Activitățile de curățare a radicalilor liberi ale Cnidium officinale Makino și Ligusticum chuanxiong Hort. extractele metanolice | Jiotower
rezultate și discuții
mai multe evenimente patologice, cum ar fi procesul de inflamație, boala arterială coronariană și fenomenele de îmbătrânire, sunt asociate cu generarea ROS. Astfel, în acest studiu, am demonstrat că extractele de C. officinale și L. chuanxiong posedă, de asemenea, proprietăți antioxidante, deoarece au fost capabile să protejeze celulele de deteriorarea oxidativă și, de asemenea, să inhibe generarea de ROS.
pentru testul TEAC, Tabelul 1 prezintă capacitatea antiradicală A C. officinale și L. chuanxiong într-un sistem apos, măsurată prin testarea radicalilor ABTS. Testul ABTS a fost utilizat pentru a măsura activitatea antioxidantă totală în materialele vegetale. Așa cum este folosit de Rice-Evans și Miller, TEAC reflectă capacitatea relativă a hidrogenului sau a antioxidanților donatori de electroni de a elimina cationul radical ABTS în comparație cu cel al Trolox. În acest studiu, C. officinale și L. chuanxiong în intervalul de 0-150 hectog/ml a prezentat activitate antiradicală, iar activitatea antiradicală a acestor probe a crescut odată cu creșterea concentrației extractelor, indicând faptul că C. officinale și L. chuanxiong au prezentat activitate de eliminare a radicalilor liberi. După cum se poate observa în tabelul 1, capacitatea de curățare a C. officinale și L. chuanxiong pe cationul radical ABTS a fost comparată cu cea a acidului ascorbic. În plus, C. officinale a arătat un efect de curățare marcat asupra radicalilor cationici ABTS comparativ cu cel al acidului ascorbic standard, determinat prin TEAC.
Table 1
Antioxidant activities of methanol extracts of C. officinale and L. chuanxiong
TEAC (mM TE/g) | ORAC (mM TE/g) | DPPH (mM TE/g) | |
---|---|---|---|
CO | 2.022 ± 0.538 | 0.484 ± 0.162 | 2.942 ± 0.495 |
LC | 1.249 ± 0.224 | 0.260 ± 0.015 | 4.658 ± 1.183 |
AAa | 0.828 ± 0.010 | 0.030 ± 0.018 | 1.332 ± 0.027 |
valorile sunt mijloace SD de trei măsurători. CO: C. officinale, LC: L. chuanxiong, AA: acid Ascorbic, TEAC: capacitate antioxidantă echivalentă cu Trolox, ORAC: capacitate de absorbție a radicalilor de oxigen, DPPH: 1,1-difenil-2-picrilhidrazil
de asemenea, tabelul 1 prezintă ORAC-ul probelor. Proteina foarte fluorescentă, beta-ficoeritrina (PE), derivată din numeroase specii de alge roșii, a fost utilizată ca țintă a deteriorării radicalilor liberi. Radicalii peroxilici generați de descompunerea termică a AAPH potolesc fluorescența ficoeritrinei, în timp ce adăugarea unui antioxidant care reacționează rapid cu radicalii peroxil inhibă pierderea intensității fluorescenței și această inhibare este proporțională cu activitatea antioxidantă. Rezultatele finale pot fi calculate folosind diferențele în zonele de sub curbele de descompunere a ficoeritrinei dintre martor și un eșantion și sunt exprimate în echivalenți de Trolox. În acest studiu, rezultatele au arătat că C. officinale și L. chuanxiong prezintă o capacitate antioxidantă cu un profil similar. În plus, testul ORAC a demonstrat o îmbunătățire clară a conținutului de antioxidanți din extractul de C. officinale în comparație cu acidul ascorbic, ca standard.
modelul radical DPPH stabil este o metodă relativ rapidă și utilizată pe scară largă pentru evaluarea activității de curățare a radicalilor liberi. Efectul antioxidanților din plante asupra curățării radicalilor DPPH se crede că se datorează capacității lor de donare a hidrogenului. Scăderea absorbanței radicalului DPPH cauzată de antioxidanți din cauza reacției dintre moleculele antioxidante și radical, progresează, ceea ce duce la eliminarea radicalului prin donarea de hidrogen. Tabelul 1 ilustrează o scădere semnificativă a concentrației radicalilor DPPH datorită capacității de curățare a extractelor C. officinale și L. chuanxiong și a standardului. Activitatea de curățare a radicalilor liberi a crescut, de asemenea, odată cu creșterea concentrației. Aceste rezultate au indicat că ambele extracte au un efect vizibil asupra eliminării radicalilor liberi. Extractul de metanol din L. chuanxiong a arătat o activitate mai puternică de curățare a DPPH decât extractul de metanol C. officinale în comparație cu standardul. Am folosit acid ascorbic ca standard.
în plus, capacitatea de a elimina radicalii specifici poate fi vizată. Deoarece diferite ROS au mecanisme de reacție diferite, pentru a determina complet activitatea antioxidantă împotriva unei game largi de ROS, trebuie efectuat un set mai cuprinzător de teste. Radicalul anionului superoxid (O2·–) este un factor important în sistemele biologice. Pentru a determina dacă inhibarea reducerii NBT s-a datorat activității de curățare a superoxidului, a fost utilizat un sistem non-enzimatic de generare a superoxidului. În sistemul PMS-NADH-NBT, anionul superoxid, derivat din oxigenul dizolvat din reacția de cuplare a PMS-NADH, reduce NBT. Scăderea absorbanței la 560 nm cu antioxidanți indică consumul de anion superoxid în amestecul de reacție. Tabelul 2 prezintă inhibarea procentuală a generării de radicali superoxid cu 0-150 hectog/ml de extracte de metanol C. officinale și L. chuanxiong comparativ cu cea indicată de acidul ascorbic. C. officinale și extractele de metanol L. chuanxiong au arătat o inhibare dependentă de doză a radicalilor superoxid. Atât extractele de C. officinale, cât și L. chuanxiong au o activitate puternică de curățare a radicalilor superoxid (IC50 = 96,30 și 93,85 hectolitri/ml). Având în vedere rezultatele obținute, se poate anticipa că extractele de metanol din C. officinale și L. chuanxiong au activitate antioxidantă, demonstrată aici prin eliminarea radicalului superoxid. Valorile IC50 ale tuturor acestor extracte au fost mai mari decât cele ale acidului ascorbic la care s-a obținut IC50 la concentrația de 8,76 hectare.
Tabel 2
activități de eliminare a radicalilor liberi și de chelare a metalelor (IC50 hectog / ml) de extracte de metanol de C. officinale și L. chuanxiong
O2· | H2O2 | OH· | nu * | chelarea metalelor | |
---|---|---|---|---|---|
CO | 96.259 ± 8.024 | 136.280 ± 2.307 | 119.442 ± 7.444 | 57.252 ± 8.973 | 138.425 ± 13.292 |
LC | 93.848 ± 9.529 | 136.318 ± 2.626 | 113.107 ± 8.890 | 76.502 ± 3.033a* | 17.451 ± 5.858a* |
AAb | 8.762 ± 4.569 | 8.053 ± 3.677 | 3.034 ± 0.191 | 9.885 ± 0.478 | 43.235 ± 8.543 |
Values are means ± SD of three measurements. CO: C. officinale, LC: L. chuanxiong, AA: Ascorbic acid, O2·–: superoxide radical, H2O2: hydrogen peroxide, OH·: hydroxyl radical, NO·: nitric oxide radical
eliminarea H2O2 de către ambele extracte poate fi atribuită fenolilor lor, care pot dona electroni H2O2, neutralizându-l astfel în apă. Capacitățile de curățare H2O2 dintre cele două extracte pot fi atribuite abilităților lor de donare de electroni. Capacitatea ambelor extracte de a elimina eficient H2O2 este prezentată în tabelul 2, în care este comparată cu cea a acidului ascorbic ca standard. Extractele au fost capabile să elimine H2O2 într-o manieră dependentă de concentrație. C. officinale și L. extractele de chuanxiong (0-150%/mL) au prezentat IC50 de 136,28 și respectiv 136,32% / ml, în timp ce acidul ascorbic a prezentat 8,05%/ml. Corelația dintre valorile C. officinale și L. chuanxiong a fost nesemnificativă statistic. Deși H2O2 în sine nu este foarte reactiv, uneori poate provoca citotoxicitate dând naștere radicalilor hidroxil în celulă. Astfel, eliminarea H2O2 este foarte importantă în sistemele alimentare.
C. officinale și L. extractele de metanol chuanxiong au fost, de asemenea, evaluate pentru capacitatea lor de a elimina radicalii hidroxil folosind testul de degradare a dezoxiribozei. În acest studiu, rezultatele au arătat că toate probele au fost capabile să inhibe degradarea dezoxiribozei (0-150 hectogg/ml), cu un profil similar. Studiile biochimice au arătat că C. officinale și L. chuanxiong au determinat o inhibare dependentă de concentrație a degradării dezoxiribozei. La nivelul valorii IC50, C. officinale (119,44%/ml) și L. chuanxiong (113,11%/ml) au prezentat aceeași potență . Capacitățile totale de curățare a radicalilor Oh ale fiecărui extract au fost comparate cu cele ale acidului ascorbic.
extractele de plante au fost măsurate și comparate pentru activitățile lor de curățare a radicalilor liberi împotriva radicalilor de oxid nitric. Activitatea de curățare NO· a extractelor de metanol C. officinale și L. chuanxiong a fost examinată utilizând SNP ca Donator NO*. No eliberat din SNP reacționează cu oxigenul pentru a produce nitriți. No scavenger concurează cu oxigenul în reacția cu NO * eliberat din soluția SNP în PBS. În acest studiu, extrase din C. officinale și L. chuanxiong nu a prezentat capacitate de curățare·, deși s-au observat unele diferențe. Nu * activitatea de curățare a C. officinale a fost mai semnificativă decât L. chuanxiong. Această inhibare ar putea fi, de asemenea, rezultatul eliminării directe a NO· prin extracte. C. officinale a avut cea mai mare activitate pentru a stinge nici un radical. Valorile IC50 au fost de 57,25 și, respectiv, 76,50 hectolitri/ml pentru C. officinale și, respectiv, L. chuanxiong.
a fost estimată chelarea ionilor feroși de către extractele C. officinale și L. chuanxiong, în care ferozina formează cantitativ complexe cu Fe2+. În prezența agenților de chelare, formarea acestui complex este întreruptă, împiedicând astfel formarea culorii roșii împărtășite și de complex. Măsurarea acestei modificări de culoare permite, prin urmare, estimarea activității de chelare a chelatorului coexistent. În acest test, atât extractele, cât și compusul antioxidant standard au interferat cu formarea complexului feros–ferozină, sugerând că au activitate chelatoare, captând ionul feros înainte de a putea forma un complex cu ferozină. Așa cum se arată în tabelul 2, formarea complexului Fe2+–ferozină nu este completă în prezența extractelor de metanol C. officinale și L. chuanxiong, indicând faptul că ambele extracte chelează fierul. Absorbanța complexului Fe2 + – ferozină a scăzut liniar într-o manieră dependentă de doză (0-150 octoxg/ml). Diferența dintre cele două extracte de C. officinale și L. chuanxiong și martor a fost semnificativă statistic. Capacitățile de chelare a metalelor din extractele de metanol de C. officinale și L. chuanxiong și acid ascorbic (toate la IC50 de la 7G/ml) au fost de 138,43, 17,45 și 43.24, care s-a dovedit a fi o diferență semnificativă între extrase și controale.
pentru a determina efectele C. officinale și L. chuanxiong asupra viabilității celulare, celulele N2a au fost expuse la C. officinale și L. chuanxiong (50-500 hectolitri/ml) pentru un timp de incubare de 1 oră. în Figura 1, Testul MTT după 1 oră de incubare cu C. officinale nu indică nicio diferență semnificativă de viabilitate în culturile de celule N2A tratate în comparație cu martor. Prin testul MTT după 1 oră cu L. chuanxiong, s-a observat o creștere semnificativă a viabilității la L. celulele N2A tratate cu chuanxiong 500/ml în comparație cu grupul de control. După cum se arată în Figura 2, nu s-a efectuat nicio determinare după 1 oră de incubare în prezența C. officinale și L. chuanxiong (50-500 hectolitri/ml). Tratamentul cu L. chuanxiong nu a redus semnificativ eliberarea de NO în comparație cu grupul de control, dar 500 hectolitri/ml C. officinale a scăzut semnificativ eliberarea de NO. Din acest rezultat, se poate concluziona că extractele metanolice de C. officinale și L. chuanxiong, la dozele utilizate, nu au efecte de toxicitate.
efectul extractelor metanolice C. officinale și L. chuanxiong asupra viabilității celulare în celulele N2a. Valorile sunt mijloace SD de trei măsurători. * P < 0,05 comparativ cu normal netratat (ANOVA / Tukey)
efectul C. officinale și L. chuanxiong extracte metanolice pe eliberarea de oxid nitric în celulele N2a. Valorile sunt mijloace SD de trei măsurători. * P < 0,05 comparativ cu valorile normale netratate. (ANOVA/Tukey)