Controle de genes para conjugative de transferência de plasmídeos e outros elementos móveis

5.2 Ampla host range plasmídeos

5.2.1 Estafilocócicas plasmídeos

Alguns Estafilocócicas plasmídeos são 40-60 kb em tamanho e transferência com baixa frequência (104-106 transconjugants por doador) em superfícies sólidas . o pGO1 (52 kb) que codifica a resistência aos aminoglicosidos, trimetoprim e compostos de amónio quaternário serve de modelo para o estudo da organização genética da região de transferência desses plasmídeos . A região de transferência conjugativa foi localizada por mutagénese transposónica . A sequência de ADN e a organização transcritional da região de transferência (trs) identificaram 14 orfs numa região de 14 kb que são susceptíveis de ser genes funcionais (trsA-trsN). a trsA-trsM é transcrita na mesma direcção num fio, enquanto a trsN é transcrita de forma divergente e o seu promotor sobrepõe-se parcialmente à trsA. Um clone contendo trs sozinho não pode ser transferido independentemente e nenhum oriT candidato foi encontrado dentro ou contíguo para trs. Para a conjugação, é essencial um orf adicional, designado nes (enzima de Staphylococcus), localizado a 13,5 kb 5′ de trs . A sua sequência de aminoácidos prevista mostra semelhança com as relaxases conhecidas. 100 bp 5′ a nes encontra-se numa sequência oriT idêntica à oriT de plasmídeos conjugativos ou mobilizáveis: RSF1010, pTF-FC2, R1162, pSC101 e pIP501. Nes pode gerar um único corte na oriT. A localização de oriT e nes longe do aglomerado trs é única nos plasmídeos estudados e pode refletir a recente inserção de DNA estranho.

TrsN reprime a transcrição de genes essenciais para a transferência conjugativa, ligando-os às regiões 5′ aos seus locais de início da tradução . A TrsN purificada liga o ADN e retarda progressivamente os fragmentos que contêm promotores para a trsL, trsA e trsN. O excesso de TrsN diminuiu a actividade da β-galactosidase numa fusão transcritorial trsL-lacZ e diminuiu a frequência de conjugação do pGO1. Inversamente, a frequência de transcrição e conjugação aumentou na presença de trsL alvo em excesso. a actividade da β-Galactosidase também diminuiu nas fusões de trsG, trsI e trsK que são transcritas do promotor que precede o trsD, apesar de não haver ligação do TrsN a este fragmento do promotor. Isto sugere um padrão complexo de transcrição que ainda não foi totalmente trabalhado. nes is independent of trsN regulation and produces abundant levels of transcripts, whereas most of the trs transcripts are low due to regulation by trsN.

TrsN parece modular em vez de desligar e na expressão genética, de modo que os produtos são feitos no momento e nível apropriados. Isto sugere a existência de vários loops de feedback complexos e que o próprio trsN pode ser regulado. Não é claro se a trsN responde a produtos do gene trs ou se existem sinais externos à célula que desencadeiam ou modulam funções conjugativas.

a sequência nucleotídica completa da região de transferência de pSK41 foi recentemente relatada . traH codifica um produto de lipoproteína, cujos últimos oito resíduos da sequência de sinais N-terminal partilham similaridade da sequência de aminoácidos com o peptídeo associado ao mecanismo de conjugação induzida pela feromona de Enterococcus faecalis, sugerindo uma possível função deste peptídeo como feromona. TraH é reconhecido como feromona pelas células Enterococcus faecalis que abrigam o plasmídeo pAD1 , por isso também pode desempenhar um papel na transferência de DNA dirigida pelo pSK41.

5.2.2 plasmídeos estreptocócicos

plasmídeo conjugado de largo espectro estreptocócico (30.2 kb, conferindo resistência ao macrólido, à lincosamida e à estreptogramina, bem como ao cloranfenicol), codifica duas regiões envolvidas na proficiência por conjugação, identificadas por mutagénese por transposon . A região A contém um sítio oriT funcional semelhante a oriTs de bactérias Gram-negativas e seis quadros de leitura abertos contíguos (orf1–6) imediatamente a jusante deste sítio oriT. o orf1 mostrou semelhança com as proteínas da relaxase plasmídea Gram-negativas (gene MobA de RSF1010 e gene MobL de pTF-fc2), mas o orfs2–6 foi único. Além disso, o orfs3–6 foi capaz de complementar mutações em trans, enquanto o orf2 não pôde. Assim, apesar das semelhanças em oriT e relaxase, a singularidade de orfs2–6 e seus produtos putativos sugerem que pode haver diferenças fundamentais entre sistemas de transferência de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas.

6 transposões Conjugativos

transposões Conjugativos combinam características de transposões, plasmídeos e bacteriófagos . Eles podem excisar e integrar em DNA como transposons, embora por um mecanismo diferente do bem estudado Tn5 e Tn10: transpõem através de intermediários circulares covalentemente fechados e não duplicam o local-alvo na integração no ADN. A transferência conjugativa também ocorre através de um intermediário de transferência covalentemente fechado, em que se assemelham a plasmídeos . No entanto, a sua excisão e integração assemelha-se à excisão e integração de bacteriófagos temperados e algumas das integrases codificadas mostram similaridade de sequência com os membros da família lambda integrase . Eles são encontrados em bactérias Gram-positivo e Gram-negativo. Os principais tipos são descritos abaixo.

6. 1 Tn916

Tn916 (18.5 kb) foi encontrado em E. faecalis (gram-positivo), bem como em espécies Gram-negativas como Neisseria e Kingella, e a transferência entre estas espécies foi demonstrada. Ele carrega o mesmo gene Tcr, tetM, que codifica um tipo de proteína de proteção ribossoma, como Tn5253 (60 kb), encontrado em Streptococcus pneumoniae . A região essencial para a transferência do Tn916 foi mapeada e sequenciada . Nenhum dos produtos preditos desta região tem similaridade significativa com as proteínas sexuais pilus de plasmídeos conjugativos e como o número de genes é pequeno, este sistema de transferência pode ser mais simples do que o de F ou RK2 e pode não ter um pilus sexual. Um pequeno fragmento de Acção cis que pode mobilizar um plasmídeo não transferível quando um transposon intacto está presente no trans, e deve, portanto, codificar oriT, continha quatro sequências semelhantes a RP4 ou f oriTs. Uma orf na região de transferência mostrou semelhança significativa com a proteína de mobilização de MbeE do ColE1 . Assim, o DNA de cadeia simples pode ser transferido durante a conjugação.

a transferência de Tn916 é estimulada pela tetraciclina 10-100 vezes . Este pode ser o resultado indirecto da resposta ao stress induzida por antibióticos. No entanto, como int e xis estão localizados a jusante da tétm, a estimulação da transcrição tetM pela tetraciclina pode resultar em aumento da leitura de int e xis, o que pode resultar em aumento da frequência de transposição. Um possível gene regulatório, traA, está localizado entre tetM e int / xis . Sugere-se que existe um baixo nível de transcrição constitutiva do promotor a montante da traA e que a TraA é um activador transcritional que regula a sua própria transcrição e a transcrição xis-Tn, bem como genes de conjugação. Desta forma, a transposição e, por conseguinte, a transferência indirecta poderiam estar sob duplo controlo, tal como observado para os genes de transferência de plasmídeos Ti.6 .2 transposões Conjugativos de anaeróbios Gram-negativos

em anaeróbios Gram-negativos, especialmente Bacteroides, foi encontrado um grupo de transposões completamente independente do Tn916. Eles são muito maiores: 65 kb a mais de 150 kb . Como o Tn916, têm uma transferência circular intermédia . Podem aplicar impostos especiais de consumo e mobilizar elementos integrados não interligados (ver Secção 6.4). A maioria deles possuem um tipo de proteção ribossômica do gene TCR tetQ e possuem um sistema regulatório complicado que detecta tetraciclina e controla funções de transferência. Duas famílias são conhecidas: Tcr ERL e Tcr Emr 78539.

a região de Bacteroides transposon Tcr EMR DOT, necessária e suficiente para a transferência conjugal, foi localizada num segmento de 18 kb . A região oriT está no meio do transposon . A capacidade de mobilizar um plasmídeo em cis sugere que após um nick ter sido introduzido em oriT, um único fio é transportado através do poro de acasalamento. O oriT não tem similaridade de sequência com oriTs de plasmídeos conjugais de E. coli ou as extremidades do ADN-T. Além disso, os genes que codificam proteínas de transferência estão localizados a pelo menos 3 kb da região oriT. A orf adjacente a oriT codifica uma proteína RDR RteC, que controla a expressão dos genes tra.

exposição curta de Bacteroides dador portador de Tcr EMR DOT a baixos níveis de tetraciclina estimula a auto-transferência em 10 000 vezes . Esta estimulação não é provavelmente devida ao stress causado pela inibição da síntese proteica da tetraciclina, uma vez que o análogo não tóxico clortetraciclina estimula também a transferência. Tetraciclina estimula 20 vezes a transcrição do operão contendo tetQ e genes reguladores rteA e rteB(Fig. 6) . RteA tem similaridade de sequência de aminoácidos com a proteína sensor de dois sistemas reguladores componentes , mas seu papel no controle de transferência não é estabelecido .

Figura 6

controlo dos genes de transferência de transposões conjugativos. A expressão dos genes de transferência é desligada por um repressor ainda não identificado. Após adição de antibiótico indutor, a rteA e a rteB são ligadas. Isto, por sua vez, liga o rteC. A combinação destes elementos positivos contrasta a ação do repressor de uma forma que não é totalmente compreendida. Os genes que controlam são mostrados como negros, mob / tra como cinzentos. As setas horizontais indicam unidades de transcrição.

Figura 6

controlo dos genes de transferência de transposões conjugativos. A expressão dos genes de transferência é desligada por um repressor ainda não identificado. Após adição de antibiótico indutor, a rteA e a rteB são ligadas. Isto, por sua vez, liga o rteC. A combinação destes elementos positivos contrasta a ação do repressor de uma forma que não é totalmente compreendida. Os genes que controlam são mostrados como negros, mob / tra como cinzentos. As setas horizontais indicam unidades de transcrição.

RteB tem similaridade de sequência de aminoácidos com a proteína activadora de dois sistemas componentes e assim pode funcionar com RteA. É essencial para a transferência e activa o rteC, um gene a jusante . Parece também para agir como antirepressor para combater o efeito de uma ainda não identificados repressor, que normalmente impede a transferência de genes de ser expresso : a transferência região de Tcr Em PONTO, clonado na ausência de ambos rteABC e o putativo repressor, pode transferir constitutivamente. O RteC é essencial para a auto-transferência, mas não é necessário para a mobilização de plasmídeos co-residentes. Isto sugere que o RteC actua como um anti-compressor para controlar a expressão de genes relaxossomas, e/ou genes essenciais para a excisão e a circularização do transposon conjugativo .

parece improvável que esta resposta complexa à tetraciclina possa ter evoluído no tempo desde o primeiro uso clínico deste antibiótico. Tetraciclina produzida na natureza por actinomycetes é pouco provável que contribua para a evolução deste sistema porque os dois organismos vivem em nichos diferentes. Outra possibilidade é que tetraciclina não é o indutor natural, mas se assemelha a um composto fenólico vegetal que é o indutor real. Como Bacteroides conjugam-se apenas em superfícies sólidas, sentir a presença de plantas pode sinalizar a presença de uma superfície adequada para acasalamento .

6.3 o primeiro transposon conjugativo em Enterobacteriaceae

CTnscr94 é um grande transposon (100 100 kb) conjugado em Enterobacteriaceae que se integra de forma independente em dois locais específicos de ligação ao cromossoma de E. coli. Um dos locais de apego foi identificado dentro de pheV, o gene estrutural para tRNAphe. O transposon codifica uma via de fermentação da sacarose dependente do PTS. Parece ser o primeiro transposon conjugado identificado em bactérias entéricas. Anteriormente havia apenas um relatório de um transposon conjugativo putativo, R391, encontrado em Proteus rettgeri, mas não foi bem documentado.Mobilização de segmentos de ADN integrados não ligados por Bacteroides transposões conjugativos: Nbus

NBUs, unidades Bacteroides não-replicantes (10-12 kb), são elementos integrados que compartilham alta homologia em uma região interna contendo genes de mobilização (mob) e oriT . A excisão e a circularização do NBUs são desencadeadas pelo RteB fornecido por transposões conjugativos . A expressão do rteB é induzida por baixos níveis de tetraciclina, de modo que a presença de um transposão conjugativo e a exposição à tetraciclina são necessárias para a excisão e mobilização do NBUs. NBUs codificam apenas uma única proteína de mobilização capaz de se ligar a oriT, roubar e iniciar a transferência de uma única cópia encalhada através de um poro de acasalamento fornecido pelo transposon conjugativo . O local-alvo da NBU1 está localizado na extremidade 3′ de um gene tRNAleu . O gene integrase, intN1, de NBU1 é expresso constitucionalmente. As formas circulares de NBU são também mobilizadas pelos plasmídeos IncP R751 e RK2 . Podem ser transferidos de Bacteroides para E. coli e não especificamente integrados no genoma E. coli .

6.5 As conclusões sobre transposões conjugativos

transposões Conjugativos contribuem para a disseminação de genes de Resistência a antibióticos em bactérias clinicamente importantes como Bacteroides e Cocci Gram-positivo. A transferência de muitos transposões conjugativos Bacteroides é estimulada por baixas concentrações de antibióticos. Assim, os antibióticos não só selecionam estirpes resistentes, mas também estimulam a transferência de genes de resistência. Assim, o uso de antibióticos na concentração subletal pode ter um efeito maior na microflora residente do que se pensava anteriormente.

7 outros sistemas

uma série de outros sistemas são notáveis por uma variedade de razões, embora poucos detalhes moleculares estejam disponíveis sobre mecanismos de controle. Os plasmídeos de polegada são bastante heterogêneos consistindo de pelo menos quatro subgrupos: IncHI1, IncHI2, IncHI3 e IncHII. A genética é melhor compreendida para o plasmídeo IncHI1 R27, que é de interesse porque tem uma temperatura óptima de 26-30°C e pode fornecer informações relevantes para os plasmídeos do solo e ambientes aquáticos que geralmente têm temperaturas óptimas muito mais baixas do que os organismos entéricos .

a região de transferência do plasmídeo IncI1 R64 (122 kb de S. typhimurium) é o maior caracterizado até à data, cobrindo 54 kb. A região não é simplesmente funções de transferência contíguas, uma vez que genes hereditários estáveis também foram encontrados dentro do segmento . Ele codifica dois tipos de pilus, bem como funções auxiliares como a primase. As espessas pili produzidas são necessárias em todas as condições, enquanto as pili finas são apenas necessárias em matagens líquidas onde os pares de acasalamento são mais susceptíveis de se desmoronar devido ao movimento do doador e receptor. Com base na sequência completa da região pil, propõe-se que os Pili finos pertençam à família do tipo IV, que são mais geralmente associados com a ligação de bactérias patogénicas às células eucarióticas . Existem várias versões do gene pilV codificando o pilin para o pilus fino. Um mecanismo de controle incomum permite a expressão sequencial de diferentes genes pilV . Denominado shufflon, os rearranjos de DNA são promovidos por uma série de sete repetições de 19-bp que são atuadas por uma recombinase específica do local da família integrase . As inversões nestes sites permitem Todas as combinações possíveis dos quatro segmentos diferentes, três dos quais têm dois C-termini alternativos codificados a partir de cada extremidade (A/A’, B/B’, C/C’). O quarto segmento codifica apenas um possível c-terminus. As diferentes proteínas pilus permitem a invasão de diferentes espécies hospedeiras para que estes rearranjos controlem a transferência para hospedeiros específicos. R64 mostra regulação positiva através de dois polipeptídeos putativos, TraB e TraC, que são necessários para a expressão de uma série de funções associadas à transferência, incluindo o gene para o fino pilus e o gene primase . A região oriT é constituída por oriT e dois genes, nikA e nikB, que são transcritos a partir de um promotor na região oriT e são, portanto, autoregulados pelo relaxossoma montado pela NikA e pela NikB .Como os plasmídeos IncP, os plasmídeos IncN parecem ser sempre proficientes em transferência. Os genes necessários são codificados numa região de 12 kb, compreendendo 14 genes tra: três para a montagem relaxosoma e 11 para Mpf, sendo este último semelhante aos genes IncP trb, os genes Ti virB e os genes Bordetella ptl . A proficiência de transferência sem sobrecarregar excessivamente o hospedeiro é conseguida por dois genes repressores, korA e korB, que fazem parte da região tra, Que é organizada como operões divergentes de um par de promotores estreitamente espaçados entre o operon korB-kikA e o operon traL-korA-tractneofg. Estes dois promotores são organizados como promotores divergentes, regulados por um único site de ligação KorA/KorB. Um terceiro promotor sozinho a montante do traN é também regulado por um único local de ligação KorA/KorB. Existe, portanto, uma regulação autógena dos genes para o poro de acasalamento conjugal. Nenhuma regulação é observada a menos que ambos os genes sejam funcionais, o que fornece um meio de coordenar ambos os operões, mas não se sabe se ambas as proteínas ou apenas uma se ligam ao DNA. KorB parece consistir de uma duplicação direta de um polipeptídeo com semelhança com a família HN-S de proteínas reguladoras semelhantes a histona . A regulação do sistema relacionado codificado por plasmídeos IncW não foi estudada extensivamente, mas sabe-se que TrwA, uma das três proteínas relaxossomas, fornece um circuito de controle autógeno por ligação perto de oriT, que também é o local para o trwAp. TrwA mostra semelhança de sequência com a proteína TraJ de plasmídeos IncP, mas tem um motivo de ligação de DNA semelhante ao da proteína TraY de F.

um número de pequenos plasmídeos mobilizáveis também reforçam o princípio do controle autógeno dos genes para proteínas relaxossomas. A região mob da ampla gama de hospedeiros IncQ plasmid RSF1010 é englobada em uma região de 1,8-kb e codifica três proteínas que são necessárias para o plasmid explorar o sistema de transferência IncP. Os genes de MobA e MobB sobrepõem-se enquanto MobC é codificado divergentemente na direção oposta . Os promotores destes genes estão fortemente agrupados na região oriT, dois disparando contra mobAB e um contra mobC. A ligação das proteínas relaxossomas ao oriT provoca regulação autógena. Mutantes na região terminal de mobA ou em mobC causam derepressão. A proteína MobB também influencia a proporção do plasmídeo que existe no relaxosoma e o período de tempo que o plasmídeo permanece neste estado e, portanto, é um determinante da frequência de transferência . A região mob do plasmídeo pTF-FC2 de 12,4-kb de Tiobacillus ferrooxidans apresenta semelhanças notáveis com a região oriT dos plasmídeos IncP, tanto em termos da organização de operões divergentes transcritos de promotores na região oriT como em termos de similaridade sequencial das proteínas relaxossomas . Dados recentes confirmaram a existência de circuitos autógenos que controlam a expressão do gene mob e demonstraram a importância da proteína Hospedeira IHF na determinação da frequência de mobilização . Por outro lado, a região do mbe do ColE1, que é muito semelhante a outros plasmídeos produtores de colicina, como o ColK e o ColA, não mostra qualquer evidência de auto-regulação . oriT mapeia a montante dos genes mbe, separados por ele pelo gene rom e assim a existência de tais circuitos criaria uma organização complexa.

8 conclusões

a ideia de que os sistemas de transferência evoluíram através da cooperação de dois tipos de funções: os sistemas de Nico/replicação de ADN e os sistemas de fusão celular é geralmente apoiada por um levantamento dos exemplos que foram estudados até à data. Onde os genes de transferência são encontrados em pequenos aglomerados ao invés de um único bloco, os genes agrupados geralmente têm uma função comum. Pode prever-se um cenário de recrutamento de genes por cassete funcional, mesmo que a função original do bloco genético não fosse promover a transferência conjugativa. O IncI1 plasmídeo parece um bom exemplo disso, pois existem tipos diferentes de blocos para oriT/relaxosome genes, bem como os dois tipos de pilus – a classificar o que é necessário para promover a célula de fusão e a classificação que fornece um meio de puxar bactérias juntas quando elas estão flutuando livremente em planctônicas de suspensão.

um bloco de genes que foi claramente adquirido como uma unidade já montada é as funções mpf encontradas em IncP, Ti, IncN e IncW, mas relacionadas com o bloco ptl de B. pertussis e o aglomerado de genes cag de Helicobacter pylori. Houve alguns rearranjos de genes que podem ter significância regulamentar ou funcional, por exemplo a justaposição do homólogo virB11 ao início do operão nos plasmídeos IncP e no sistema ti plasmid Tra. A regulação foi marcada na frente desta região nos plasmídeos IncP através da adição de trbA, bem como a aquisição de um promotor regulado pela KorB. No caso do sistema IncN, um dos dois genes regulatórios, korA, está embutido entre os dois primeiros genes do operão e não é encontrado em operões relacionados. O recrutamento ou a perda dos genes reguladores podem ser melhor compreendidos quando um maior número de sistemas relacionados tiver sido sequenciado.

o sistema de regulação mais simples encontrado é o da regulação autógena, no qual genes dentro dos blocos de funções de transferência desligam a expressão dos genes uma vez que o aparelho de transferência é sintetizado. Os plasmídeos com tais sistemas parecem estar constantemente prontos para a transferência e os sistemas até agora estudados tendem a ser bastante amplos na sua gama de hospedeiros. Talvez a disponibilidade constante de novos anfitriões fornece ao plasmídeo uma razão para estar perpetuamente pronto para a transferência. A montagem de tais circuitos autógenos é claramente lógica no caso de genes para proteínas relaxossomas transcritas a partir de promotores na região oriT quando estas proteínas se reúnem para formar o relaxossoma. É menos claro como um circuito autógeno que controla os genes mpf necessários para a montagem pilus pode sentir quando um número apropriado de pili funcionais estão presentes.

o próximo nível de regulação é o exposto por plasmídeos semelhantes a F nos quais os genes são normalmente desligados. A possibilidade de os genes serem ligados é pequena, pelo que é necessário um longo período de tempo ou uma grande população para garantir o aparecimento de bactérias transferíveis. Se essa bactéria encontrar um receptor, então a transferência ocorre e o receptor permanece proficiente por algum tempo. Isto permite uma propagação exponencial através de uma nova população de bactérias plasmídeas negativas. Tal sistema de regulação pode ser apropriado para bactérias que vivem no intestino de mamíferos, onde apenas ocasionalmente as bactérias encontram grandes novas populações de potenciais receptores. O ambiente do intestino pode ser demasiado rico com uma infinidade de espécies de bactérias para permitir a sinalização por um caminho semelhante ao encontrado no Agrobacterium. A perpetuação do estado proficiente de transferência pelo próprio processo de transferência parece ser uma boa maneira de controlar a expressão do gene de transferência em resposta à presença de receptores apropriados. Uma estratégia alternativa para alcançar o mesmo fim é representada pelos plasmídeos sensíveis à feromona em que potenciais receptores produzem uma feromona que estimula a produção de substância agregação. O plasmídeo em si, na verdade, desliga a produção interna da feromona a que responde, de modo que ele só muda em genes de transferência quando há receptores apropriados presentes.

os outros sistemas pesquisados mostram uma estreita integração de fenótipo e frequência de transferência. Os plasmídeos Ti respondem tanto aos potenciais receptores, à densidade populacional do dador como à disponibilidade de nutrientes. A transferência dos transposões conjugativos é especificamente estimulada pelos antibióticos aos quais conferem resistência. Uma vez que um sistema de regulamentação evoluiu para lidar com, por exemplo, a presença de um poluente ou um antibiótico, genes que vinculam a atividade destes processos de transferência para ambientes onde os genes são selecionados tendem a ter uma vantagem, porque eles irão se replicar e se espalhar, quando o ambiente é um direito, mas vai minimizar o seu efeito sobre o seu anfitrião quando as condições indutoras de são ausentes.

o conhecimento detalhado que está acumulando agora nos permite apreciar quais fatores são susceptíveis de estimular ou limitar a propagação de plasmídeos. Certos tipos de antibioticoterapia podem promover a propagação da resistência para outros membros de uma comunidade mista e deixar um problema potencial para o futuro, mesmo se o efeito de curto prazo é reduzir a infecção. Desenvolver telas para compostos que resultam em derepressão de genes de transferência pode levar a formas de fazer a transporte plasmídeo uma desvantagem. Em alguns casos extremos, por exemplo, os plasmídeos IncP, a expressão do gene de transferência excessiva tem sido mostrada como letal, de modo que tais agentes podem ter um efeito dramático na sobrevivência de bactérias plasmídicas positivas. Os problemas atuais com características transmitidas por plasmídeos podem levar à consideração de estratégias antibacterianas que teriam sido descartadas anos atrás. Esperamos que o material coberto nesta revisão possa ajudar a desencadear esses novos conceitos.

agradecimentos

M. Z. é apoiado por uma subvenção do projecto Wellcome Trust (046356/Z). Outros trabalhos sobre plasmídeos IncP no laboratório dos autores foram apoiados pelo UK Medical Research Council, O Wellcome Trust e o BBSRC. Reconhecemos a ajuda de muitos colegas para o fornecimento de informações e sugestões úteis.

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