anatomie en fysiologie

deze studie werd uitgevoerd, met regels en voorschriften voor de verzorging en het gebruik van proefdieren van het dierenhuis en het desbetreffende experiment werd goedgekeurd door het Centraal Animal Ethical Committee. 25 vrouwelijke Zwitserse albinomuizen met een gemiddelde leeftijd van 45 dagen en een gewicht van 25 tot 35 GM werden willekeurig gekozen uit Animal house, uit verschillende broedkolonies. Deze vrouwelijke niet-drachtige volwassenen werden opzettelijk door mannelijke muizen van dezelfde variëteit copuleerd met als doel 10 pups van verdere generatie voort te brengen. In de kunststof polycarbonaat kooi met roestvrijstalen toppings enkele sterke en stevige heterozygote man werden geplaatst met enkele vrouw in een atmosfeer continu gehandhaafd op 20-25C en 55±5% vochtigheid, 12 uur vervolgens licht en donker cyclus. De vrouwelijke muizen werden onderzocht op Vaginale kruis plug en aanwezigheid van goed visualize plug werden gemarkeerd als vastgestelde zwangerschap en toegewezen dag nul van de zwangerschap. Op dag 7, 8 en 9 van de dracht werden vrouwelijke stekkers gecontroleerd op zwangerschap door abdominale palpatie.

karakterisering van Agnps

zilveren nanodeeltjes uit inkoopbronnen voor onderzoek werden geëvalueerd op hun primaire grootte door TEM en voor hun agglomeratie in celmedium door middel van Foton kruis correlatie spectroscopie (PCC ‘ s) en ultraviolet–zichtbare (UV-Vis) spectroscopie, dynamische lichtverstrooiing en Zeta potentieel. Representatieve tem foto ‘ s van de AgNps werden getoond. De tem beelden van de PVP gecoate AgNps verspreid en opgehangen in 1.5M NaCl bevestigde de primaire deeltjesgrootte die door de fabrikanten wordt verklaard. De ongecoate zilveren nanoparticles vonden heterogene distributie binnen de waaier van 50 tot 100 nm, de meesten van hen die rond 71nm zijn.

in het geval van gesuspendeerde poeder AgNps toonden TEM-beelden aan dat in een waterig milieu de zilveren nanodeeltjes samenklonteren en grote aggregaten vormen, waarvan vele groter zijn dan 50 Nm. Dit resultaat is in overeenstemming met de resultaten van hydrodynamische grootteverdeling die werd verkregen uit de dynamische lichtverstrooiing methode (zeta sizer). EDX-analyses werden bevestigd dat alleen elementair zilver werd gepresenteerd in zowel colloïdale als droge gepoederde Agnpen. Volgens de ICP-AES-resultaten waren de concentraties van Agionen in de zuur verteerde voorraden colloïdale en gesuspendeerde poederagnpen respectievelijk 1908,1 en 447,2 mgl-1. Ook de resultaten van het XRD-patroon bevestigen de kristalliniteit van gepoederde Agnpen en de aanwezigheid van elementair kristallijn zilver, ook andere fasen, behalve metallisch zilver, waren niet aanwezig in het monster. Bovendien toonden de XRF-resultaten aan dat de zuiverheid van agnps in poedervorm 97,86% was.

blootstelling van de agnps colloïdale oplossing via herhaalde orale maagsonde

drachtige muizen werden dubbel toegediend met een normale zoutoplossing (Sham control) als medium en in een dosis van 5, 10, 15, 20 mg/kg L.G. werden toegediend via herhaalde orale maagsonde, van 7 tot 12 zwangerschapsdag met behulp van een stompe punt gebogen schacht voedingsnaald en van bevestigd. Schijnbestrijdingsdieren worden opgenomen in experimenten met behandelde dieren en onbehandelde dieren.

dissectie en verwijdering

op GD 18 werden de rechter-en linkerhoorns van de uterus van de zwangere moeder geëxterioriseerd na ventrale laparotomie onder diepe ether/chloroformanesthesie en 250 vers verzamelde Dammen werden gewassen met leidingwater op een petrischaaltje om bloed en vruchtwater te verwijderen en gedroogd met filtreerpapier en gedehydrateerd in 95% alcohol gedurende 48 uur, eindelijk blootgesteld aan 1% KOH voor consistentieverwijdering en alizarine kleuring protocol voor een goede visualisatie van botten normaal of abnormaal.13

Method (Assessment of skeletal dysmorphology by the technique of evisceration and Alizarin kleuring) -:

Skeletal dysmorphology study were done by the technique of evisceration and alizarine kleuring. Alle monsters (50 pups) van elke groep werden gedurende 48 uur gedehydrateerd in 95% alcohol ( gerectificeerde gedistilleerde drank) en vervolgens verwijderd en gewassen met stromend leidingwater en vervolgens ontdaan van de ingewanden met 1% KOH-oplossing (KOH 1gm+100 ml d.G.). Na het doen van ventrale laparotomie worden vitale organen verwijderd. De monsters werden gedurende ten minste 2 tot 4 dagen grondig ondergedompeld in voldoende 1% kaliumhydroxide (KOH) – oplossing totdat het vlees, de pezen, de spieren en de ingewanden transparant & helder waren en ontbonden, gevolgd door een kristalheldere zichtbaarheid van de botten en het kraakbeen. Elke dag oplossing werd veranderd wanneer het verkleurd en afval.

het kristalheldere zichtbare bot-en kraakbeen werd vervolgens in dezelfde 1% KOH geplaatst en vervolgens werden 6 tot 8 druppels van 1% alizarine vlek toegevoegd om het diep paarsachtig rood te kleuren. De oplossing werd een paar keer per uur voorzichtig geschud. Vervolgens werd dezelfde procedure voortgezet voor een andere 2-3 dagen om diepe paarsrode kleur te geven aan bot en kraakbeen. Voor verwijdering van om het even welke over het bevlekken en het gladmaken van de steekproeven, wordt het zelfde dan overgegaan door 40%, 80% (40ml glycerol+60ml gedestilleerd water, 80ml glycerol+20ml gedestilleerd water) en 1 tot 2 kristalthymol toegevoegd voor behoud op lange termijn uiteindelijk gehandhaafd in 100% glycerol, geserveerd voor foto & krachtige observatie van de handlens.

in totaal werden 250 foetussen verzameld bij 25 moeders uit 1, 2, 3, 4 en 5 groepen waarvan alle monsters werden blootgesteld aan experimenten met skeletdysmorfologie. 60 foetussen werden waargenomen resorptie.

statistieken

Percentage skeletmalformaties werd geëvalueerd uit elke groep en beoordeeld op het aantal bot dat betrokken is bij de dysmorfologie en ten slotte werden de percentages vergeleken tussen de groep en binnen de groep voor dosisafhankelijke teratogeniteitsfactor. Multi ANOVA en beschrijvende statistieken (post hoc analyse) test gebruikt voor dit doel.

observatie en bevindingen

het percentage skeletdysmorfologie werd hoger en het hoogst gevonden bij met 15 mg AgNps en 20 mg AgNps/ kg L.G. behandelde pups (Tabel 1).

de met agnps behandelde groepen met een lagere dosis (0,5 & 1 mg / kg L. G.) werden zeer minimale percentages skeletafwijkingen waargenomen, zodat deze behandelde groepen bijna werden beschouwd als foetussen van de controlegroep (figuur 1).

figuur 1 Controle foetus alizarine vlek dorsaal zicht (A) en laterale zicht (B).

een van de 5mg AgNps/ kg L.G. behandelde groep pup vertoonde een niet-gediagnosticeerd 5e sternale segment van de sternale staaf en niet-gediagnosticeerd Manumbrium segment dat wordt gediagnosticeerd als sternale spleet. Andere foetussen vertoonden maxillaire en mandibulaire hypoplasie, ongeössificeerd frontaal, pariëtaal en nasaal bot, falen van fusie van posterieur segment van het heupbeen, 10,11 en 12e rib gezien rudimentair in de linkerkant van een van de foetus. Afwezigheid van de middelste schacht van 6 tot 12e rib samen met een toename van de ruimte tussen opeenvolgende ribben werden aangegeven bij meerdere foetussen van verschillende groepen en gediagnosticeerd als een verhoogde webruimte, afwezigheid van het lichaam & spinous proces wordt gezien van hele thoracale wervelsegmenten die wordt gediagnosticeerd als neurale buisdefect van nauw type in 1% gevallen van deze behandelde groep foetussen. Het percentage skeletdysmorfologie berekend in deze groep was 32% (Figuur 2).

Figuur 2 5 mg AgNps behandelde groep foetus Alizarine vlek dorsaal aanzicht (A) en (B), zijaanzicht (C) ventraal aanzicht (D) en dorsaal aanzicht(E)

De 10 mg AgNps behandelde groep foetussen aangetoond skelet dysmorphology in de vorm van afwezigheid van de lumbale en sacrale wervel, de afwezigheid van de heupbeenderen, ernstig gedegenereerde ribben zonder kraakbeenderen, frontale en pariëtale botten toonde unossified en onontwikkeld, scoliose is waargenomen in de thoracale en lumbale regio in één van de foetus, de afwezigheid van cervicale wervel wordt gezien, maxillaire hypoplasie, openbaarmaking van de sagittale en coronale hechtingen worden ook gezien. Onontwikkelde onderste ledematen botten worden gezien aan beide zijden van een van de foetus. Het percentage skeletdysmorfologie berekend in deze groep was 44% (Figuur 3).

Figuur 3 10 mg agnps behandelde groep foetus alizarine vlek dorsaal zicht (A, B).

Onder 15mg AgNps behandelde groep 8 pups werden waargenomen afwezigheid van de cervicale wervelkolom met de afwezigheid van de 12e rib en de rest van de wervels werden waargenomen onontwikkelde stekelig proces, Metatarsale gespleten is ook te zien op dorsaal aanzicht van de voet van één van de foetus, unossified heup bot op ventrale bekijken met de afwezigheid van het segment & fibrosis wordt ook gezien, unossified slaapbeen, die is gevonden fibrosed op het zijaanzicht van de schedel, de afwezigheid van een proximale segment van innominate bot, wervelkolom anomalie werd gezien met rudimentaire 6 en 9 rib en de afwezigheid van de 10e,11e en 12e is waargenomen ribben in een van de foetus, niet-geossificeerd pariëtaal bot werd ook gezien, anencefalie met scoliose wervels werd gezien in L1-L5 in een van de foetus, niet-geossificeerd heupbeen werd gezien, niet-geossificeerde scapulae van beide zijden werd gezien op dorsaal zicht van een van de foetus, afwezigheid van kraakbeen werd gezien van 6e tot 12e rib in een van de foetus. Het percentage skeletdysmorfologie berekend in deze groep was 60% (Figuur 4).

Figuur 4 15 mg agnps behandelde groep foetus alizarine vlek dorsaal zicht (A, B) en ventraal zicht (C)

de 20mg/ kg L.G. Met AgNps behandelde foetussen in de groep kregen het hoogste percentage skeletdysmorfologie (76%). Scoliose werd gezien in het lumbale gebied bij één van de foetus, één foetus vertoonde niet-geossificeerd occipitaal bot, niet-geossificeerd scapulae en heupbeen, grote fibrose wordt waargenomen in maxilla, frontale en pariëtale botten, hetzelfde wordt ook waargenomen in het tweede tot zesde segment van het borstbeen., gespleten wordt waargenomen in het enkelgewricht, verhoogde ruimte wordt waargenomen tussen 1e en 2e rib en 5e tot 8e rib van de linkerkant van een van de foetus, ook gespleten wordt waargenomen in symphisis pubis gezamenlijke van een van de foetus , niet-geossificeerde mandibulaire hypoplasie, afwezigheid van doornuitsteek met golvende ribben wordt ook waargenomen, in een foetus zagen we volledige fusie van de 2e tot 8e cervicale wervels die duidelijk wordt onderscheiden van de rest van de 1e cervicale wervels. We zagen ook lichte scoliose en niet-geossificeerd occipitaal en pariëtaal bot en afwezigheid van scapulae aan de rechterkant van een van de foetus, hypo plastic wervels wordt ook gezien (Figuur 5).

Figuur 5 20 mg AgNps behandelde groep foetusalizarine vlek dorsaal zicht.