in Vitro evaluatie van colloïdaal zilver op de immuunfunctie: Antilymphoproliferatieve activiteit

Abstract

colloïdaal zilver (AgC) wordt momenteel gebruikt door mensen en kan worden geïnternaliseerd door inhalatie, injectie, ingestie en contact met de huid. Er is echter beperkte informatie over immunologische activiteit; meer onderzoek met colloïdaal zilver is nodig. In de huidige studie, de effecten van AgC (17.5 ng / mL) op immunologische parameters (proliferatie en immunofenotypering) met behulp van humane perifere bloedmononucleaire cellen (PBMC) en macrofagen (fagocytose) en cytotoxiciteit op leukemie en lymfoom kankercellijnen (1,75 tot 17,5 ng/mL) werden onderzocht. AgC bleek de productie en proliferatie van interleukine-2 (IL-2) geïnduceerd door fytohemagglutinine of concanavaline A in PBMC significant () te verminderen zonder de levensvatbaarheid van de cellen te beïnvloeden, maar met een cytotoxisch effect op kankercellen. De productie van IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, INF-γ en IL−17A cytokines en de fenotypen CD3+, CD3-CD19+, CD3+CD4+, CD3+CD8+ en CD16+CD56+ PBMC werden niet beïnvloed door AgC. Deze studie toont aan dat colloïdaal zilver onschadelijk en niet-toxisch is voor de immuunsysteemcellen en dat het in staat is om de immuunrespons te beïnvloeden door de celproliferatie te verminderen wanneer het wordt gestimuleerd met mitogenen, het antilymphoproliferatieve potentieel van AgC aantoont.

1. Inleiding

de bioactiviteit van stoffen is onderzocht om eigenschappen te identificeren die verband houden met de antitumorale of antiproliferatieve werking . Producten met deze activiteit zijn gebruikt in de klinische praktijk voor de behandeling van kanker of ziekten met betrekking tot ontsteking, zoals auto-immuniteit. Zilverproducten worden al duizenden jaren gebruikt voor hygiëne en als antimicrobiële middelen. Sinds 1964 wordt colloïdaal zilver (AgC) geregistreerd als biocidaal materiaal in de Verenigde Staten ; in Mexico wordt AgC vaak gebruikt als ontsmettingsmiddel van water en voedsel voor menselijke consumptie . Over het algemeen zijn deze producten een mix van metallische nanodeeltjes met oxidatietoestand van nul (Ag+0) en zilverzouten met oxidatietoestand van Ag+1, +2 of +3 . Er zijn studies die erop wijzen dat de antibacteriële en antitumoreigenschappen afhankelijk zijn van de oxidatietoestanden van zilver . De zilveren nanoparticles (AgNPs) en de zilveren ionen (Ag+) hebben verschillende niveaus van giftigheid toe te schrijven aan hun oppervlakkige ladingsinteractie. Zilver-ionen meer giftig omdat zij kunnen communiceren met negatieve groepen van eiwitten, de productie van structurele veranderingen op de celmembraan en de cytoplasmatische eiwitten, terwijl AgNPs kan interageren met DNA-schade veroorzaken en structurele blokkeren; sommige studies hebben voorgesteld dat deze nanostructuren kan produceren verhoogde toxiciteit op lange expositie keer te wijten aan het feit dat AgNPs in waterige oplossingen kan oxideren en release zilver-ionen; het succesvolle gebruik van colloïdaal zilver oplossingen kunnen worden verklaard door deze actie mechanisme . De antikankeractiviteit van AgC op MCF – 7 kankercellen is waarschijnlijk te wijten aan geïnduceerde apoptose door het verminderen van lactaatdehydrogenase en het verhogen van superoxide dismutase-activiteiten; in PBMC daarentegen daalde de lactaatdehydrogenase-activiteit met AgC, maar correleerde het niet met celdood . Er is schaarse wetenschappelijke informatie over immunologische en kankerparameters in mensen betreffende de gevolgen van colloïdaal zilver, als een mix van nanodeeltjes en ionen, vergeleken met zilveren nanodeeltjes onderzoek. De huidige studie werd ontworpen om de antiproliferatieve eigenschappen van colloïdaal zilver en zijn effect op cellulaire immunofenotyping, cytokines productie, en fagocytose op PBMC te onderzoeken.

2. Materialen en methoden

2.1. Colloïdaal zilver (AgC)

grenetine-gestabiliseerd colloïdaal zilver werd gekocht van MICRODYN (México) als een stamoplossing van 0,35%. Het werd gesteriliseerd door filtratie (0.2 µm filter, Millipore, USA) en verdund tot een concentratie van 10.5 µg/mL met RPMI-1640, aangevuld met 10% FBS voor in vitro analyses.

2.2. Reagentia

fytohemagglutinine (gebruikt in doses van 5 µg/mL) en concanavalin A (gebruikt in doses van 5 µg/mL) werden gekocht bij Sigma-Aldrich (St.Louis, MO, USA). Doxorubicine (LEMARY S. A. De C. V., México) werd opgeslagen als 3,4 mM stamoplossing in RPMI 1640 bij kamertemperatuur en LPS (E. coli 0111:B4, Sigma-Aldrich) werd bereid met 10 ng/mL om mononucleaire cellen van menselijk perifeer bloed te behandelen.

2.3. AGC-karakterisatie

de morfologie van colloïdaal zilver werd onderzocht met behulp van field emission scanning electron microscope (sem) (Nova NanoSEM200 FEI). Colloïdale oplossing (50 µL) werd op een koolstofband geplaatst en bij kamertemperatuur gedroogd. Nanodeeltjes grootte en distributie metingen werden bepaald met behulp van een dynamic light scattering (DLS) uitgevoerd door een NANOSIZER NS 90 Malvern Instruments (Malvern Instruments, UK); grootteverdelingen gegeven door DLS werden gerapporteerd als percentage van intensiteit, en de resultaten werden gepresenteerd als de gemiddelde waarde van ten minste drie metingen. Resonantieplasmon gemeten met UV-vis werd waargenomen in een bereik tussen 300 en 600 nm met behulp van NanoDrop spectrofotometer 2000 (Thermo Fisher Scientific).

2.4. Isolatie van mononucleaire cellen in perifeer bloed (PBMC)

bloed van gezonde menselijke vrijwilligers werd verkregen met hepariniseerde spuiten en in steriele polypropyleen buisjes geplaatst. PBMC werden verder geïsoleerd met Histopaque 1.077 dichtheid gradiënt centrifugatie bij 400 g gedurende 30 min bij 25°C (Sigma-Aldrich). PBMC werden tweemaal gewassen met RPMI 1640 medium aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS) en 1% antibioticum-antimycotische oplossing (aangeduid als compleet RPMI medium) bij 250 g gedurende 10 minuten bij 25°C.

2,5. De levensvatbaarheid van de cellen

PBMC werd aangepast tot 1 × 106 cellen/mL in volledig RPMI-medium, en 17,5 ng/mL colloïdaal zilver werd toegevoegd en gedurende 72 uur geïncubeerd bij 37°C en 5% CO2-atmosfeer. Daarna werd het supernatant verwijderd door centrifugeren bij 250 g. cellen werden vervolgens tweemaal gewassen met volledig RPMI-medium. De levensvatbaarheid van de cellen werd bepaald door de colorimetrische MTT-reductietest en de optische dichtheid als gevolg van de formazanproductie werd gemeten bij 570 nm. De levensvatbaarheid van de cellen werd uitgedrukt als percentage van de levensvatbaarheid in vergelijking met de onbehandelde controlegroep. De resultaten werden gegeven als het gemiddelde ± SD van drie onafhankelijke experimenten.

K562 (chronische myelogene leukemie), MOLT-4 (acute lymfoblastische leukemie), Ramos (Burkitt ‘ s lymfoom) en l5178y (lymfoom) kankercellijnen werden gekocht bij de American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) en gehandhaafd in volledig RPMI-medium. Cellen werden gekweekt bij 37°C en 5% CO2 atmosfeer. Kankercellijnen (5 × 103 cellen/put) werden geplateerd op 96-wells platen en geïncubeerd gedurende 24 uur bij 37°C in 5% CO2 atmosfeer.

na incubatie werd het kweekmedium verwijderd en werd colloïdaal zilver toegevoegd in concentraties variërend van 1,75 tot 17,5 ng/mL. De platen werden vervolgens gedurende 5 uur bij 37°C en 5% CO2-atmosfeer geïncubeerd. Daarna werd het supernatant verwijderd en werden de cellen tweemaal gewassen met RPMI 1640 medium. De levensvatbaarheid van de cellen werd bepaald met de trypan blue exclusion-methode en de cytotoxiciteit werd uitgedrukt als 50% (LD50) en 100% (LD100) celgroeiremming, vergeleken met onbehandelde controle. De resultaten werden gegeven als het gemiddelde ± SD van drie onafhankelijke experimenten.

2.6. Cytokinenassay

Supernatanten van met AgC behandelde PBMC werden geanalyseerd op cytokinenconcentraties. IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-γ, TNF-α en IL-17A humane cytokines werden bepaald door flowcytometrie (Accuri C6, Bd Bioscience, CA, USA), met behulp van CBA Th1/Th2/Th17 Cytokine Kit BD™ (bd Bioscience, Bedford, MA, USA), volgens de instructies van de fabrikant. CBA Flex Set analyse werd uitgevoerd met behulp van FCAP array v1. 0 software (Soft Flow Inc., VERENIGDE). Eiwitwaarden werden omgezet in nibsc / WHO-eiwitstandaarden voor verdere vergelijkingen.

2.7. Proliferatie-en IL-2-Test

PBMC werden geïsoleerd door Histopaque-dichtheidsgradiëntcentrifugatie, driemaal gewassen met PBS en geresuspendeerd in verdunningsmiddel C bij 106 cellen/mL. De celsuspensie werd vervolgens verdund met hetzelfde volume van 2,5 mM PKH26 kleurstofvoorraad (Sigma, St.Louis, MO) bereid in verdunningsmiddel C, geïncubeerd gedurende 3 minuten bij kamertemperatuur, vervolgens toegevoegd aan een gelijk volume van FBS, en geïncubeerd bij kamertemperatuur gedurende nog eens 2 minuten om de etikettering te stoppen, volgens “Rimaniol et al., 2003 .”Daarna werden PBMC aangepast bij concentraties van 1 × 106 cellen / mL, behandeld met colloïdaal zilver bij een concentratie van 17,5 ng/mL, PHA of Con A, en geïncubeerd gedurende 72 uur bij 37°C en 5% CO2 atmosfeer; de cellulaire proliferatie werd bepaald door flow cytometrie. De hoeveelheden IL-2-gehalte in supernatanten van PBMC werden gemeten met de humane IL-2 High Sensitivity ELISA kit (detectielimiet 0,4 pg / mL) en gebruikt volgens de instructies van de fabrikant (eBiosciences, Wenen, Oostenrijk).

2.8. De bepaling van de nitriet/Nitraatproductie

de nitriet-en nitraatconcentraties werden gemeten door middel van de colorimetrische Griess-reactie met behulp van nitraatreductase (Nitrate/nitriet Colorimetric Assay Kit Cayman, USA) volgens de instructies van de fabrikant. Serumnitriet / nitraatspiegels werden uitgedrukt als nM / 200 µL.

2.9. Flow Cytometrie analyse van celoppervlak antigenen

PBMC werden aangepast bij concentraties van 1 × 106 cellen/mL en behandeld met colloïdaal zilver bij een concentratie van 17,5 ng / mL, en de platen werden gedurende 72 uur geïncubeerd bij 37°C en 5% CO2 atmosfeer. Daarna werden cellen verzameld door centrifugeren bij 600 g gedurende 10 minuten en een set antilichamen CD3+ FITC/CD8+, PE/CD45+ en PerCP/CD4 APC of een andere set antilichamen CD3+ FITC/CD16+, CD56 PE/CD45 en PerCP/CD19 APC (Bd Multitest IMK Kit) werden toegevoegd en geïncubeerd 15 minuten bij kamertemperatuur in het donker. De erytrocyten werden vervolgens gelyseerd door 450 µL 1x BD FACS™ lysingoplossing toe te voegen en 15 minuten bij kamertemperatuur in het donker te incuberen. De steekproeven waren toen klaar om op cytometer worden geanalyseerd. De overname werd uitgevoerd op Accuri C6 BD instrument met behulp van BD Multiset software met BD Worklist Manager software. Geautomatiseerde gating werd gebruikt voor eenvoudige analyse van elke subset populatie.

2.10. FITC-Dextraan opname

dendritische cellen (DCs) werden gegenereerd uit PBMC en mochten zich hechten aan 0,22 µm met filter afgedekte cultuurkolven (TPP, Duitsland). Na 2 uur bij 37°C werden niet-adherente cellen verwijderd en werden adherente monocyten vervolgens gedurende 5 dagen gekweekt in RPMI-1640 aangevuld met 10% FBS en 800 U/mL rhuGM-CSF (Peprotech, México) en 50 ng/mL IL-4 (Peprotech, México). Daarna werden de cellen behandeld met colloïdaal zilver in concentraties van 17,5 ng/mL en gedurende 72 uur geïncubeerd bij 37°C en 5% CO2 atmosfeer. DCS endocytose werd geëvalueerd door 1 × 106 cellen met 1 mg/mL FITC-Dextran (BD) gedurende 30 min bij 37°C. Na het wassen, werden de cellen geanalyseerd door cytometrie stroom. De controles omvatten buizen geïncubeerd met FITC-Dextran bij 4°C om het endocytische proces te remmen en een basale opname uitgevoerd op het 0-tijdstip. De opname werd gekwantificeerd door FACS-analyse (10.000 cellen per punt) . De levensvatbaarheid werd bepaald door de trypan blue exclusion techniek.

2.11. Statistische analyse

de resultaten werden geëvalueerd met behulp van ANOVA en de mediane cytokinespiegels tussen de behandelingen werden vergeleken met behulp van de Mann–Whitney-test.

3. Resultaten

3.1. Colloïdaal zilver karakterisatie

de karakterisatie van colloïdaal zilver opgelost in water en celkweekmedium werd geanalyseerd met dynamic light scattering (DLS); colloïdaal zilver opgelost in water had een gemiddelde grootte van 100 nm met een polydispersiteitsindex van 0,2; colloïdaal zilver opgelost in celkweekmedium had een gemiddelde grootte van 155 nm en polydispersiteitsindex van 0,23 (figuren 1(a) en 1(b)). SEM-afbeelding toonde deeltjes populatie opgelost in water met deeltjesgrootte tussen 50 en 190 nm (figuren 1 (c) en 1 (d)); colloïdaal zilver opgelost in celkweekmedium vertoonde een combinatie van nanodeeltjes en enkele zilverzouten (figuren 1(e) en 1(f)); De gemiddelde grootte verkregen door DLS correleerde echter met histogram van deeltjes en karakteristieke plasmonresonantie (figuren 1(g), 1(h) en 1(i)). De analyse van colloïdaal zilver stelt voor dat deze oplossing semisferische vorm en heterogene bevolking heeft, gevormd door nanoparticles en cluster gevormd door zilverzouten. Zodra de AgC werd gekarakteriseerd, gingen we verder met het evalueren van de verschillende biologische effecten.

figuur 1

grootteverdeling van colloïdaal zilver. (a) DLS van colloïdaal zilver opgelost in water vertoonde een gemiddelde grootte van 100 nm met een polydispersiteitsindex van 0,2. b) DLS-metingen van colloïdaal zilver opgelost in celcultuurmedium met een gemiddelde grootte van 155 nm en een polydispersiteitsindex van 0,23. (C, d) SEM beeld van deeltjes populaties opgelost in water. (e, f) SEM beeld van colloïdaal zilver opgelost in celkweekmedium. (g, h) Histogram van deeltjes opgelost in water en kweekmedium, respectievelijk. – UV-vis spectra van colloïdaal zilver. J) zilverzouten gevormd in colloïdaal zilver, opgelost in kweekmedium. DLS, dynamic light scattering; SEM, scanning elektronenmicroscopie; en a.u., willekeurige eenheden.

3.2. Bepaling van cellulaire proliferatie en IL-2 productie

eerst werd bepaald of de cytotoxische dosis die eerder in borstkankercellen werd gebruikt, de lymfocyten-of macrofagenfuncties beïnvloedt. De resultaten toonden aan dat colloïdale zilverbehandeling geen significante invloed had op () PBMC-celproliferatie en celtelling, en de behandelingen met mitogenen Con A of PHA significant () de celproliferatie en celtelling verhoogden, vergeleken met de onbehandelde controle; interessant is dat de gecombineerde behandelingen met AgC/Con A of AgC/PHA significant () de celproliferatie en celtelling (figuren 2 en 3) van PBMC verminderden. Vergelijkbare resultaten werden waargenomen door flowcytometrie en fluorescentiemicroscopie met behulp van de fluorescerende kleurstof PKH26 (control (94%), Con A (165%), PHA (156%), AgC (91%), AgC + Con A (80%) en AgC + PHA (77%)) (figuren 3, 4 en 5). Bovendien had AgC-behandeling geen invloed op de IL-2-productie in vergelijking met de controle (15 pg/mL) (), maar een toename van de IL-2-productie werd vastgesteld wanneer PBMC werd gestimuleerd met PHA (176 pg/mL) of Con a (150 pg/mL), en behandelingen met AgC + Con a (15 pg/mL) of AgC + PHA (13 pg/mL) verminderde IL-2-productie () (figuur 4).

Figuur 2

levensvatbaarheid van de cellen van PBMC behandeld met colloïdaal zilver en mitogenen. PBMC (1 × 106 cellen/mL) werden behandeld met Con A (5 µg/mL), PHA (5 µg/mL), AgC (17,5 ng/mL), AgC (17,5 ng/mL) + Con a (5 µg/mL), of AgC (17,5 ng/mL) + PHA (5 µg/mL) en geïncubeerd gedurende 72 uur bij 37°C en 5% CO2 atmosfeer. De levensvatbaarheid van de cellen werd geanalyseerd met een MTT-test. De gegevens geven de gemiddelde ± standaardafwijking van drie onafhankelijke experimenten weer. . AgC, colloïdaal zilver; PHA, fytohemagglutinine; Con a, concanavalin A.

Figuur 3

cellulaire telling van PBMC behandeld met colloïdaal zilver en mitogenen. PBMC (1 × 106 cellen/mL) werden behandeld met Con A (5 µg/mL), PHA (5 µg/mL), AgC (17,5 ng/mL), AgC (17,5 ng/mL) + Con a (5 µg/mL), of AgC (17,5 ng/mL) + PHA (5 µg/mL) en geïncubeerd gedurende 72 uur bij 37°C en 5% CO2 atmosfeer. De celtelling werd geanalyseerd door cytometry stroom. De gegevens geven de gemiddelde ± standaardafwijking van drie onafhankelijke experimenten weer. . AgC, colloïdaal zilver; PHA, fytohemagglutinine; en Con A, concanavalin A.

Figuur 4

cellulaire proliferatie en IL – 2 productie van PBMC behandeld met colloïdaal zilver en mitogenen. PBMC (1 × 106 cellen/mL) werden behandeld met Con A (5 µg/mL), PHA (5 µg/mL), AgC (17,5 ng/mL), AgC (17,5 ng/mL) + PHA (5 µg/mL), of AgC (17,5 ng/mL) + Con a (5 µg/mL) en geïncubeerd gedurende 72 uur bij 37°C en 5% CO2 atmosfeer. De cellulaire proliferatie die op de uitdrukking van pkh26 wordt gebaseerd werd geanalyseerd door cytometry stroom. De IL-2 supernatanten werden geëvalueerd door middel van ELISA-test. De gegevens geven de gemiddelde ± standaardafwijking van drie onafhankelijke experimenten weer. . AgC, colloïdaal zilver; PHA, fytohemagglutinine; Con a, concanavalin A.

(een)

b)

c)

d)

e)

(f)

(g)

(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)

Figuur 5

Cellulaire proliferatie van PBMC werden behandeld met colloïdaal zilver en mitogenen. PBMC (1 × 106 cellen/mL) werden behandeld met A) negatieve controle, B) controle, C) PHA (5 µg/mL), d) Con a (5 µg/mL), e) AgC (17,5 ng/mL), f) AgC (17,5 ng/mL) + PHA (5 µg/mL), of G) AgC (17,5 ng/mL) + Con a (5 µg/mL) en geïncubeerd gedurende 72 uur bij 37°C en 5% CO2-atmosfeer. De cellulaire proliferatie werd geanalyseerd door microscopiefluorescentie. AgC, colloïdaal zilver; PHA, fytohemagglutinine; Con a, concanavalin A.

3.3. Cytotoxisch Effect van AgC op lymfoïde en leukemie kankercellijnen

onze resultaten bevestigden de antiproliferatieve en cytotoxische eigenschappen van AgC op leukemische (Molt-4 en K562) en lymfoom cellijnen (Ramos en L5178y) op een dosisafhankelijke manier (1,75 tot 17,5 ng/mL) () (Figuur 6).

Figuur 6

cel levensvatbaarheid van kankercellijnen behandeld met colloïdaal zilver en mitogenen. K562, Molt-4, Ramos en l5178y kankercellijnen (5 × 103 cellen/put) werden behandeld met verschillende doses AgC en geïncubeerd gedurende 5 uur bij 37°C en 5% CO2 atmosfeer. De levensvatbaarheid van de cellen werd geanalyseerd met een MTT-test. De gegevens geven de gemiddelde ± standaardafwijking van drie onafhankelijke experimenten weer. . AgC, colloïdaal zilver.

3.4. De cytokinebepaling

naast AgC-behandeling had geen invloed op de productie () van IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IFN-γ, IL-17A (0 pg/mL) of TNF-α (5,84 pg/mL), vergeleken met onbehandelde controle. LPS-behandeling als positieve controle leidde echter tot een hoge productie van alle geëvalueerde cytokines (Tabel 1).

3.5. Fenotypering van Celoppervlaktemarkers

onze resultaten toonden aan dat AgC−behandeling geen invloed had op het expressiepercentage van cellulaire populaties CD3+ (79,7%), CD3-CD19+ (10,2%), CD3+CD4+ (52,2%), CD3+CD8+ (33,9%) en CD16+CD56+ (7,6%), vergeleken met de controlegroep () (Tabel 2).

3.6. Peroxynitriet en opname van FITC-Dextraanbepalingen

de colloïdale zilverbehandeling (99%) had geen invloed op de levensvatbaarheid van dendritische cellen (Figuur 7(A)) of de geëvalueerde peroxynitriteniveaus (Figuur 7(b)), maar verhoogde het fagocytosepercentage (Figuur 7(c)), vergeleken met de controle ().

(een)

b)

c)

(a)
b)
c)

Figuur 7

de levensvatbaarheid van de cellen van het menselijk macrofagen, fagocytose, en peroxynitrites productie. Menselijke macrofagen (1 × 106 cellen) werden behandeld met AgC en gedurende 5 uur bij 37°C en 5% CO2-atmosfeer geïncubeerd. (a) de levensvatbaarheid van de cellen werd geanalyseerd met trypan blue assay. (B) macrofagen fagocytose van FITC-Dextran geëvalueerd door flowcytometrie. c) nitraat/nitriet bepaald door Griess-reactie (nitraat/nitriet colorimetrische assay kit); de LPS werd gebruikt als positieve controle. De gegevens geven de gemiddelde ± standaardafwijking van drie onafhankelijke experimenten weer. . AgC, colloïdaal zilver; FITC-Dextran, fluoresceïne-isothiocyanaat-Dextran; en LPS, lipopolysaccharide.

4. Discussie

het is bekend dat verschillende chemotherapeutische middelen die bij de behandeling van kanker worden gebruikt (cyclofosfamide, vinblastine, vincristine, bleomycine en cisplatinum) antiproliferatieve en cytotoxische effecten hebben; maar bij lage doses kunnen zij de immuunrespons stimuleren . Het effect op het immuunsysteem van een stof moet worden getest, omdat eventuele schade in dit systeem de homeostase van het lichaam kan beïnvloeden. In de huidige studie suggereert de analyse van colloïdaal zilver de aanwezigheid van een heterogene populatie van nanodeeltjes en clusters gevormd door zilverzouten, waarschijnlijk voortgekomen uit interacties met eiwitten in volledig cultuurmedium. Het aggregatie-effect van de zilverdeeltjes in biologische vloeistoffen als gevolg van de aanwezigheid van eiwitten en lipiden is gemeld . Daarnaast toonden onze resultaten aan dat AgC (17,5 ng / mL) de productie van IL-2 geïnduceerd door mitogenen kan remmen. Vandaar dat de immunosuppressie geïnduceerd in PBMC gemedieerd kan worden door de remming van IL-2-afgifte. De immunosuppressieve activiteit van sommige geneesmiddelen zoals cyclosporine en azathioprine is bevestigd door de remming van proliferatie van lymfocyten en productie van cytokines (INF-γ, IL-2, RANTES, TGF-β en TNF-α), wanneer lymfocyten worden gestimuleerd door reagentia zoals PHA, Con A of pokeweed mitogen . IL-2 is een autocriene groeifactor voor T-cellen en de productie ervan is selectief geremd door de behandeling met de immunosuppressiva tacrolimus (FK506) of mycofenolzuur . Het is bekend dat immunosuppressiva (corticosteroïden) worden gebruikt voor de behandeling van lymfoïde maligniteiten omdat ze apoptose van kwaadaardige lymfoïde cellen veroorzaken . We hebben de antiproliferatieve en cytotoxische eigenschappen van AgC (155 nm) (doses variërend van 1,75 tot 17,5 ng/mL) op leukemische en lymfomateuze cellijnen aangetoond, ondanks eerdere rapporten die vermeldden dat zilverdeeltjes in het bereik van 10-100 nm diameters cytotoxischer zijn dan deeltjes van grotere grootte . Het is noodzakelijk om het mechanisme van selectiviteit tussen PBMC en myeloïde en lymfoïde oorsprong kankercellen te kennen en toekomstige studies moeten worden ontwikkeld op het gebied van receptorgemedieerde apoptose zoals besproken door “Vega en de Maio, 2005 .”Vanwege glucocorticoïd resistentie in lymfoom behandeling, de tumorcellen blijven hun uitbreidingen in de aanwezigheid van glucocorticoïden . Om deze reden zou AgC een nieuwe klinische optie kunnen bieden die overwogen moet worden, maar er zijn meer studies nodig. Aan de andere kant wijzen onze resultaten erop dat de aanmaak van cytokinen en het percentage oppervlaktemarkers uitgedrukt door T -, B-en NK-cellen niet worden beïnvloed in reactie op AgC (17,5 ng/mL), in tegenstelling tot andere immunosuppressoren zoals rapamycine of soraphen, waarvoor het immunosuppressoreffect wordt toegeschreven aan de interferentie van een signaalweg en het metabolisme van vetzuren . Verder is er bewijs dat immuunsysteemcellen kunnen worden geactiveerd in reactie op biomaterialen hoewel MHC/peptide/TCR veroorzaakte signaalwegen niet worden verwacht. Nochtans, kunnen alternatieve noncognate wegen tot activering leiden door glycoproteïnen op het plasmamembraan te kruisen zoals mitogen veroorzaakte lymfocytenproliferatie . Wat peroxynitriet betreft, induceerde colloïdaal zilver (17,5 ng/mL) hun productie niet, maar de fagocytose-activiteit nam waarschijnlijk toe door de opname van colloïdaal zilver op een niet-specifieke manier. Andere auteurs hebben beschreven dat zilveren nanoparticles in een waaier van 5, 10, 15, en 100 nm de reactieve zuurstofspecies verhogen die de mitochondrial functie beà nvloeden en dat fagocytose van zilveren deeltjes celcyclus in de S-fase blokkeert en ontstekingssignalerend door generatie van reactieve zuurstofspecies bevordert, door afscheiding van TNF-α wordt gevolgd, die de levensvatbaarheid van cellen van de rattenlever verminderde .Concluderend kan worden gesteld dat deze studie de nontoxiciteit van colloïdaal zilver ten opzichte van immuunsysteemcellen aantoont en het vermogen ervan om de immuunrespons te beïnvloeden door de celproliferatie te verminderen wanneer dit wordt gestimuleerd met mitogenen, hetgeen erop wijst dat colloïdaal zilver kan worden beschouwd als een immunosuppressivum, maar er moeten meer studies worden uitgevoerd om de werkzaamheid en het werkingsmechanisme ervan vast te stellen.

concurrerende belangen

de auteurs verklaren dat er geen belangenconflict is met betrekking tot de publicatie van dit document.

Dankbetuigingen

deze studie wordt ondersteund door Laboratory of Immunology and Virology, Faculty of Biological Sciences, Autonomous University Of Nuevo Leon, San Nicolás de los Garza, NL, Mexico, in samenwerking met “Red Temática de Inmunología en Cáncer y Enfermedades Infecciosas” met Register no. 253053, CONACYT.