Interpretarea cantitativă Testarea ADN a citomegalovirusului: înțelegerea perspectivei de laborator | Jiotower
caracteristicile testului analitic
există caracteristici de performanță ale testelor de încărcare virală care trebuie înțelese pentru a utiliza și interpreta corect rezultatele testelor. Acestea includ limita de detecție (LOD), LOQ inferior și superior, gama liniară, precizia (reproductibilitatea) și precizia. LOD, definit ca cea mai mică concentrație de ADN care poate fi detectată în 95% din replicate, este de obicei utilizat pentru teste moleculare calitative; cu toate acestea, termenul poate fi aplicat și testelor cantitative de încărcare virală. Loq-urile superioare și inferioare sunt cele mai mari și mai mici concentrații de ADN care pot fi cuantificate cu “precizie acceptabilă” . În prezent, nu există o definiție convenită pentru “precizie acceptabilă”; prin urmare, laboratoarele individuale definesc acest lucru la nivel local. Modul în care este definită” precizia acceptabilă ” poate influența foarte mult LOQ. LOD poate fi echivalent cu LOQ inferior sau poate fi mai mic decât LOQ inferior. În această din urmă situație, testul poate detecta ADN CMV, dar valoarea nu poate fi cuantificată cu exactitate. În aceste cazuri, Laboratorul ar putea raporta rezultatul ca fiind “detectat, dar sub LOQ”; unele laboratoare raportează acest lucru ca fiind “scăzut pozitiv.”Laboratorul ar trebui să poată furniza atât LOD, cât și LOQ; de exemplu, în laboratorul nostru LOD al testului de încărcare virală CMV este de 100 copii/mL, în timp ce LOQ este de 300 copii/mL. După consultarea clinicienilor, s-a luat decizia de a raporta valori de 100-300 copii/mL ca rezultate “scăzute pozitive”, în timp ce acele >300 copii/mL sunt raportate ca valoare întreagă.
deși testele moleculare foarte sensibile sunt adesea importante pentru detectarea agenților patogeni infecțioși, este posibil să nu fie cazul testelor ADN CMV. Semnificația clinică a nivelurilor scăzute de ADN CMV (<100-500 copii/mL) poate fi dificil de interpretat, în special dacă sunt testate probe de sânge integral, deoarece nivelurile scăzute de ADN CMV din sângele integral sau plasmă nu se corelează întotdeauna cu dezvoltarea bolii. Unele studii au fost efectuate pentru a determina pragul de tratament, inclusiv un studiu de Istorie Naturală a bolii CMV la pacienții cu transplant hepatic . Folosind testul COBAS Amplicor Monitor (Roche Molecular Diagnostics), autorii au arătat că o valoare a încărcăturii virale de 2000-5000 copii/mL corelată cu dezvoltarea bolii organelor finale. Această valoare limită este dependentă de test și poate fi mai mare sau mai mică pentru alte Ldt-uri. Studiile au arătat, de asemenea, că atât valoarea încărcăturii virale, cât și rata de modificare a încărcăturii virale sunt predictori importanți ai dezvoltării bolii active . Cu cât este mai rapidă rata de creștere a valorii încărcăturii virale, cu atât este mai mare riscul de a dezvolta boala CMV. Odată ce testele sunt recalibrate cu standardul internațional, se poate identifica un LOD universal relevant din punct de vedere clinic și un LOQ inferior. Pe baza datelor și experienței disponibile în prezent, 250-500 UI/mL poate fi o LOD adecvată și/sau un LOQ mai mic.
având în vedere că majoritatea Ldt-urilor utilizează tehnologii de reacție în lanț a polimerazei în timp real, gama liniară a testelor de încărcare virală CMV este de obicei de cel puțin 6 log10; de exemplu, testul poate detecta de la 2,0 log10 copii/mL (100 copii/mL) la 7,0 log10 copii/mL (10 milioane copii/mL). O revizuire a testelor de încărcare virală CMV efectuate în 2009 la laboratoarele medicale Emory a arătat că din cele aproximativ 8500 de teste de încărcare virală ADN CMV efectuate pe probe de plasmă, 671 (7,9%) au fost pozitive. Dintre acestea, 394 (58,7%) au fost <1000 copii/mL, 169 (25,2%) au fost între 1000 și 10 000 copii/mL, iar 63 (9,4%) au fost între 10 000 și 100 000 copii/mL. În plus, 45 (6,7%) au avut o încărcătură virală de ADN CMV >100 000 copii/mL. Deși valorile scăzute ale încărcăturii virale sunt frecvente, semnificația lor clinică este neclară. Valorile foarte mari ale încărcăturii virale sunt mai puțin frecvente și, atunci când apar, sunt de obicei observate la pacienții imunosupresați cu infecție CMV primară sau la cei cu boală foarte severă. Deoarece valorile încărcăturii virale de până la 10 milioane pot fi prezente la unii indivizi, limita superioară de cuantificare a unui test ar trebui să fie în acest interval.
interpretarea diferențelor importante în valorile încărcăturii virale longitudinale la un pacient individual necesită o înțelegere a preciziei sau reproductibilității testului. De obicei, variabilitatea testelor de încărcare virală este cea mai mare în apropierea LOQ-ului inferior și superior și cea mai mică în intervalul mediu al testului. Ca urmare, modificările mici ale valorilor scăzute ale încărcăturii virale nu sunt semnificative; de exemplu, nu există nicio diferență clară între rezultatele la un pacient la care valoarea încărcăturii virale a crescut de la 200 copii/mL la 500 copii/mL, deoarece această diferență se încadrează în variabilitatea testului. Cele mai utile date privind modificările importante din punct de vedere clinic ale valorilor încărcăturii virale provin din experiența cu HIV-1. Pentru aceste teste aprobate de FDA, variabilitatea testului variază de la 0,1 log10 copii/mL la 0,2 log10 copii/mL, comparativ cu variabilitatea biologică observată la persoanele netratate infectate cronic, care este de aproximativ 0,3 log10 copii / mL. Prin urmare, se consideră că modificările încărcăturii virale de >0,5 log10 copii/mL reprezintă modificări importante din punct de vedere biologic în replicarea virală. Deși valoarea de 0,5-log10 copii / mL a fost adoptată pe scară largă pentru utilizarea cu mulți alți agenți patogeni virali, este posibil să nu fie exactă pentru CMV. Deoarece variația biologică a CMV nu este cunoscută, modificări importante ale valorilor încărcăturii virale au fost evaluate istoric numai pe baza variabilității testului. Lucrările ulterioare cu HIV-1 au arătat că SD-ul testului trebuie să fie de 0,15 log 10 copii/mL pentru a discerne modificările de 5 ori ale valorilor încărcăturii virale . Pentru Ldt-urile CMV, variabilitatea testului este de așteptat să nu fie mai bună decât cea observată pentru testele de încărcare virală HIV-1 aprobate de FDA și poate fi mai mare, în special în apropierea LOQ-ului inferior . Prin urmare, la detectarea valorilor încărcăturii virale CMV de <1000 copii/mL, modificări de < 5 ori (0.7 log10) va reflecta rareori modificări importante din punct de vedere clinic în replicarea virală. Pentru valori > 1000 copii / mL, modificările de 3 ori (0,5 log10) ale încărcăturii virale pot fi semnificative, deși acest lucru poate diferi între Ldt-uri. Unele centre raportează încărcături virale ca copii / mL și ca log10 copii / mL, deoarece clinicienii pot fi mai puțin susceptibili să interpreteze excesiv mici modificări ale valorilor încărcăturii virale atunci când sunt exprimate ca valori log10.
o probă inițială pentru testarea încărcăturii virale trebuie colectată în ziua inițierii tratamentului cu CMV, chiar dacă testarea încărcăturii virale CMV a fost efectuată cu câteva zile mai devreme. Creșteri rapide ale încărcăturilor virale CMV pot apărea în câteva zile la pacienții cu boală netratată, ceea ce face importantă valoarea încărcăturii virale CMV la momentul tratamentului. Dacă valorile încărcăturii virale depășesc LOQ-ul superior, se recomandă ca laboratorul să dilueze specimenul pentru a determina valoarea reală a încărcăturii virale. Odată inițiată terapia, intervalul ideal pentru monitorizare este săptămânal, deoarece timpul de înjumătățire al ADN-ului CMV în plasmă este de 3-8 zile . Un alt motiv pentru utilizarea acestui interval este că nu este neobișnuit ca încărcătura virală a ADN-ului CMV să crească la un pacient la câteva zile după inițierea tratamentului, iar acest lucru poate fi interpretat greșit ca eșec al tratamentului. Deoarece pacienții cu ADN persistent în plasmă sau sânge integral prezintă un risc crescut de recidivă , ghidurile actuale recomandă continuarea terapiei antivirale până când valorile încărcăturii virale sunt nedetectabile. Unii pacienți au niveluri scăzute persistente de ADN CMV în plasmă sau sânge integral și nu dezvoltă niciodată boală CMV sau recidivă. La acești indivizi, este mai util să urmăriți tendințele valorilor încărcăturii virale în timp decât să evaluați semnificația oricărei valori a încărcăturii virale date. Modelele de încărcare virală care sunt îngrijorătoare pentru virusul rezistent la medicamente includ cele care nu scad după 2 săptămâni de terapie adecvată , cele cu un platou în rata declinului încărcăturii virale și cele care au o scădere inițială și apoi o creștere ulterioară a încărcăturii virale în timpul tratamentului. Acești pacienți trebuie evaluați pentru detectarea virusului rezistent prin secvențierea genelor UL97 și/sau UL54 (polimerază) direct dintr-o probă plasmatică.
testele de încărcare virală a ADN-ului CMV sunt concepute astfel încât să nu reacționeze încrucișat cu alte herpesvirusuri. La un pacient imunocompromis, detectarea a 2 herpesvirusuri, de exemplu, CMV și virusul Epstein-Barr, reflectă reactivarea ambelor virusuri și nu se datorează reactivității încrucișate.
