het kwantificeren van ROS-niveaus met behulp van CM-H2DCFDA en HyPer

bij lage niveaus kunnen reactieve zuurstofspecies (ROS) fungeren als signaalmoleculen in cellen. Wanneer de Ros-productie de capaciteit van endogene antioxidantsystemen sterk overschrijdt, of de antioxidantniveaus worden verminderd, stijgen de Ros-niveaus verder. Dit laatste wordt geassocieerd met inductie van oxidatieve stress en geassocieerde signaaltransductie en wordt gekenmerkt door Ros-geïnduceerde veranderingen in cellulaire redoxhomeostase en / of schadelijke effecten op biomoleculen (bijv. DNA, eiwitten en lipiden). Gezien de complexe mechanismen betrokken bij Ros productie en verwijdering, in combinatie met het gebrek aan reporter moleculen die echt specifiek zijn voor een bepaald type van ROS, is kwantificering van (sub)cellulaire Ros niveaus een uitdagende taak. In dit hoofdstuk beschrijven we twee strategieën om ROS te meten: one approach to assess general oxidant levels using the chemical reporter CM-H2DCFDA (5-(and-6)-chloromethyl-2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate), and a second approach allowing more specific analysis of cytosolic hydrogen peroxide (H2O2) levels using protein-based sensors (HyPer and SypHer).