Activitatea clastogenă a 2-clorodeoxiadenozinei în celulele somatice de mamifere
mutageneză
articol de cercetare
activitatea Clastogenă a 2-clorodeoxiadenozinei în celulele somatice de mamifere
Gilmara Ausech AntonucciI; Ecaterina he TakahashiI; ii
Iuniversitatea din S-A Paulo, Faculdade de Medicina de Ribeir-a Preto-a, Departamento de gen-a-Tica, Ribeir-a-Tico-a-Tica, SP, Brazilia.
IIUniversidade de la S-A Paulo, Facultatea de filosofie, științe și Litere a Ribeir-ului Preto, Departamentul de Biologie, Ribeir-ului Preto, SP, Brazilia.
corespondența
rezumat
a analogului de bază 2-clorodeoxiadenozină (2-CdA) utilizat în tratamentul afecțiunilor limfoproliferative cronice rezistente și avansate este citotoxic atât pentru limfocitele care se divid, cât și pentru cele care nu se divid. Lucrarea de față a evaluat potențialul clastogen al acestui medicament in vitro în limfocitele umane în cultură și in vivo în celulele măduvei osoase ale șoarecilor BALB/C. În limfocitele umane, efectul clastogen al 2-CdA a fost studiat în fazele G1, S și G2 ale ciclului celular, utilizând trei concentrații diferite (10, 20 și 40 mg/mL). Obiectivele analizate au inclus indicele mitotic (MI), indicele de proliferare (PI), schimbul de cromatide surori (SCE) și aberația cromozomială (CA). Analiza statistică printr-un test de varianță (ANOVA) a arătat o creștere semnificativă (p < 0.05) în frecvențele CA pentru celulele tratate în timpul fazei S, dar MI nu a variat. Concentrațiile testate nu au produs o creștere semnificativă a frecvenței medii a SCE și nici nu au modificat celula PI în fazele G1 și S. Concentrațiile testate in vivo au fost de 0, 25, 0, 375 și 0, 5 mg/kg greutate corporală. În acest test, modificările frecvențelor CA și IM nu au fost observate la nivelurile de doză testate. Prin urmare, rezultatele indică un efect clastogen al 2-CdA în culturile de limfocite umane.
cuvinte cheie: limfocite umane, 2-CdA, aberații cromozomiale, SCE, ciclu celular.
Introducere
analogii purinici sunt foarte activi în tratamentul tulburărilor limfoproliferative (Pott-Hoeck și Hiddemann, 1995). Cladribina, 2-clorodeoxiadenozina (2-CdA), este un analog nucleozidic cu un atom de halogen înlocuit în poziția 2 în inelul său purinic, care conferă rezistență la dezaminare de adenozin deaminază (ADA). 2-CdA este un medicament de alegere în tratamentul leucemiei cu celule păroase, dar este, de asemenea, extrem de eficient în alte malignități limfoide de grad scăzut, inclusiv leucemie limfocitară cronică (LLC). Rapoartele din literatura de specialitate au arătat că 2-CdA oferă o rată similară de răspuns complet (RC) și o rată de răspuns global (OR) la fludarabină, dar influența ambelor medicamente asupra ratelor de supraviețuire pentru pacienții cu LLC este încă incertă. Rata CR indusă de 2-CdA este semnificativ mai mare decât la pacienții tratați cu chimioterapie convențională (Robak, 2001). 2-CdA este un alt nou analog purinic chimioterapeutic, cu Toxicitate specifică pentru limfocite (Schrimer și colab., 1997). Citotoxicitatea apare în celulele proliferante și în repaus, rezultând evenimente precum inhibarea sintezei ADN și a proteinelor, precum și inducerea apoptozei (Robertsson și colab., 1993). În ciuda toxicității, s-au obținut rezultate bune în răspunsul terapeutic, iar acest medicament este principala opțiune în tratamentul tricoleucemiei în care pacienții prezintă leucemie cu celule păroase (HCL) (Tallman și colab., 1992; Tallman și colab., 1993).
Deoxinucleozidele Adenine induc apoptoza în limfocitele în repaus și sunt medicamente utile pentru tratamentul bolilor limfoproliferative indolente. Au fost propuse mai multe mecanisme pentru a explica toxicitatea dezoxiadenozinei și a analogilor săi în celulele în repaus, inclusiv legarea directă a dATP la factorul pro-apoptotic Apaf-1 și activarea căilor caspase-9 și -3 (Genini și colab., 2000).
un pacient cu leucemie mieloidă acută tratat cu 2-CdA și Ara-C a prezentat recuperare întârziată a măduvei, sinuzită și sepsis Candida tropicalis. Ea a dezvoltat insuficiență de organ multisistem și a murit la 1 lună după inițierea terapiei cu LMA. Examinarea Post-mortem, limitată la piept și abdomen, a relevat candidoză diseminată care implică plămânii, inima, ficatul, rinichii și splina (Mathew și colab., 2000).
Zwaan și colab. (2002) a observat că pacienții cu t (9:11) par a fi semnificativ mai sensibili decât alți pacienți cu LMA la următoarele medicamente: citarabină (mediană: 2,9 ori), doxorubicină (4,5 ori), mitoxantronă (8,0 ori), 2-clorodeoxiadenozină (10,0 ori).
analogii nucleozidici (NA), cum ar fi citozina arabinozidă, fludarabina, cladribina și gemcitabina sunt componente esențiale ale terapiei de inducție AML (leucemie mieloidă acută); ele sunt, de asemenea, eficiente pentru tratarea tulburărilor limfoproliferative și au fost utilizate în tratamentul unor tumori solide. Acești compuși importanți au unele caracteristici comune, și anume în ceea ce privește necesitatea transportului prin transportori specifici de membrană și metabolismul și interacțiunea cu țintele intracelulare. Cu toate acestea, ele diferă în ceea ce privește tipurile de transportori și interacțiunea lor preferențială cu anumite ținte care pot explica eficacitatea împotriva tumorilor proliferative rapide (Galmarini și colab., 2001).
având în vedere aceste informații, este important să se evalueze potențialul clastogen al 2-CdA, pe baza rapoartelor că acest medicament induce citotoxicitate (Tallman și colab., 1992; Tallman și colab., 1993) și ADN-ul cu o singură catenă se rupe (Liliemark și Juliusson, 1994). Scopul acestui studiu a fost de a evalua capacitatea acestui agent chimioterapeutic în inducerea leziunilor cromozomiale în limfocitele umane și celulele măduvei osoase ale șoarecilor BALB/C.
materiale și metode
agent chimic
2-clorodeoxiadenozina antitumorală a fost asigurată cu amabilitate de Centrul de chimioterapie al Spitalului de Cl.
limfocite din sângele periferic uman
probe de sânge au fost obținute de la șase voluntari sănătoși nefumători (trei femei și trei bărbați), cu vârsta cuprinsă între 25 și 35 de ani și supuși tratamentului în timpul fazelor G1, S și G2 ale ciclului celular, pentru analiza anomaliilor cromozomiale (CA) și a indicelui mitotic (im). În plus, limfocitele de la trei indivizi (două femele și doi bărbați) au fost utilizate pentru schimbul de cromatide surori (SCE) și analiza indicelui de proliferare (PI). Limfocitele au fost cultivate în 78% mediu RPMI-1640 (Sigma Chemical Co., Sf. Louis, SUA) suplimentat cu 20% ser de vițel fetal (Cultilab, Brazilia) și adăugat cu penicilină (5 mg/mL) și streptomicină (10 mg/mL). Celulele au fost stimulate cu 2% fitohemaglutinină (Life Technologies, Grand Island, NY). Pentru fiecare 5 mL de mediu de cultură s-au adăugat 1 mL de plasmă, iar culturile au fost incubate la 37 C pentru 52 h pentru analiza CA. Soluțiile 2-CdA au fost diluate în apă deionizată la următoarele concentrații: 10, 20 și 40 mg/mL mediu de cultură, conform Preston și colab. (1987). Un control negativ a fost inclus în toate experimentele. Pregătirea și colorarea diapozitivelor au fost efectuate prin tehnici standard (Moorhead și colab., 1960). Lamele pentru analiza schimbului de cromatide surori (SCE) și a indicelui de proliferare (PI) au fost obținute din culturi paralele la care 5-Bromo-2′-deoxiuridină (Sigma Chemical Co., St. Louis, SUA; 10 mg / mL) a fost adăugat în plus față de 2-CdA. Colorarea diferențială sora-cromatidă a fost obținută prin tehnica fluorescence Plus Giemsa, utilizând Hoechst 33258 (Calbiochem – Behring corp.; 0,05 mg/mL soluție Hank) și 5% Giemsa (Merck). Această metodă este o modificare a celor publicate de Korenberg și Freedlender (1974) și Perry și Wolff (1974). Diapozitivele au fost expuse la lumină albă peste noapte. Preparatele metafazice cu 46 de cromozomi de la 1 la 1 au fost analizate într-un test orb. Cromozomii au fost desenați schematic pentru scorarea SCE, precum și pentru analiza CA.
protocoale de tratament
2-CdA tratamentul culturilor de limfocite în diferite faze ale ciclului celular
aberații cromozomiale (CAs)
după șapte ore de inițiere a culturii (faza G1), culturile de limfocite au fost tratate cu 2-CdA timp de 1 oră la 37 CTC în mediu de cultură fără ser. Celulele au fost fixate la 52 de ore după inițierea culturii. După tratamentul cu 2-CdA, celulele au fost spălate de două ori în mediu fără ser și reincubate în mediu complet. Pentru tratamentul în faza S, 24 de culturi h au fost tratate cu 2-CdA timp de 6 ore. Celulele au fost spălate de două ori în mediu fără ser, reincubate în mediu complet și fixate după 52 de ore de incubație. Pentru tratamentul cu G2phase, 69 de culturi h au fost tratate cu 2-CdA timp de 3 ore, iar celulele au fost fixate după 72 de ore de incubație. Colchicina (Merck 0,016%) a fost adăugată cu 1,5 ore înainte de fixare. Pentru a determina im, au fost obținute 1000 de celule pe Cultură și 100 de metafaze din fiecare cultură au fost analizate pentru CA, totalizând 6000 de celule și, respectiv, 600 de metafaze pentru fiecare tratament.
schimburi de cromatide surori (SCE)
culturi de limfocite de la 4 donatori sănătoși (două femele și doi masculi) au fost tratate cu 5-brdu (10 hectolitri/mL) la începutul incubației, iar când celulele au ajuns în faza G1 (7 ore după inițierea culturii), 2-CdA plus 5-BrdU au fost adăugate timp de 1 oră la 37 October C în mediu de cultură fără ser. După tratament, celulele au fost spălate de două ori în mediu fără ser, 5-BrdU a fost adăugat din nou și apoi celulele au fost reincubate în mediu complet. Pentru tratamentul în faza S, 24 de culturi h au fost tratate cu 2-CdA plus 5-BrdU în mediu fără ser timp de 6 ore. după tratament, celulele au fost spălate de două ori în mediu fără ser și reincubate în mediu complet cu 5-BrdU. Pentru analiza SCE și PI, celulele (fazele G1 și s) au fost fixate la 72 de ore după inițierea culturii. Cincizeci de metafaze de diviziune a doua pe cultură au fost marcate pentru SCE și o sută de metafaze din fiecare cultură au fost marcate pentru prima, a doua și a treia diviziune celulară, totalizând 200 de metafaze și, respectiv, 400 de celule pe tratament. PI a fost obținut folosind următoarea ecuație:
PI =
unde M1 și M3 sunt numerele metafazelor din prima și respectiv a treia divizie (Degrassi și colab., 1989).
animale
animalele utilizate au fost șoareci BALB/c (mus musculus), obținuți de la Casa de animale a școlii de Medicină din Ribeir Inktico Preto.
test in vivo pe șoareci Balb/c celule ale măduvei osoase
șoareci cu o greutate de aproximativ 30 g (5-6 săptămâni) au fost împărțiți în grupuri de 8 animale (4 masculi și 4 femele) și tratați prin injecție intraperitoneală cu 0.5 mL / volum final de soluție 2-CdA diluată cu apă distilată la următoarele concentrații: 0,25, 0,375 și 0,5 mg/kg greutate corporală. La douăzeci și două de ore după tratament (adică cu două ore înainte de sacrificiu), șoarecii au fost injectați cu 0,3 mL/volum final dintr-o soluție de colchicină 1% (Sigma) și uciși prin inhalare de eter 2 ore mai târziu. Grupul de control negativ a primit apă distilată 0,5 mL/volum final/animal, iar grupul de control pozitiv a primit ciclofosfamidă (CP), 25 mg / kg greutate corporală. Preparatele de măduvă osoasă pentru celulele metafazice au fost obținute prin tehnica standard (Ford și Hamerton, 1956). Diapozitivele au fost analizate într-un test orb și 100 de metafaze pe animal au fost desenate schematic. Im a fost obținut prin numărarea numărului de celule mitotice din 1000 de celule analizate pe animal și 100 de celule au fost marcate pentru CA.
analiza statistică
analiza unidirecțională a varianței (ANOVA) a fost efectuată asupra numărului de metafaze anormale și a numărului total de CA, MI, SCE și PI, cu calcule ale valorilor P pentru fiecare fază a ciclului celular. Ori de câte ori p < 0.05 a fost găsit, valorile medii ale fiecărui tratament au fost comparate prin testul Student-Newman Keuls. Analiza statistică a fost realizată prin utilizarea pachetelor software Sigma Stat (Jandel Corporation).
rezultate
limfocite umane
limfocitele din sângele periferic au fost tratate cu concentrații diferite (10, 20 și 40 mg/mL) de 2-CdA în fazele G1, S și G2 ale ciclului celular. Aberațiile cromozomiale (CA) și indicele mitotic (im) au fost analizate în limfocitele tratate de la șase indivizi sănătoși (trei femele și trei bărbați) (Tabelul 1). Pentru celulele tratate în faza S, S-a observat o creștere semnificativă a frecvențelor CA (p < 0,05) la toate concentrațiile, comparativ cu frecvențele martor. Cele mai frecvente tipuri de aberații cromozomiale observate au fost lacunele cromatide și izocromatide (datele nu sunt prezentate) și pauzele, urmate de minute duble, fragmente duble și fragmente unice. Pentru celulele tratate în timpul fazelor G1 și G2, frecvențele CA nu au prezentat nicio diferență semnificativă statistic între culturile tratate și valorile martor. Deși a existat o ușoară variație pentru IM, nu a fost observată o diferență semnificativă statistic (p < 0, 05) în niciunul dintre tratamente în raport cu indicii de control.
frecvențele medii ale schimbului de cromatide surori (SCE) și ale indicelui de proliferare (PI) au fost determinate în patru grupuri de control și în culturile de limfocite tratate cu 2-CdA în timpul fazelor G1 și S în culturile recoltate după 72 h (Tabelul 2). Concentrațiile testate (10, 20 și 40 mg/mL) nu au determinat nicio creștere semnificativă a frecvenței medii a SCE și nici nu au modificat celula PI în timpul fazelor G1 și S (Tabelul 2).
sistemul măduvei osoase de șoarece Balb/c
frecvențele ca și IM au fost analizate în celulele măduvei osoase de la 8 șoareci Balb/c (4 femele și 4 masculi) după tratamentul intraperitoneal cu 0, 25, 0, 37 și 0, 50 mg/kg g.g. de 2-CdA (Tabelul 3). În testul in vivo, 2-CdA nu a prezentat efecte citotoxice pentru niciuna dintre dozele testate în ceea ce privește frecvențele CA, precum și valorile im, când au fost comparate toate grupurile de tratament. Majoritatea aberațiilor au fost pauze de tip cromatid. Nu s-a constatat nicio diferență semnificativă (p < 0,05) fie la animale, fie între masculi și femele pentru parametrii analizați.
discuție
în ultimii ani, mai multe studii au arătat efectul antiproliferativ al medicamentelor utilizate în tratamentul malignităților limfoide. 2-CdA este un analog de bază utilizat în chimioterapie pentru un anumit tip de leucemie, leucemia cu celule păroase. Există, de asemenea, unele date care demonstrează că 2-CdA poate fi utilizat în combinație cu alte medicamente, în tratamentul limfomului non-Hodgkin refractar și recurent de grad scăzut (NHL) (Laurencet și colab., 1999; Robak și colab., 1999). În lucrarea de față, a fost efectuat un studiu citogenetic in vitro pentru a evalua potențialul clastogen al 2-CdA în limfocitele umane în ceea ce privește inducerea CA și SCE. Potrivit lui Moore și Bender (1993), CAS structural poate duce la pierderea materialului cromozomial. Tipul de CA format depinde de natura leziunii induse în ADN și de faza ciclului celular în timpul căreia celulele au fost expuse (Natarajan și colab., 1996).
culturile de limfocite au fost tratate cu trei concentrații de 2-CdA (10, 20 și 40 mg/mL) în timpul diferitelor faze ale ciclului celular. Efectul clastogen al medicamentului a fost demonstrat de creșterea semnificativă (p < 0,05) a frecvențelor CA pentru toate concentrațiile testate în faza s a ciclului celular. Pentru tratamentul în această fază, 2-CdA a fost lăsat timp de 6 ore în culturi. Pentru agenții care acționează în timpul unei faze specifice a ciclului celular, secvența de administrare poate determina eficacitatea și toxicitatea unei terapii combinate (Smorenburg și colab., 2001).
aceste rezultate sunt în concordanță cu cele raportate de alți autori (Carson și colab., 1983), sugerând că 2-CdA este încorporat în ADN producând pauze cu o singură catenă (SSBs). SSB – urile pot apărea atât direct, din dezintegrarea zaharurilor deteriorate, fie indirect, prin scindarea enzimatică a coloanei vertebrale fosfodiesterice. SSB-urile directe apar în principal dintr-un atac al radicalilor liberi, cum ar fi speciile reactive de oxigen, în timp ce SSB-urile indirecte sunt în principal intermediari normali ai repararea exciziei bazei ADN (BER). SSB-urile sunt, de asemenea, cele mai frecvente leziuni induse de genotoxine exogene, cum ar fi radiațiile ionizante, agenții de alchilare și camptotecina otrăvitoare topo1 și derivații săi anticanceroși (Caldecott, 2004).
unele rapoarte arată că analogul de bază are nevoie de o perioadă mai lungă de timp pentru ca fosforilarea să aibă loc (Gandhi și colab., 1997). Acest mecanism poate explica frecvența crescută a aberațiilor cromozomiale totale în timpul fazei S a ciclului celular. Același mecanism apare în celulele tratate cu mitomicină C, un compus dependent de S, care necesită replicarea ADN-ului pentru a transforma daunele ADN în aberații cromozomiale (Evans și Scott, 1964; Traganos și colab., 1980). Alți agenți antitumorali reprezintă același mecanism și acțiune a 2-CdA, cum ar fi fludarabina și 1-b-D-arabinosilcitozina (ara-C).
analogii nucleozidici citotoxici au o utilizare clinică largă. Ei au fost printre primii agenți chimioterapeutici utilizați în tratamentul bolilor maligne. Nucleozidele anticanceroase includ analogi ai pirimidinei fiziologice și nucleozidelor purinice. Acești agenți acționează ca antimetaboliți, concurând cu nucleozidele naturale în timpul sintezei ADN sau ARN și ca inhibitori ai enzimelor celulare cheie (Szafraniec și colab., 2004), sunt specifice S și trebuie fosforilate pentru a activa trifosfații (Plunkett și colab., 1980). În timpul fazei S a ciclului celular, când materialul genetic este duplicat de mecanismul de replicare a ADN-ului, celulele sunt deosebit de vulnerabile la insulta genotoxică. În timp ce punctele de control G1 și G2/M opresc progresia ciclului celular în puncte bine definite prin inhibarea kinazelor dependente de ciclină, se știe că punctele de control intra-fază s apar în orice moment în faza S și implică căi de semnalizare multiple (Sidorova și Breeden, 2003; Andreassen și colab., 2003)
este foarte important să se analizeze mecanismul răspunsului la medicament în diferite faze ale ciclului celular. Nivelul ridicat al leziunii cromozomiale se poate datora citotoxicității 2-CdA cauzată de conversia sa în 2-CdATP, care induce inhibarea sintezei ADN și repararea ADN-ului, implicând enzimele ribonucleotid reductază și ADN polimeraze. Acest compus prezintă rezistență la activitatea adenozin deaminazei (ADA), care este conferită de un atom de clor și înlocuirea hidrogenului în poziția 2 a adenozinei inelului purinic (Baltz și Montello, 1993).
SCE sunt adesea considerate un parametru pentru evaluarea genotoxicității, deoarece frecvența lor este în mod clar crescută prin expunerea la multe substanțe chimice mutagene și cancerigene. În experimentul de față, frecvențele SCE în culturile tratate cu 2-CdA au prezentat o ușoară creștere în raport cu culturile martor. Creșterea observată în ambele faze nu a variat semnificativ.
deoarece multe medicamente sunt activate după ce sunt metabolizate, testele de mutagenitate in vivo sunt recomandate pentru evaluarea activității clastogene a acelor compuși care necesită activare metabolică. O astfel de abordare oferă, de asemenea, condiții similare cu cele găsite la om (Legator și Ward Jr., 1991). Deși există diferențe între rozătoare și oameni, se recomandă ca orice evaluare să se bazeze atât pe studii in vitro, cât și pe studii in vivo, și nu doar pe oricare dintre ele (Huggett și colab., 1996).
în studiul de față, efectul clastogen al 2-CdA a fost, de asemenea, analizat la șoareci BALB/c celule de măduvă osoasă la concentrații de 0, 25, 0, 375 și 0, 5 mg/kg greutate corporală. Rezultatele au arătat că 2-CdA nu a fost eficient pentru inducerea aberațiilor cromozomiale. Lipsa efectului in vivo se poate datora cantității limitate de 2-CdA disponibile, deoarece a fost donată în condiții diluate. Efectele genotoxice ale gemcitabinei analogice de bază au fost raportate la celulele măduvei osoase de șoarece utilizând sistemele de testare a micronucleilor și a aberațiilor cromozomiale. Aydemir și Bilaloglu (2003) au arătat că gemcitabina nu a indus Niciun CAs semnificativ și nici nu a determinat reducerea IM cu o perioadă de tratament de 6 ore la doze de 2, 0, 4, 0 și 8, 0 mg / kg și jumătate, comparativ cu controlul negativ; în schimb, frecvența CAs totală a fost semnificativ crescută de gemcitabină (p < 0, 0001) cu o perioadă de tratament de 24 de ore cu aceleași doze.
în concluzie, 2-CdA a arătat un efect clastogen în culturile de limfocite umane tratate in vitro în timpul fazei S a ciclului celular, dar nu a fost observat un efect clastogen semnificativ în celulele tratate în timpul fazelor G1 și G2. În testul in vivo la șoareci, 2-CdA nu a prezentat niciun efect clastogen la nivelurile de doză testate.
mulțumiri
suntem recunoscători Prof. Dr. A. T. Natarajan, Dr. Elza T. Sakamoto Hojo și Dr. Lusania G. Antunes pentru comentarii valoroase asupra manuscrisului și Domnului Luiz Augusto da Costa Jr., Domnului Silvio A. dos Santos și doamnei Sueli A. Neves pentru asistență tehnică valoroasă. CAPES și FAPESP proces n. 99/10643-7 a susținut această cercetare. Comitetul de etică a cercetării a aprobat proiectul (proces: CONEP n. 25000.074430/2001-88).
Andreassen PR, Lohez OD și Margolis RL (2003) G2 și adaptarea punctului de control al ansamblului axului și arestarea tetraploidiei: implicații pentru instabilitatea genomică intrinsecă și indusă chimic. Mutat Res 532: 245-53.
Aydemir N și Bilaloglu R (2003) genotoxicitatea a două medicamente anticanceroase, gemcitabină și topotecan, în măduva osoasă de șoarece in vivo. Mutat Res 537: 43-51.
Baltz JK și Montello MJ (1993) cladribină pentru tratamentul malignităților hematologice. Farmacie Clinică 12: 805-813.
Caldecott KW (2004) ADN-ul cu o singură catenă se rupe și neurodegenerare. Repararea ADN-ului (Amst) 3:875-82.
Carson DA, Wasson DB, Taetle R și Yu a (1983) Toxicitate specifică a 2-clorodeoxiadenozinei față de limfocitele umane în repaus și proliferative. Sânge 62: 737-743.
Degrassi F, de Salvia R, Tanzarella C și Palitti F (1989) inducerea aberațiilor cromozomiale și SCE de către camptotecină, un inhibitor al topoizomerazei de mamifere I. Mutat Res 211:125-130.
Evans HJ și Scott D (1964) influența sintezei ADN asupra producției de aberații cromatide prin raze X și hidrazidă maleică în Vicia faba Genetics 49:17-38.
Ford ce și Hamerton JL (1956) o secvență de squash citrat hipotonic de colchicină pentru cromozomii de mamifere. Tehnologie 3: 247-251.
Galmarini CM, Mackey JR și Dumontet c (2001) analogi nucleozidici: Mecanisme de rezistență la medicamente și strategii de inversare. Leucemie 15: 875-890.
Gandhi V, Huang P, Chapman AJ, Chen F și Plunkett W (1997) încorporarea fludarabinei și a 1-beta-D-arabinofuranosilcitozinei 5 ‘ trifosfați de ADN polimerază alfa: afinitate, interacțiune și consecințe. Cancerul De Clin Res 3: 1347-1355.
genini D, Adachi s, Chao Q, Rose DW, Carrera CJ, Cottam HB, Carson DA și Leoni lm (2000) analogii Deoxiadenozină induc moartea celulară programată în celulele leucemiei limfocitare cronice prin deteriorarea ADN-ului și prin afectarea directă a mitocondriilor. Sânge 96:3537-3543.
Huggett AC, Schilter B, Roberfroid M, Antignac E și Koeman JH (1996) metode Comparative de testare a toxicității. Alimente Chimice Toxicol 34: 183-92.
Korenberg JR și Freedlender EF (1974) tehnica Giemsa pentru detectarea schimburilor de cromatide surori. Cromozomul 48: 355-360.
Laurencet FM, Zulian GB, Guetty-Alberto M, Iten PA, Betticher DC și Alberto P (1999) cladribină cu ciclofosfamidă și prednison în tratamentul malignităților limfoproliferative de grad scăzut. Br J Hematol 79:1215-1219.
Legator MS și Ward Jr JB (1991) utilizarea datelor de toxicitate genetică in vivo pentru evaluarea riscurilor. Mutat Res 250: 457-465.
Liliemark J și Juliusson G (1994) 2-cloro-2′-deoxiadenozină-considerații clinice, biochimice și farmacocinetice. Arch Immunol Ther Exp (Warsz) 42:7-10.
Mathew s, Lorsbach RB, Shearer P, Sandlund JT și Raimondi SC (2000) cromozomi cu două minute și amplificare c-MYC la un copil cu sindrom mielodisplazic secundar după tratamentul leucemiei limfoblastice acute. Leucemie 14: 1314-5.
Moore RC și Bender MA (1993) secvența de timp a evenimentelor care duc la formarea aberațiilor cromozomiale. Environ Mol Mutagen 22: 208-213.
Moorhead PS, Nowell PC, Mellman WJ, Battipps DM și Hungerford DA (1960) pregătirea cromozomilor leucocitelor cultivate din sângele periferic. Exp Cell Res 20: 613-616.
Natarajan AT, Balajee AS, Boei JJ, Darroudi F, Dominguez I, Hande MP, Meijers M, Slijepcevic P, Vermeulen s și Xiao Y (1996) mecanisme de inducere a aberațiilor cromozomiale și detectarea lor prin hibridizare in situ. Mutat Res 372: 247-58.
Perry pe și Wolff S (1974) noua metodă Giemsa pentru colorarea diferențială a cromatidelor surori. Natură 251: 156-158.
Plunkett W, Chubb s, Alexander l și Montgomery ja (1980) Compararea toxicității și metabolismului 9-b-d-arabinofuranosil-2-fluoroadeninei și 9-b-d-arabinofuranosiladeninei în celulele limfoblastoide umane. Cancer Res 40: 2349-55.
Pott-Hoeck C și Hiddemann W (1995) analogi purinici în tratamentul limfoamelor de grad scăzut și leucemiilor limfocitare cronice. Ann Oncol 6: 421-433.
Preston RJ, Dean BJ, Galloway S, Holden H, McFee AF și Shelby M (1987) teste citogenetice in vivo la mamifere. Analiza aberațiilor cromozomiale în celulele măduvei osoase. Mutat Res 189: 157-65.
Robak T (2001) cladribină în tratamentul leucemiei limfocitare cronice. Limfom Leuk 40: 551-564.
Robak T, G Otrivra-Tybor J, Urbanska H și Krikowski e (1999) regim combinat de 2-clorodeoxiadenozină (cladribină), mitoxantronă și dexametazonă (CMD) în tratamentul limfomului non-Hodgkin refractar și recurent de grad scăzut. Leuk Lympho 32: 359-363.
Robertsson LE, Chubb s, Meyn RE, Story M, Ford R, Hitelman WN și Plunkett W (1993) inducerea morții celulare a apoptozei în leucemia limfocitară cronică prin 2-cloro-2′-deoxiadenozină și 9-b-d-arabinosil-2-fluoradenină. Sânge 81: 143-150.
Schrimer M, Mur e, Pfeiffer KP, Thaler J și Konwalinka G (1997) profilul de siguranță al dozei mici de cladribină în poliartrita reumatoidă refractară. Un proces pilot. Scand J Rhematol 26: 376-379.
Sidorova JM și Breeden LL (2003) tranziții precoce G1/S și instabilitate genomică: conexiunea de origine. Mutat Res 532: 5-19.
Smorenburg CH, Sparreboom A, Bontenbal m și Verweij J (2001) chimioterapie combinată a taxanilor și antimetaboliților: utilizarea și limitările sale. Eur J Cancer 37: 2310-23.
Szafraniec SI, Stachnik KJ și Skierski JS (2004) noi analogi nucleozidici în tratamentul tulburărilor hematologice. Acta Pol Pharm 61: 223-32.
Tallman MS, Hakimian D, Hogan D și Petersen L (1993) 2-Clorodeoxiadenozină în tratamentul leucemiei cu celule păroase (HCL): detectarea bolii reziduale minime (MRD) prin imunostimulare (IS). Prezentat la al 8-lea Simpozion privind biologia moleculară a hematopoiezei din Basel, 9-13 iulie.
Tallman MS, Hakimian D, Variakojis D, Koslow D, Sisney GA, Rademaker AW, Rose E și Kaul K (1992) un singur ciclu de 2-clorodeoxiadenozină are ca rezultat o remisiune completă la majoritatea pacienților cu leucemie cu celule păroase. Sânge 80: 2203-2209.
Traganos F, Staiano-Coico L, Darzynkiewicz Z și Melamed MR (1980) efectele elipticinei asupra supraviețuirii celulare și a progresiei ciclului celular în celulele de mamifere cultivate. Cancer Res 40: 2390-2399.
Zwaan MC, Kaspers GJL. Pieters R, H Inktihlen K, Huismans DR, Zimmermann M, Harbott J, Slater RM, Creutzig U și Veerman AJP (2002) rezistența la medicamente celulare în leucemia mieloidă acută din copilărie este legată de anomalii cromozomiale. Sânge 100: 3352-3360.
