Tolke Kvantitativ Cytomegalovirus DNA-Testing: Forstå Laboratorieperspektivet | Jiotower
Analytiske Testegenskaper
det er ytelsesegenskaper for virusmengde tester som må forstås for å kunne bruke og tolke testresultater riktig. Disse inkluderer grensen for deteksjon (lod), nedre OG øvre LOQ, lineær rekkevidde, presisjon (reproduserbarhet) og nøyaktighet. LOD, definert som den laveste konsentrasjonen AV DNA som kan detekteres i 95% av replikater, brukes vanligvis til kvalitative molekylære tester; imidlertid kan begrepet også brukes på kvantitative virusmengde tester. Øvre Og nedre Loq er de høyeste OG laveste konsentrasjonene AV DNA som kan kvantifiseres med “akseptabel presisjon”. For tiden er det ingen avtalt definisjon for “akseptabel presisjon”; derfor definerer individuelle laboratorier dette lokalt. Måten “akseptabel presisjon” er definert på, kan i stor grad påvirke LOQ. LOD kan være ekvivalent med den nedre LOQ eller den kan være lavere enn den nedre LOQ. I sistnevnte situasjon kan testen oppdage CMV DNA, men verdien kan ikke kvantifiseres nøyaktig. I disse tilfellene kan laboratoriet rapportere resultatet som “oppdaget, men under LOQ”; noen laboratorier rapporterer dette som ” lavt positivt.”Laboratoriet skal kunne gi BÅDE LOD og LOQ; for eksempel i vårt laboratorium ER LOD AV CMV-virusbelastningstesten 100 kopier / mL, MENS LOQ er 300 kopier / mL. Etter samråd med klinikere ble det besluttet å rapportere verdier på 100-300 kopier / mL som” lave positive ” resultater, mens de >300 kopier/mL rapporteres som en heltallsverdi.
selv om svært følsomme molekylære tester ofte er viktige for påvisning av smittsomme patogener, kan DETTE ikke være tilfelle FOR CMV DNA-tester. Den kliniske signifikansen av lave NIVÅER AV CMV DNA (<100-500 kopier / mL) kan være vanskelig å tolke, spesielt hvis helblodprøver testes, fordi lave NIVÅER AV CMV DNA i fullblod eller plasma ikke alltid korrelerer med sykdomsutviklingen. Noen studier har blitt gjort for å bestemme terskelen for behandling, inkludert en naturhistorisk studie AV CMV sykdom hos levertransplanterte mottakere . VED HJELP AV COBAS Amplicor Monitor test (Roche Molecular Diagnostics) viste forfatterne at en virusbelastningsverdi på 2000-5000 kopier / mL korrelerte med utviklingen av endorgansykdom. Denne cutoff-verdien er testavhengig og kan være høyere eller lavere for andre LDTs. Studier har også vist at både virusbelastningsverdien og endringshastigheten i virusbelastning er viktige prediktorer for utviklingen av aktiv sykdom . Jo raskere økningen i virusbelastningsverdien er, desto større er risikoen for Å utvikle CMV-sykdom. Når testene er kalibrert med den internasjonale standarden, kan en universell klinisk relevant LOD og lavere LOQ identifiseres. Basert på tilgjengelige data og erfaringer, kan 250-500 IE/mL være egnet LOD og / eller lavere LOQ.
Gitt at De Fleste LDTs bruker sanntids polymerasekjedereaksjonsteknologier, er DET lineære spekteret AV CMV virusmengde tester vanligvis minst 6 log10; for eksempel kan testen oppdage fra 2,0 log10 kopier/mL (100 kopier/mL) til 7,0 log10 kopier/mL (10 millioner kopier / mL). EN gjennomgang AV CMV viral load testing utført i 2009 Ved Emory Medical Laboratories viste at av de ca 8500 CMV DNA viral load tester utført på plasmaprøver, var 671 (7.9%) positive. Av disse var 394 (58,7%) <1000 kopier/mL, 169 (25,2%) var mellom 1000 og 10 000 kopier/mL, og 63 (9,4%) var mellom 10 000 og 100 000 kopier/mL. I tillegg hadde 45 (6,7%) EN CMV DNA virusmengde på > 100 000 kopier/mL. Selv om lave virusbelastningsverdier er vanlige, er deres kliniske betydning uklar. Svært høye virusmengdeverdier er mindre vanlige, og når de oppstår, ses de vanligvis hos immunsupprimerte pasienter med primær CMV-infeksjon eller hos de med svært alvorlig sykdom. Fordi virusbelastningsverdier så høye som 10 millioner kan være tilstede hos enkelte individer, bør den øvre grensen for kvantifisering av en test være i dette området.
tolkningen av viktige forskjeller i langsgående virusbelastningsverdier hos en enkelt pasient krever en forståelse av testens presisjon eller reproduserbarhet. Typisk variabiliteten av virusmengde tester er størst nær den nedre OG øvre LOQ og lavest i den midtre rekke av analysen. Som et resultat er små endringer i lave virusmengdeverdier ikke signifikante; for eksempel eksisterer det ingen klar forskjell mellom resultater hos en pasient hvor virusmengdeverdien har økt fra 200 kopier / mL til 500 kopier / mL fordi denne forskjellen ligger innenfor variabiliteten av analysen. De mest nyttige data om klinisk viktige endringer i virusmengde verdier kommer fra erfaring MED HIV-1. For DISSE FDA-godkjente testene varierer variabiliteten av testen fra 0,1 log10 kopier / mL til 0,2 log10 kopier / mL, sammenlignet med den biologiske variabiliteten observert hos kronisk infiserte ubehandlede individer, som er ca. 0,3 log10 kopier / mL. Derfor antas endringer i virusmengde på > 0,5 log10 kopier / mL å representere biologisk viktige endringer i virusreplikasjon. Selv om 0.5-log10 kopier/mL-verdien har blitt mye vedtatt for bruk med mange andre virale patogener, kan DET ikke være nøyaktig FOR CMV. Fordi den biologiske variasjonen AV CMV ikke er kjent, har viktige endringer i virusmengdeverdier historisk blitt vurdert basert bare på testvariabiliteten. Videre arbeid med HIV-1 viste AT SD av testen måtte være ≤0,15 log10 kopier / mL for å skille 5 ganger endringer i virusmengde verdier . For CMV LDTs variasjonen av analysen er forventet å være noe bedre enn det som er sett FOR FDA-godkjente HIV-1 virusmengde tester og det kan godt være høyere, spesielt nær lavere LOQ . Derfor, når det oppdages CMV virusbelastningsverdier på < 1000 kopier / mL, endres < 5 ganger (0.7 log10) vil sjelden gjenspeile klinisk viktige endringer i virusreplikasjon. For verdier > 1000 kopier/mL kan 3 ganger (0,5 log10) endringer i virusmengde være signifikante, selv om Dette kan variere mellom LDTs. Noen sentre rapporterer virusbelastning som kopier / mL og som log10 kopier/mL fordi klinikere kan være mindre tilbøyelige til å overinterpretere små endringer i virusbelastningsverdier når de uttrykkes som log10-verdier.
en baseline prøve for virusmengde testing bør samles på dagen CMV behandling startes, selv OM CMV virusmengde testing ble utført noen dager tidligere. Raske økninger I CMV – virusbelastning kan forekomme i løpet av noen få dager hos pasienter med ubehandlet sykdom, noe som gjør DET viktig Å ha CMV – virusbelastningsverdien ved behandlingstidspunktet. Hvis virusbelastningsverdiene overskrider øvre LOQ, anbefales det at laboratoriet fortynner prøven for å bestemme den faktiske virusbelastningsverdien. Når behandlingen er startet, er det ideelle intervallet for monitorering ukentlig fordi halveringstiden TIL CMV DNA i plasma er 3-8 dager . En annen grunn til å bruke dette intervallet er at DET ikke er uvanlig at CMV-DNA-virusmengden øker hos en pasient noen dager etter behandlingsstart, og dette kan feiltolkes som behandlingssvikt. Fordi pasienter med vedvarende DNA i plasma eller fullblod har økt risiko for tilbakefall , anbefaler gjeldende retningslinjer å fortsette antiviral behandling til virusmengden er uoppdagelig. Noen pasienter har vedvarende lave NIVÅER AV CMV DNA i plasma eller fullblod og utvikler ALDRI CMV sykdom eller tilbakefall. I disse individene er det mer nyttig å følge trender i virusmengdeverdier over tid enn å vurdere betydningen av en gitt virusmengdeverdi. Virusmønstre som er bekymringsfulle for stoffresistente virus inkluderer de som ikke reduseres etter 2 uker med adekvat terapi, de med et platå i graden av virusmengde nedgang, og de som har en innledende dråpe og deretter en påfølgende økning i virusmengde mens de er på terapi. Disse pasientene bør evalueres for resistente virus ved å sekvensere UL97-og / ELLER ul54-genene (polymerase) direkte fra en plasmaprøve.
CMV DNA viral load tester er utformet slik at de ikke kryssreagerer med andre herpesvirus. I en immunkompromittert pasient reflekterer deteksjon av 2 herpesvirus, FOR eksempel CMV og Epstein-Barr-virus, reaktivering av begge virusene og skyldes ikke kryssreaktivitet.
