft Res 40: 2390-2399.

Zwaan MC, Kaspers GJL. Pieters R, Hä K, Huismans DR, Zimmermann M, Harbott J, Slater RM, Creutzig U og Veerman AJP (2002) Cellulær legemiddelresistens i barndommen akutt myeloid leukemi er relatert til kromosomale abnormiteter. Blod 100:3352-3360.