Complementafhankelijke cytotoxiciteit

therapeutische antiboediesedit

ontwikkeling van therapeutische antitumorantilichamen omvat in vitro analyse van hun effectorfuncties, waaronder het vermogen om CDC te activeren om doelcellen te doden. De klassieke benadering is om antilichamen met doelcellen en bron van aanvulling (serum) te incuberen. Dan wordt celdood bepaald met verschillende benaderingen:

• radioactieve methode: de doelcellen worden geëtiketteerd met 51Cr vóór CDC-analyse, wordt het chromium vrijgegeven tijdens cellysis en wordt de hoeveelheid radioactiviteit gemeten.
• meting van de metabole activiteit van levende cellen (kleuring van levende cellen): na incubatie van doelcellen met antilichamen en complement wordt membraanpermeabele kleurstof in plasma toegevoegd (bv. calceïne-AM of resazurine). De levende cellen metaboliseren het in ondoordringbaar fluorescerend product dat door cytometry stroom kan worden ontdekt. Dit product kan niet worden gevormd in metabolisch inactieve dode cellen.
• meten van de activiteit van vrijgegeven intracellulaire enzymen: dode cellen geven enzym af (bijv. LDH of GAPDH) en de toevoeging van zijn substraat leidt tot kleurverandering, die gewoonlijk als verandering van absorptie of luminiscentie wordt gekwantificeerd.
• dode cellen kleuring: een (fluorescerende) kleurstof komt in de dode cellen via hun beschadigde plasmamembraan. Bijvoorbeeld bindt propidium jodide aan DNA van dode cellen en het fluorescente signaal wordt gemeten door cytometry stroom.

HLA-type-en crossmatchtestedit

CDC-assays worden gebruikt om een geschikte donor voor orgaan-of beenmergtransplantatie te vinden, namelijk donor met een passend fenotype van histocompatibiliteitssysteem HLA. In eerste instantie wordt HLA-typering gedaan voor patiënt en donor om hun HLA-fenotypen te bepalen. Wanneer potentieel geschikte paar wordt gevonden, crossmatch test wordt gedaan om uit te sluiten dat de patiënt produceert donor-specifieke anti-HLA antilichamen, die transplantaat afstoting kan veroorzaken.

CDC vorm van HLA-typering (met andere woorden serologische typering) maakt gebruik van batch anti-HLA-antilichamen van gekarakteriseerde allogene antisera of monoklonale antilichamen. Deze antilichamen worden één voor één geïncubeerd met lymfocyten van de patiënt of donor en bron van aanvulling. De hoeveelheid dode cellen (en dus het positieve resultaat) wordt gemeten door dode of levende cellen die bevlekken. Tegenwoordig wordt CDC het typen vervangen door het moleculaire typen, dat nucleotideopeenvolgingen van HLA molecules via PCR kan identificeren.

CDC-test wordt gewoonlijk gebruikt voor het uitvoeren van crossmatch-test. De basisversie omvat incubatie van het serum van de patiënt met donorlymfocyten en tweede incubatie na het toevoegen van konijnencomplement. Aanwezigheid van dode cel (positieve test) betekent dat donor niet geschikt is voor deze specifieke patiënt. Er zijn wijzigingen beschikbaar om de testgevoeligheid te verhogen, waaronder verlenging van de minimale incubatietijd, het toevoegen van antihuman globuline (AHG), het verwijderen van ongebonden antilichamen vóór het toevoegen van aanvulling, scheiding van T-cel en B-cel subset. Naast CDC crossmatch is er flow-cytometrische crossmatch beschikbaar, die gevoeliger is en zelfs niet-activerende antilichamen kan detecteren.