Cytokeratine 5/6 en cytokeratine 8/18 expressie in drievoudige negatieve borstkanker: clinicopathologische significantie in Zuid-Aziatische populatie

methoden

totaal 150 gevallen van TNBC werden geselecteerd uit archieven van de pathologieafdeling. De chirurgische specimens omvatten gemodificeerde radicale mastectomies, eenvoudige mastectomies en brede lokale excisies met sentinel lymfeklieren dissectie. Alle patiënten ondergingen operaties in Liaquat National hospital, Karachi van januari 2008 tot December 2013 over een periode van 6 jaar. De studie werd goedgekeurd door de onderzoeks-en ethische beoordelingscommissie van de instelling en er werd geïnformeerde toestemming van alle patiënten genomen op het moment van de operatie. Met hematoxyline en eosine bevlekte objectglaasjes en paraffineblokken werden opgehaald en waar nodig werden nieuwe secties gesneden. Dia ‘ s van alle gevallen werden beoordeeld door twee senior histopathologen en pathologische kenmerken zoals histologisch type, tumorgraad, T-Stadium, N-stadium, lymfovasculaire invasie, necrose, fibrose, lymfocytaire infiltratie (tumorinfiltrerende lymfocyten), aanwezigheid van insitu-component, pagetoïde verspreiding en dermale lymfatische invasie werden geëvalueerd. Klinische gegevens van alle patiënten werden ook beoordeeld op basis van institutionele gegevens om de leeftijd van de patiënt, de voorgeschiedenis van bestraling en chemotherapie en de status van recidief te evalueren. Bovendien werden representatieve blokken van elk geval geselecteerd en ER, PR en her2neu immunohistochemie werden uitgevoerd om de drievoudige negatieve status te herbevestigen.

ER, PR, Her2neu en Ki67 IHC werden uitgevoerd met Dako antilichamen zoals onder, met EnVision™ FLEX, hoge pH DAKO kit volgens het Protocol van de fabrikant.

1. FLEX monoclonal konijn anti-menselijke oestrogeenreceptor alpha, kloon EP1.

2. FLEX monoklonale muis anti-humane progesteron receptor kloon PGR 636.

3. Polyclonal rabbit anti-human C-erbb-2 oncoprotein.

4. FLEX monoclonal mouse anti-human Ki67 antigeen clone MIB-1.

nucleaire kleuring van ER en PR in > 1% van de kankercellen werd als positief beschouwd. Voor her2neu werden gevallen gescoord met 1+, 2 + en 3 + volgens de CAP-richtlijnen. Voor twijfelachtige gevallen (2+) werd FISH uitgevoerd met Path Vysion Her2neu probe kit volgens de protocollen van de fabrikant. De resultaten werden uitgedrukt als een verhouding van her2neu-signalen in vergelijking met CEP17-signalen volgens de ASCO/CAP-richtsnoeren.

Ki67 immunostaining werd geregistreerd als continue variabelen gebaseerd op het percentage positief gekleurde kankercellen. Verder werden de gevallen op basis van de Ki67-index ingedeeld in < 15, 16-24, 25-44 en > 44% ki67-indexcategorieën.

CK5 / 6 IHC werd uitgevoerd met behulp van Flex monoklonale muis Anti-humaan Cytokeratine 5/6, kloon D5/16 B4 volgens de DAKO envision methode volgens het Protocol van de fabrikant. Intermediaire tot sterke cytoplasmatische en membraneuze kleuring in meer dan 10% cellen werd als positief beschouwd. Zwakke tot middelmatige kleuring bij < 10% werd als focaal positief beschouwd, terwijl geen kleuring als negatief werd beschouwd (aanvullend dossier 1: Figuur S1).

CK 8/8 IHC werd uitgevoerd met monoklonale muis anti-humaan Cytokeratine 5/6, kloon D5 / 16 B4, volgens de DAKO envision methode. Intermediaire tot sterke cytoplasmatische en membraneuze kleuring in meer dan 50% cellen werd als positief beschouwd. Zwakke tot middelmatige kleuring (cytoplasmisch, met verlies van membraanreactiviteit) bij 10-50% werd als focaal positief beschouwd, terwijl geen kleuring of zwakke kleuring bij < 10% als negatief werd beschouwd (aanvullend dossier 1: Figuur S1).

Recidiefstatus en follow-up werden geëvalueerd door het medisch dossier van het ziekenhuis te herzien. Overall survival werd genomen als tijd van chirurgische excisie tot overlijden of laatste follow-up en ziektevrije overleving werd gedefinieerd als tijd tussen chirurgische excisie en lokaal recidief of verre metastase, overlijden of laatste follow-up.

statistisch pakket voor sociale wetenschappen (SPSS 21) werd gebruikt voor het compileren en analyseren van gegevens. Gemiddelde en standaardafwijking werden berekend voor kwantitatieve variabelen. Frequentie en percentage werden berekend voor kwalitatieve variabelen. Het Chi-plein werd toegepast om de associatie te bepalen. Student t test of Mann whitney test werden toegepast om verschil in middelen tussen groepen te vergelijken. P-waarde ≤ 0,05 als significant. Overlevingscurves werden uitgezet met behulp van de Kaplan–Meier-methode en de significantie van het verschil tussen overlevingscurves werd bepaald met behulp van de log-rank ratio. P-waarde ≤ 0.05 werd als belangrijk beschouwd.

resultaten

De gemiddelde leeftijd van de bij de studie betrokken patiënten was 48,9 jaar en de meest voorkomende leeftijdsgroep was 31-50 jaar. De meeste patiënten presenteerden zich in stadium T2 met een hoge gemiddelde ki67-index, d.w.z. 46,9%. 42,7% van de gevallen had nodale metastase. Hoewel 84% van de gevallen conventioneel invasief ductaal carcinoom, NST, had; een significant deel van de gevallen was echter van metaplastische histologie (9,3%). De meeste gevallen waren van hoge graad (86,7% graad III). De meeste tumoren vertonen lymfocytaire infiltratie en necrose. De meeste tumoren ontbreken insitu component (61%). Lokaal recidief of late verre metastase werd waargenomen in 17,8% van de gevallen (Tabel 1).

positieve (> 10%) CK5/6 expressie werd opgemerkt in 8% (12 gevallen) van TNBC terwijl 2,4% (4 gevallen) focaal positief (< 10%) en 89,3% (134) negatief waren met CK5/6. Volledig verlies van CK8/18-expressie werd waargenomen bij 4,7% (7 gevallen), terwijl 32,7% (49 gevallen) focaal verlies van CK8/18 vertoonde en 62,7% (94 gevallen) intacte normale expressie van CK8 / 18 vertoonde. Er werd geen significant verband tussen CK5/6 en CK8/18 met verschillende clinicopathologische parameters waargenomen (tabellen 2 en 3). Evenzo werd geen significante associatie van CK 5/6 en CK8/18 met recidiefstatus van de patiënten waargenomen (aanvullend dossier 2: Figuur S2).

Discussie –

de In dit onderzoek bekeken we ook de uitdrukking van een basale (CK5/6) en een luminale marker (CK8/18) in TNBC in onze bevolking en vond dat zijn; 8-en 2,7% van de TNBC positief en focal positieve uitdrukking van CK5/6 respectievelijk 4,7 en 32.7% van TNBC vertoonde volledig verlies en focaal verlies van respectievelijk CK 8/18 expressie. In alle gevallen waarin focaal verlies CK8/18 werd opgemerkt, was er verlies van membraanreactiviteit terwijl cytoplasmatische kleuring in enkele cellen werd behouden. Er werd echter geen significant verband waargenomen tussen deze abnormale expressiepatronen van cytokeratinen met verschillende clinicopathologische en prognostische parameters van TNBC in onze populatie. Borstkanker is één van de gemeenschappelijkste malignancies in Zuid-Aziatische bevolking vooral in jonge leeftijd .Het profileren van genexpressie definieert basale borstkanker als die welke basale clusters van genen vertonen waaronder EGFR, basaal cytokeratine 5/6, C–kit, proliferatiecluster en lage expressie van Her2neu-en hormoonreceptorgerelateerde genen . Echter basale borstkanker is niet een enkele entiteit en het omvat verschillende subtypes waaronder twee basaal-achtige subtypes (BL1 en BL2), mesenchymale, mesenchymale stam-achtige, immunomodulerende en luminale androgeensubtypes . Naast dat interferon rijk en claudin-lage subtypes zijn ook gedefinieerd . Subtypering van basale borstkanker wordt niet aanbevolen door ASCO/CAP. De CK 5/6-expressie varieert van 24 tot 72% bij TNBC, zoals gemeld in eerdere studies . Andere onderzoekers hebben ook prognostische betekenis van CK 5/6 in knooppunt negatieve borstkanker voorgesteld . Nielson et al. suggereerde dat CK5 / 6 positieve borstkanker slechtere prognose hebben onafhankelijk van tumorgraad, T-Stadium en hormonale/Her2neu status . Evenzo werd in een andere studie voorgesteld dat CK5 / 6 een marker is van kortere ziektevrije overleving, onafhankelijk van andere prognostische factoren van borstkanker . Inanc et al. rapporteerde 50.5% expressie van CK5 / 6 met positieve correlatie van CK5 / 6 TNBC met nodale metastase en tumorgrootte . Nochtans, in tegenstelling tot deze studies vonden wij een lage uitdrukking van CK5/6 uitdrukking in TNBC in onze bestudeerde bevolking, die een verschillend genomic profiel van TNBC in onze bevolking kan vertegenwoordigen, die in verdere studies moet worden onderzocht. De prognostische rol van CK5/6 is voorgesteld in andere kanker van het lichaam .

CK8 / 18 is een luminaal cytokeratine die voornamelijk wordt uitgedrukt in borstepitheel in een membraneus en cytoplasmatisch patroon. Cimpean et al. definieerde deze verschillende patronen van CK8 / 18 in borstkanker; diffuus cytoplasmisch, membraneus en gecombineerd cytoplasmisch en membraneus .Sommige onderzoekers hebben voorgesteld dat het verlies van CK8/18 uitdrukking / lage CK8 / 18 met slechtere prognose en hoog risico van metastase wordt geassocieerd . We vonden echter geen prognostische significantie van verlies van CK8/18 expressie met verschillende prognostische factoren en recidief in TNBC.

we vonden dat 32,7% van TNBC focaal expressieverlies vertoont CK8 / 18. In al deze gevallen was er verlies van membraneuze reactiviteit van CK8/18 terwijl cytoplasmatische kleuring in enkele cellen werd behouden. Aiad et al. in een studie die 70 gevallen van borstkanker impliceren vond abnormale uitdrukking van CK8 / 18 (cytoplasmic) in 70% van Egyptische borstkanker, die heel wat heterogeniteit in cytokeratin uitdrukking van borstkanker in verschillende delen van wereld voorstellen .