Komplementavhengig cytotoksisitet

Terapeutiske antistoffrediger

Utvikling av antitumorterapeutiske antistoffer innebærer in vitro analyse av deres effektorfunksjoner, inkludert evne TIL å utløse CDC til å drepe målceller. Klassisk tilnærming er å ruge antistoffer med målceller og kilde til komplement (serum). Deretter bestemmes celledød med flere tilnærminger:

• Radioaktiv metode: målceller er merket med 51Cr før CDC-analyse, krom frigjøres under cellelyse og mengden radioaktivitet måles.
• Måling av metabolsk aktivitet av levende celler (levende cellefarging): etter inkubering av målceller med antistoffer og komplement tilsettes plasmamembrangjennomtrengelig fargestoff (f. eks. calcein-AM eller resazurin). Levende celler metaboliserer det til ugjennomtrengelig fluorescerende produkt som kan detekteres ved flowcytometri. Dette produktet kan ikke dannes i metabolisk inaktive døde celler.
• Måling av aktiviteten til frigjorte intracellulære enzymer: døde celler frigjør enzym (f. eks. LDH eller GAPDH) og tillegg av substratet fører til fargeendring, som vanligvis kvantifiseres som endring av absorbans eller luminiscens.
• Døde celler flekker: Et (fluorescerende) fargestoff kommer inn i de døde cellene gjennom deres skadede plasmamembran. For eksempel binder propidiumjodid TIL dna fra døde celler og fluorescerende signal måles ved flowcytometri.

hla typing and crossmatch testEdit

CDC-analyser brukes til å finne en egnet donor for organ-eller benmargstransplantasjon, nemlig donor med matchende fenotype av histokompatibilitetssystem HLA. FØRST ER HLA-typing gjort for pasient og donor for å bestemme DERES hla-fenotyper. Når potensielt egnet par er funnet, kryssmatch test er gjort for å utelukke at pasienten produserer donor-spesifikke anti-HLA antistoffer, som kan forårsake pode avvisning.

CDC form AV HLA typing (andre ord serologisk typing) bruker batch av anti-HLA antistoffer fra karakteriserte allogene antisera eller monoklonale antistoffer. Disse antistoffene inkuberes en etter en med pasientens eller donorens lymfocytter og kilde til komplement. Antall døde celler (og dermed positivt resultat) måles ved døde eller levende celler farging. I DAG BLIR CDC-typing erstattet av molekylær typing, som kan identifisere nukleotidsekvenser AV HLA-molekyler via PCR.

CDC-analyse brukes vanligvis til å utføre kryssmatch-test. Den grunnleggende versjonen innebærer inkubasjon av pasientens serum med donor lymfocytter og andre inkubasjon etter tilsetning av kanin komplement. Tilstedeværelse av død celle (positiv test) betyr at donor ikke er egnet for denne pasienten. Det er modifikasjoner tilgjengelig for å øke testfølsomheten, inkludert forlengelse av minimal inkubasjonstid, tilsetning av antihuman globulin (AHG), fjerning av ubundne antistoffer før tilsetning av komplement, separasjon Av T-celle og B-celle delmengde. FORUTEN CDC crossmatch er det flyt-cytometrisk crossmatch tilgjengelig, som er mer følsom og kan oppdage selv komplement ikke-aktiverende antistoffer.