Klinische prestaties van Roche Cobas 4800 HPV-Test | Jiotower

TEXT

humaan papillomavirus (HPV) is een van de meest voorkomende seksueel overdraagbare virussen wereldwijd en draagt in belangrijke mate bij aan kanker, veroorzaakt in Europa jaarlijks bijna 60.000 nieuwe gevallen van kanker (1) en leidt tot de ontwikkeling van baarmoederhalskanker bij vrouwen. HPV16 en HPV18 zijn het meest kankerverwekkend (2, 3), aangezien ongeveer 70% van alle baarmoederhalskanker met HPV16 of hpv18-infecties (4) aanwezig is. Bijna 30% van de baarmoederhalskanker wordt gemist door de eerste cervicale cytologie screening (5), dus nauwkeurige en objectieve tests voor HPV-geassocieerde baarmoederhalskanker die gevoeliger Moleculaire technieken gebruiken zijn noodzakelijk om effectieve preventie en behandeling te bieden om toekomstige risico ‘ s en incidentie van baarmoederhalskanker te verminderen.

de Roche Cobas 4800 HPV-test (Cobas) is een nieuwe moleculaire methode gebaseerd op real-time PCR (RT-PCR) (6, 7), met een volledig geautomatiseerd systeem dat snelle en efficiënte monsterverwerking mogelijk maakt. Cobas kan HPV16, HPV18, 12 andere HPV ‘s met een hoog risico detecteren (hrhpv’ s) (HPV31, -33, -35, -39, -45, -51, -52, -56, -58, -59, -66, en -68, als een gepoold resultaat), en de β-globine controle onafhankelijk in dezelfde PCR. Het primaire doel van onze studie was om de technische en klinische prestatiekenmerken van Cobas te evalueren. Cervicale monsters van 6.056 vrouwen die werden doorverwezen naar de afdeling pathologie van de Icahn School Of Medicine op Mount Sinai voor routinematig onderzoek van cervicale laesies tussen November 2011 en februari 2012 werden verzameld in een vloeistof-gebaseerde cytologie medium (Conserveercyt; Hologic, Marlborough, MA) en bewaard bij 4°C tot gebruik.

honderdtachtig monsters werden getest op hrhpv-genotypen met zowel de Roche Cobas 4800 HPV-test als de Digene Hybrid Capture 2 (HC2) HRHPV-DNA-test (Tabel 1), waarbij eventuele discrepanties werden opgelost met behulp van de Linear Array (LA) HPV-genotyperingstest (Roche Molecular Systems, Pleasanton, CA) (8). Volgens de Chi-kwadraattest van Pearson was er een significant verschil in het aantal positieve en negatieve monsters dat door de twee HPV-tests werd geïdentificeerd (P < 0,001). De concordantie tussen de twee tests was echter statistisch sterk, met een akkoord van 88,33% (P = 0,0218) en de Kappa-coëfficiënt van Cohen van 0,767 (95% betrouwbaarheidsinterval , 0,674 tot 0,860; p < 0,001), waarbij 95% betrouwbaarheidsintervallen van de kappa-waarden werden afgeleid uit een binomiale verdeling.

In de afwijkende monsters, de LA HPV-test gedetecteerd laag-risico HPV (lrHPV) genotypen in 50% (2/4) van de monsters die werden HC2 positieve en Cobas negatief en in 13,33% (2/15) van de monsters die HC2 negatief en Cobas positief waren. HPV53 werd gevonden in twee monsters die HC2-positief en Cobas-negatief waren, wat suggereert dat de sondes in de Digene-kit kruis reageerden met dit HPV-genotype. Deze constatering is niet verwonderlijk, aangezien de kruisreactiviteit van de HC2-test met lrhpv-genotypen, in het bijzonder HPV53, eerder werd waargenomen (9). Het gevolg van kruisreactiviteit van het lrhpv-genotype in een HPV-test is een verhoogd aantal vals-positieve resultaten. Dit zou kunnen leiden tot overonderzoek en overbehandeling door middel van follow-up testen van vrouwen die alleen lrhpv genotypes bezitten en in feite een laag risico hebben op het ontwikkelen van baarmoederhalskanker. In twee HC2-negatieve / Cobas-positieve monsters werden HPV62 en HPV89 (CP6108) gedetecteerd in beide monsters en HPV42, HPV54, HPV55, HPV61, HPV70 en HPV84 werden gedetecteerd in een van de monsters, wat erop wijst dat gemengde HPV-infectie leidt tot vals-positieve resultaten door de cobas HPV-test.

de LA HPV-test detecteerde hrhpv-genotypen in geen van de monsters die HC2-positief en Cobas-negatief (0/4) waren en in 80% (12/15) van de monsters die HC2-negatief en Cobas-positief waren. De HC2-test kon geen hrHPV in deze monsters detecteren, wat erop wijst dat de HC2-test meer hrhpv-genotypes miste dan de Cobas-test, wat betekent dat Cobas een potentieel effectievere screeningtest is vanwege een betere gevoeligheid en nauwkeurigheid. HPV werd daarentegen niet gedetecteerd door de la HPV-test in 6,67% (1/15) van de HC2-negatieve/Cobas-positieve monsters. In het algemeen was het verschil in de detectie van hrHPV tussen HC2-en Cobas-tests echter nog steeds statistisch onbeduidend (χ2 = 2,901, P = 0,0885).

achtenzestig monsters werden vervolgens gebruikt om de reproduceerbaarheid van de cobas HPV-test te bepalen. De reproduceerbaarheid tussen de initiële en herhalingstests, zoals berekend met een standaard 2-bij-2 contingency table, was 93,55%; de kappa-coëfficiënt tussen de resultaten van de eerste en tweede ronde van Cobas-tests was 0,869 (95% BI, 0,744 tot 0,993; P < 0,001). De sterkte van deze overeenkomst wordt als zeer goed beschouwd, wat suggereert dat de assay zeer betrouwbaar is.

honderd zevenentachtig monsters werden getest met de Cobas HPV-test om het verschil in HPV-detectie te bepalen tussen pre-en post-quoted monsters. Slechts 7 Monsters kwamen niet overeen, met een percentage van 3,74% (95% BI, 1,02% tot 6,46%). Uit statistische analyse bleek dat het verschil tussen voor-en na-quoteerde monsters niet significant was (χ2 = 0,233, P = 0,36290). Aangezien er geen toename in het HPV-positieve percentage werd waargenomen voor en na het cytologieproces (prealiquot versus postaliquot), is kruisbesmetting van specimens tijdens de cytologieverwerking uiterst zeldzaam. HPV het testen na cytologie kan workflow beduidend verbeteren en onnodige aliquoting verminderen wanneer een reflex HPV-test voor abnormale cytologie wordt bedoeld.

ten slotte werden 5.621 monsters getest met behulp van de cobas HPV-test om de effecten van vortexing en swirling (vóór Cobas-test) op failure rates te bepalen. Onder 1.380 steekproeven die door vortexing worden verwerkt, was het mislukkingstarief 4.57% (95% BI, 3,65% tot 5,91%). Bij 4.241 door wervelingen verwerkte monsters daarentegen was het faalpercentage 1,16% (95% BI, 0,84% tot 1,48%). De chi-kwadraattest van Pearson bracht aan het licht dat de verschillen in faalpercentages tussen vortexed en zacht swirled monsters zeer significant waren (χ2 = 59.983, P < 0,0001), waarbij voorzichtig swirling werd aanbevolen om het faalpercentage van Cobas te verlagen.Concluderend kan worden gesteld dat de cobas 4800 HPV-test een grotere mate van gevoeligheid en specificiteit toonde bij het detecteren van hrhpv-genotypen dan de Digene HC2 hrhpv-test. De cobas-test had ook een lagere mate van kruisreactiviteit met lrhpv-genotypen dan de HC2-test, zoals blijkt uit de minder vals-positieve gevallen. Het verschil in algemene prestaties tussen deze twee tests is echter statistisch niet significant.