anatomie și fiziologie

studiul de față a fost realizat, cu reguli și reglementări pentru îngrijirea și utilizarea animalelor de laborator din casa animalelor, iar experimentul respectiv a fost aprobat de Comitetul Central de etică a animalelor. 25 de șoareci albinoși Elvețieni de sex feminin, cu o vârstă medie de 45 de zile și o greutate de 25 până la 35gm, au fost aleși aleatoriu din Animal house, din diferite colonii de reproducere. Aceste femele adulte care nu erau însărcinate au fost copulate în mod intenționat de șoareci masculi de aceeași varietate, cu scopul de a procura 10 pui de generație ulterioară. În cușca din policarbonat din plastic cu topping-uri din oțel inoxidabil, un singur mascul heterozigot puternic și puternic a fost plasat cu o singură femelă într-o atmosferă menținută continuu la 20-25C și 55 5% umiditate de 5%, 12 ore ulterior ciclu luminos și întunecat. Șoarecii de sex feminin au fost examinați pentru DOP încrucișat vaginal, iar prezența dopului well visualize a fost marcată ca sarcină constatată și a fost atribuită Ziua zero a gestației. În zilele 7, 8 și 9 de gestație, femelele conectate au fost verificate pentru sarcină prin palpare abdominală.

caracterizarea nanoparticulelor de argint AgNps

din surse de cercetare de achiziție au fost evaluate pentru dimensiunea lor primară prin TEM și pentru aglomerarea lor în mediu celular prin spectroscopie de corelație încrucișată cu fotoni (PCCS) și spectroscopie ultravioletă–vizibilă (UV-Vis), împrăștiere dinamică a luminii și potențial Zeta. Au fost prezentate imagini reprezentative TEM ale AgNps. Imaginile TEM ale PVP acoperite AgNps dispersate și suspendate în 1.5m NaCl a confirmat dimensiunea primară a particulelor declarată de producători. Nanoparticulele de argint neacoperite au găsit o distribuție eterogenă în intervalul 50-100 nm, majoritatea fiind în jur de 71nm.

în cazul pulberilor suspendate AgNps, imaginile TEM au arătat că într-un mediu apos nanoparticulele de argint se aglomerează și formează agregate mari, dintre care multe sunt mai mari de 50nm. Acest rezultat este în concordanță cu rezultatele distribuției dimensiunii hidrodinamice care a fost obținută prin metoda împrăștierii dinamice a luminii (Zeta sizer). Analizele EDX au confirmat că numai argintul elementar a fost prezentat atât în AgNps coloidal, cât și în pulbere uscată. Conform rezultatelor ICP-AES, concentrațiile ionilor Ag în stocurile digerate acide de AgNps pulbere coloidală și suspendată au fost de 1908,1 și respectiv 447,2 mgl-1. De asemenea, rezultatele modelului XRD confirmă cristalinitatea agnps de tip pulbere și prezența argintului cristalin elementar, de asemenea, alte faze, cu excepția argintului metalic, nu au fost prezente în probă. În plus, rezultatele XRF au arătat că puritatea agnps de tip pulbere a fost de 97,86%.

expunerea soluției coloidale AgNps prin gavaje orale repetate

șoarecii gestanți au fost administrați dublu cu soluție salină normală (control fals) ca vehicul și într-o doză de 5, 10, 15, 20 mg/kg g.g. au fost administrați prin gavaje orale repetate, de la 7 la 12 zile gestaționale, cu ajutorul unui ac de alimentare curbat cu vârf contondent și a van atașat. Animalele de control fals sunt incluse în experimentul cu animale tratate și animale netratate.

disecția și eviscerarea

pe HG 18, coarnele drepte și stângi ale uterului mamei însărcinate au fost exteriorizate în urma laparotomiei ventrale sub anestezie profundă cu eter/cloroform și 250 de baraje proaspete colectate prin disecție au fost spălate cu apă de la robinet pe vas Petri pentru a îndepărta sângele și lichidul amniotic și uscate cu hârtie de filtru și deshidratate în alcool 95% timp de 48 de ore expuse la 1% KOH pentru vizualizarea corectă a oaselor, fie normale sau anormale.13

metoda (evaluarea dismorfologiei scheletice prin tehnica eviscerării și colorării Alizarinei) -:

studiul dismorfologiei scheletice a fost realizat prin tehnica eviscerării și colorării Alizarinei. Toate exemplarele (50 de pui) din fiecare grup au fost deshidratate în 95% alcool ( alcool rectificat) timp de 48 de ore și apoi îndepărtate și spălate cu apă curentă de la robinet și apoi eviscerate cu soluție 1% KOH (KOH 1GM+100ml D.G.). După efectuarea laparotomiei ventrale, organele vitale sunt îndepărtate. Probele au fost scufundate bine în soluție de hidroxid de potasiu 1% (KOH) timp de cel puțin 2 până la 4 zile până când carnea, tendonul, mușchii și viscerele au fost transparente & clare și desființate, urmate de o vizibilitate cristalină a oaselor și cartilajelor. În fiecare zi, soluția a fost schimbat atunci când devin decolorate și deșeuri.

specimenul vizibil al osului și cartilajului cristalin au fost apoi plasate în același KOH 1% și apoi s-au adăugat 6 până la 8 picături de 1% pată de alizarină pentru a-l colora roșu purpuriu profund. Soluția a fost ușor agitată de câteva ori pe oră. Apoi, aceeași procedură a fost continuată pentru încă 2-3 anizile pentru a da o culoare roșie purpurie profundă oaselor și cartilajelor. Pentru îndepărtarea oricărei colorări și netezire a probelor, aceleași sunt apoi trecute prin 40%, 80% (40 ml glicerol+60 ml apă distilată, 80 ml glicerol+20 ml apă distilată) și 1 până la 2 timol de cristal adăugat pentru conservarea pe termen lung menținut în cele din urmă în 100% glicerol, servit pentru fotografie & observarea puternică a lentilelor de mână.

în total au fost colectați 250 de fetuși de la 25 de mame din 1, 2, 3, 4 și 5 grupuri din care toate probele au fost expuse experimentării dismorfologiei scheletice. S-au observat resorbții la 60 de fetuși.

statistici

procentul malformațiilor scheletice a fost evaluat din fiecare grup și evaluat în funcție de numărul de oase implicate în dismorfologie și, în final, procentele au fost comparate între grup și în cadrul grupului pentru factorul de teratogenitate dependent de doză. Testul multi ANOVA și statistica descriptivă (analiză post-hoc) utilizat în acest scop.

observație și constatări

procentul de dismorfologie scheletică a fost mai mare și mai mare la 15 mg AgNps și 20 mg AgNps/ kg g.g. puii din grupul tratat (Tabelul 1).

grupurile tratate cu doze mai mici de AgNps (0,5 & 1 mg/kg greutate corporală.) s-au observat procente foarte mici de anomalii scheletice, astfel încât aceste grupuri tratate au fost aproape considerate fetuși ai grupului de control (Figura 1).

Figura 1 fetus de Control pata alizarin vedere dorsală (a) și vedere laterală (B).

unul dintre cei 5 mg AgNps / kg pup de grup tratat a demonstrat al 5-lea segment sternal neosificat din bara sternală și segmentul Manumbriu neosificat care este diagnosticat ca fisură sternală. Alți fetuși au demonstrat hipoplazie maxilară și mandibulară, os frontal, parietal și nazal neosificat, eșec de fuziune a segmentului posterior al osului șoldului, 10,11 și a 12-A coastă văzută rudimentară în partea stângă a unuia dintre făt. Absența axului median al coastei 6-12 împreună cu creșterea spațiului dintre coaste succesive au fost notate la mai mulți fetuși din diferite grupuri și diagnosticate ca spațiu web crescut, absența corpului & procesul spinos este văzut din segmente vertebrale toracice întregi care este diagnosticat ca defect de tub neural de tip apropiat în 1% cazuri din acest grup tratat fetuși. Procentul de dismorfologie scheletică calculat în acest grup a fost de 32% (Figura 2).

Figura 2 5 mg agnps grup tratat făt pată alizarină vedere dorsală (a) și (B), vedere laterală (C) vedere ventrală (D) și vedere dorsală (E)

fetușii din grupul tratat cu AgNps de 10 mg au demonstrat dismorfologie scheletică sub formă de absență a vertebrelor lombare și sacrale, absența oaselor șoldului, coaste puternic degenerate fără cartilaje, osul frontal și parietal a arătat neosificat și nedezvoltat, scolioza este observată în regiunea toracică și lombară la unul dintre făt, se observă absența vertebrelor cervicale, hipoplazia maxilară, dezvăluirea și suturi coronale sunt de asemenea văzute. Oasele membrelor inferioare nedezvoltate sunt văzute pe ambele părți ale unuia dintre făt. Procentul de dismorfologie scheletică calculat în acest grup a fost de 44% (Figura 3).

Figura 3 10 mg agnps tratat fetus grup alizarin pata vedere dorsală (a, B).

dintre cei 15 mg agnps din grupul tratat cu 8 pui s-a observat absența vertebrelor cervicale cu absența coastei a 12-A, iar restul vertebrelor au fost observate procese spinoase nedezvoltate, fisura metatarsiană se observă și pe vederea dorsală a piciorului unuia dintre făt, osul șoldului neosificat pe vederea ventrală cu absența segmentului & fibroza este de asemenea observată, osul temporal neosificat care se găsește fibrosat pe vederea laterală a craniului, absența segmentului proximal al osului innominat,anomalia coloanei vertebrale a fost observată cu rudimentarul 6 și 9 coaste și se observă absența a 10-A, A 11-a și a 12-a coaste la unul dintre făt, s-a văzut și os parietal neossificat, anencefalie cu vertebră scolioză a fost observată la L1-L5 la unul dintre făt, s-a văzut OS de șold neossificat, scapule neossificate ale ambelor părți au fost observate la vederea dorsală a unuia dintre făt, absența cartilajului a fost observată de la 6 până la 12 coaste la unul dintre făt. Procentul de dismorfologie scheletică calculat în acest grup a fost de 60% (Figura 4).

Figura 4 15 mg agnps fetus de grup tratat pată alizarină vedere dorsală (a, B) și vedere ventrală (C)

20 mg / kg greutate corporală. Fetușii din grupul tratat cu AgNps au prezentat cel mai mare procent de dismorfologie scheletică (76%). Scolioza a fost observată în regiunea lombară la unul dintre făt, un făt a demonstrat os occipital neossificat, scapule neossificate și OS de șold, fibroză mare se observă în maxilar, frontal și parietal oase, același lucru se observă și în al doilea până la al șaselea segment al sternului., se observă cleft în articulația gleznei, se observă un spațiu crescut între coasta 1 și 2 și coastele 5 până la 8 ale părții stângi a unuia dintre făt , de asemenea, se observă cleft în articulația pubiană simfizică a unuia dintre făt, hipoplazia mandibulară neosificată, se observă și absența procesului spinos cu coaste ondulate, la un făt am observat fuziunea completă a vertebrelor cervicale 2-8, care este clar diferențiată de restul vertebrelor cervicale 1. De asemenea, am observat scolioză ușoară și os occipital și parietal neosificat și absența scapulelor pe partea dreaptă a unuia dintre făt, se observă și vertebre hipoplastice (Figura 5).

Figura 5 20 mg agnps tratat fetus grup alizarin pata vedere dorsală.