cuantificarea nivelurilor ROS folosind CM-H2DCFDA și HyPer

la niveluri scăzute, speciile reactive de oxigen (ROS) pot acționa ca molecule de semnalizare în interiorul celulelor. Atunci când producția de ROS depășește cu mult capacitatea sistemelor antioxidante endogene sau nivelurile antioxidante sunt reduse, nivelurile de ROS cresc în continuare. Acesta din urmă este asociat cu inducerea stresului oxidativ și a transducției semnalului asociat și caracterizat prin modificări induse de ROS în homeostazia redox celulară și/sau efecte dăunătoare asupra biomoleculelor (de ex. ADN, proteine și lipide). Având în vedere mecanismele complexe implicate în producerea și îndepărtarea ROS, în combinație cu lipsa moleculelor reporter care sunt cu adevărat specifice pentru un anumit tip de ROS, cuantificarea nivelurilor ros (sub)celulare este o sarcină provocatoare. În acest capitol vom descrie două strategii pentru a măsura ROS: one approach to assess general oxidant levels using the chemical reporter CM-H2DCFDA (5-(and-6)-chloromethyl-2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate), and a second approach allowing more specific analysis of cytosolic hydrogen peroxide (H2O2) levels using protein-based sensors (HyPer and SypHer).