cytokeratin 5/6 și cytokeratin 8/18 expresia în cancerul de sân triplu negativ: semnificație clinicopatologică în populația Sud-Asiatică

metode

Total 150 de cazuri de TNBC au fost selectate din înregistrările arhivelor Departamentului de patologie. Probele chirurgicale au inclus mastectomii radicale modificate, mastectomii simple și excizii locale largi cu disecție ganglion santinelă. Toți pacienții au suferit intervenții chirurgicale la Spitalul Național Liaquat, Karachi din ianuarie 2008 până în decembrie 2013 pe o perioadă de 6 ani. Studiul a fost aprobat de Comitetul de cercetare și revizuire etică al instituției, iar consimțământul informat a fost luat de la toți pacienții la momentul intervenției chirurgicale. Au fost recuperate diapozitive colorate cu hematoxilină și eozină și blocuri de parafină ale cazurilor și au fost tăiate secțiuni noi acolo unde a fost necesar. Diapozitivele tuturor cazurilor au fost examinate de doi histopatologi seniori și au fost evaluate caracteristicile patologice cum ar fi tipul histologic, gradul tumorii, stadiul T, stadiul N, invazia limfovasculară, necroza, fibroza, infiltrarea limfocitară (limfocitele infiltrante tumorale), prezența componentei insitu, răspândirea pagetoidului și invazia limfatică dermică. Înregistrările clinice ale tuturor pacienților au fost, de asemenea, revizuite din înregistrările instituționale pentru a evalua vârsta pacientului, istoricul radiațiilor și chimioterapiei și starea recurenței. Mai mult, au fost selectate blocuri reprezentative ale fiecărui caz și au fost efectuate imunohistochimie ER, PR și Her2neu pentru a reconfirma statutul triplu negativ.

ER, PR, Her2neu și Ki67 IHC au fost efectuate utilizând anticorpi DAKO conform protocolului producătorului.

1. receptor de estrogen anti-uman de iepure Flex monoclonal alfa, clona EP1.

2. clona receptorului de progesteron anti-uman FLEX monoclonal de șoarece PgR 636.

3. oncoproteină anti-umană c-erbB-2 de iepure policlonală.

4. clona antigenului Ki67 anti-uman de șoarece monoclonal FLEX MIB-1.

colorarea nucleară a ER și PR în > 1% din celulele canceroase a fost considerată pozitivă. Pentru her2neu, cazurile au fost marcate cu 1+, 2+ și 3 + conform ghidurilor PAC. Pentru cazuri echivoce (2+), FISH a fost efectuat folosind trusa de sondă Path Vysion Her2neu conform protocoalelor producătorului. Rezultatele au fost exprimate ca raport al semnalelor her2neu comparativ cu semnalele CEP17 conform ghidurilor ASCO/PAC.

imunostimularea Ki67 a fost înregistrată ca variabile continue bazate pe proporția de celule canceroase colorate pozitive. Mai mult, pe baza indicelui Ki67, cazurile au fost clasificate în < 15, 16-24, 25-44 și > 44% categorii de index ki67.

CK5/6 IHC a fost efectuat prin utilizarea Cytokeratinei Anti-umane FLEX Monoclonal de șoarece 5/6, clona D5/16 B4 prin metoda DAKO envision conform protocolului producătorilor. Colorarea citoplasmatică și membranoasă intermediară până la puternică în mai mult de 10% celule a fost considerată pozitivă. Colorarea slabă până la intermediară în < 10% a fost considerată focală pozitivă, în timp ce nicio colorare nu a fost considerată negativă (fișier suplimentar 1: Figura S1).

CK 8/8 IHC a fost efectuat folosind citokeratină monoclonală anti-umană de șoarece 5/6, clonă D5/16 B4, conform metodei DAKO envision. Colorarea citoplasmatică și membranoasă intermediară până la puternică în mai mult de 50% celule a fost considerată pozitivă. Colorarea slabă până la intermediară (citoplasmatică, cu pierderea reactivității membranei) în 10-50% a fost considerată focală pozitivă, în timp ce nicio colorare sau colorare slabă în < 10% nu a fost considerată negativă (fișier suplimentar 1: Figura S1).

starea recurenței și urmărirea au fost evaluate prin revizuirea dosarului medical al Spitalului. Supraviețuirea globală a fost luată ca timp de la excizia chirurgicală până la deces sau ultima urmărire, iar supraviețuirea fără boală a fost definită ca timp între excizia chirurgicală și recurența locală sau metastaza la distanță, deces sau ultima urmărire.

pachetul statistic pentru științe Sociale (SPSS 21) a fost utilizat pentru compilarea și analiza datelor. Media și deviația standard au fost calculate pentru variabilele cantitative. Frecvența și procentul au fost calculate pentru variabilele calitative. Chi square a fost aplicat pentru a determina asocierea. Testul t Student sau testul Mann whitney au fost aplicate pentru a compara diferența de mijloace între grupuri. Valoarea p 0,05 ca fiind semnificativă. Curbele de supraviețuire au fost reprezentate grafic folosind metoda Kaplan–Meier și semnificația diferenței dintre curbele de supraviețuire au fost determinate folosind raportul log-rank. P-valoare 0.05 a fost considerat semnificativ.

rezultate

vârsta medie a pacienților implicați în studiu a fost de 48, 9 ani, iar grupa de vârstă cea mai frecventă a fost de 31-50 de ani. Majoritatea pacienților s-au prezentat în stadiul T2 cu un indice ki67 mediu ridicat, adică 46,9%. 42,7% din cazuri au avut metastaze nodale. Deși 84% cazuri au fost de carcinom ductal invaziv convențional, NST; cu toate acestea, o proporție semnificativă de cazuri au fost de histologie metaplazică (9,3%). Majoritatea cazurilor au fost de grad înalt (86,7% grad III). Majoritatea tumorilor prezintă infiltrare limfocitară și necroză. Majoritatea tumorilor nu au componentă insitu (61%). Recurența locală sau metastazele îndepărtate tardive au fost observate în 17,8% din cazuri (Tabelul 1).

expresia pozitivă (> 10%) CK5/6 a fost observată în 8% (12 cazuri) de TNBC, în timp ce 2, 4% (4 cazuri) au prezentat pozitiv focal (< 10%) și 89, 3% (134) au fost negative cu CK5/6. Pierderea completă a expresiei CK8/18 a fost observată la 4,7% (7 cazuri), în timp ce 32,7% (49 cazuri) au evidențiat pierderea focală a CK8/18 și 62,7% (94 cazuri) au prezentat expresia normală intactă a CK8/18. Nu a fost observată o asociere semnificativă a CK5/6 și CK8/18 cu diferiți parametri clinicopatologici (tabelele 2 și 3). În mod similar, nu a fost observată nicio asociere semnificativă a CK 5/6 și CK8/18 cu statusul de recurență al pacienților (fișier suplimentar 2: Figura s2).

discuție

în studiul de față am evaluat expresia unui marker bazal (CK5/6) și a unui marker luminal (CK8/18) în TNBC în populația noastră și am constatat că; 8 și 2,7% din TNBC au prezentat o expresie pozitivă și focală pozitivă a CK5/6, respectiv 4,7 și 32.7% din TNBC au evidențiat pierderea completă și, respectiv, pierderea focală a expresiei CK 8/18. În toate cazurile în care s-a observat pierderea focală CK8/18, a existat o pierdere a reactivității membranei, în timp ce colorarea citoplasmatică a fost reținută în câteva celule. Cu toate acestea, nu a fost observată o asociere semnificativă între aceste modele anormale de exprimare a citokeratinelor cu diferiți parametri clinicopatologici și prognostici ai TNBC în populația noastră. Cancerul de sân este una dintre cele mai frecvente afecțiuni maligne la populația din Asia de Sud, în special la vârste tinere .

profilarea expresiei genelor definește cancerele de sân bazale ca fiind cele care prezintă grupuri bazale de gene care includ EGFR, citokeratină bazală 5/6, C–kit, cluster de proliferare și expresie scăzută a genelor Her2neu și a receptorilor hormonali legați . Cu toate acestea, cancerul de sân bazal nu este o singură entitate și include mai multe subtipuri, inclusiv două subtipuri bazale (BL1 și BL2), mezenchimale, stem mezenchimale, imunomodulatoare și subtipuri de androgeni luminali . În plus, au fost definite și subtipuri bogate în interferon și cu conținut scăzut de claudină . Subtiparea cancerelor mamare bazale nu este recomandată de ASCO/CAP. Expresia CK 5/6 variază de la 24 la 72% în TNBC, așa cum s-a raportat în studiile anterioare . Alți cercetători au propus, de asemenea, semnificația prognostică a CK 5/6 în cancerele mamare negative ale nodului . Nielson și colab. a sugerat că cancerul de sân pozitiv CK5/6 are un prognostic mai rău, independent de gradul tumorii, stadiul T și statutul hormonal/Her2neu . În mod similar, într-un alt studiu s-a propus că CK5/6 este marker al supraviețuirii fără boală mai scurtă, independent de alți factori prognostici ai cancerului de sân . Inanc și colab. raportat 50.5% expresie a CK5 / 6 cu corelație pozitivă a CK5/6 TNBC cu metastaze nodale și dimensiunea tumorii . Cu toate acestea, spre deosebire de aceste studii, am găsit o expresie scăzută a expresiei CK5/6 în TNBC în populația noastră studiată, care poate reprezenta un profil genomic diferit al TNBC în populația noastră, care trebuie explorat în studii suplimentare. Rolul Prognostic al CK5 / 6 a fost propus în alte tipuri de cancer ale corpului .

CK8/18 este o citokeratină luminală exprimată în principal în epiteliul mamar într-un model membranos și citoplasmatic. Cimpean și colab. definit aceste modele diferite de CK8 / 18 în cancerul de sân; citoplasmatic difuz, membranos și citoplasmatic combinat și membranos .Unii cercetători au propus că pierderea expresiei CK8 / 18/CK8 / 18 scăzută este asociată cu un prognostic mai rău și un risc ridicat de metastaze . Cu toate acestea, nu am găsit nicio semnificație prognostică a pierderii expresiei CK8/18 cu diverși factori prognostici și recurență în TNBC.

am constatat că 32,7% din TNBC prezintă pierderea focală a expresiei CK8/18. În toate aceste cazuri a existat o pierdere a reactivității membranoase a CK8 / 18, în timp ce colorarea citoplasmatică a fost reținută în câteva celule. Aiad și colab. intr-un studiu care a implicat 70 de cazuri de cancer de san a constatat expresia anormală a CK8/18 (citoplasmatic), în 70% din cancerul de San egiptean, care sugerează o mulțime de eterogenitate în expresia citokeratină a cancerului de san in diferite parti ale lumii .