Performanța clinică a testului HPV Roche Cobas 4800 | Jiotower

TEXT

papilomavirusul uman (HPV) este unul dintre cele mai frecvente virusuri cu transmitere sexuală la nivel mondial și contribuie major la cancer, provocând aproape 60 000 de cazuri noi de cancer pe an în Europa (1) și conducând la dezvoltarea cancerului de col uterin la femei. HPV16 și HPV18 sunt cele mai cancerigene (2, 3), deoarece aproximativ 70% din toate cancerele de col uterin prezintă infecții cu HPV16 sau HPV18 (4). Aproape 30% din cancerele de col uterin sunt ratate prin screeningul citologic cervical inițial (5), astfel încât sunt necesare teste precise și obiective pentru cancerul de col uterin asociat HPV care utilizează tehnici moleculare mai sensibile pentru a oferi o prevenire și un tratament eficient pentru a reduce riscurile viitoare și incidența cancerului de col uterin.

testul Roche Cobas 4800 HPV (Cobas) este o metodă moleculară nouă bazată pe PCR în timp real (RT-PCR) (6, 7), cu un sistem complet automatizat care permite procesarea rapidă și eficientă a probelor. Cobas poate detecta HPV16, HPV18, 12 Alte HPV-uri cu risc ridicat (hrHPVs) (HPV31, -33, -35, -39, -45, -51, -52, -56, -58, -59, -66, și -68, ca rezultat cumulat), iar controlul cu globină de la sută în mod independent în același PCR. Scopul principal al studiului nostru a fost de a evalua caracteristicile tehnice și clinice de performanță ale Cobas. Probele de col uterin de la 6.056 de femei trimise la Departamentul de patologie de la școala de Medicină Icahn de la Muntele Sinai pentru examinarea de rutină a leziunilor cervicale între noiembrie 2011 și februarie 2012 au fost colectate într-un mediu citologic pe bază de lichid (conservat; Hologic, Marlborough, MA) și se păstrează la 4 centimetrii C până la utilizare.

o sută optzeci de exemplare au fost testate pentru genotipurile hrHPV atât prin testul Roche Cobas 4800 HPV, cât și prin testul ADN Hrhpv Digene Hybrid Capture 2 (HC2) (Tabelul 1), eventualele discrepanțe fiind rezolvate utilizând testul de genotipare HPV linear Array (LA) (Roche Molecular Systems, Pleasanton, CA) (8). Conform testului chi-square al lui Pearson, a existat o diferență semnificativă în numărul de probe pozitive și negative identificate prin cele două teste HPV (P < 0,001). Cu toate acestea, concordanța dintre cele două teste a fost statistic puternică , cu un nivel de acord de 88,33% (P = 0,0218) și coeficientul kappa al lui Cohen de 0,767 (interval de încredere 95%, 0,674 până la 0,860; P < 0,001), unde intervalele de încredere 95% ale valorilor kappa au fost deduse dintr-o distribuție binomială.

în probele discordante, testul la HPV a detectat genotipuri HPV cu risc scăzut (lrHPV) în 50% (2/4) din probele care au fost HC2 pozitive și Cobas negativ și în 13,33% (2/15) din probele care au fost HC2 negativ și Cobas pozitiv. HPV53 a fost găsit în două probe care au fost HC2 pozitive și Cobas negative, sugerând că sondele din kitul Digene au reacționat încrucișat cu acest genotip HPV. Această observație nu este surprinzătoare, deoarece reactivitatea încrucișată a testului HC2 cu genotipurile lrHPV, în special HPV53, a fost observată anterior (9). Consecința reactivității încrucișate a genotipului lrHPV într-un test HPV este un număr crescut de rezultate fals pozitive. Acest lucru ar putea duce la o anchetă excesivă și la un tratament excesiv prin testarea ulterioară a femeilor care posedă numai genotipuri lrHPV și prezintă de fapt un risc scăzut de a dezvolta cancer de col uterin. În două probe HC2-negative/Cobas-pozitive, HPV62 și HPV89 (CP6108) au fost detectate în ambele probe, iar HPV42, HPV54, HPV55, HPV61, HPV70 și HPV84 au fost detectate într-una dintre probe, sugerând că infecția mixtă cu HPV duce la rezultate fals pozitive prin testul cobas HPV.

testul la HPV a detectat genotipuri hrHPV în niciuna dintre probele care au fost HC2 pozitive și Cobas negative (0/4) și în 80% (12/15) din probele care au fost HC2 negative și Cobas pozitive. Testul HC2 nu a reușit să detecteze hrHPV în aceste probe, ceea ce indică faptul că testul HC2 a ratat mai multe genotipuri hrHPV decât testul Cobas, ceea ce înseamnă că Cobas este un test de screening potențial mai eficient datorită sensibilității și preciziei mai bune. În schimb, HPV nu a fost detectat prin testul la HPV la 6,67% (1/15) din probele HC2-negative/Cobas-pozitive. Cu toate acestea, în ansamblu, diferența de detectare a hrHPV între testele HC2 și Cobas a fost încă nesemnificativă din punct de vedere statistic (inqut2 = 2.901, P = 0.0885).

șaizeci și opt de probe au fost apoi utilizate pentru a determina reproductibilitatea testului cobas HPV. Reproductibilitatea între testele inițiale și cele repetate, calculată cu un tabel standard de urgență 2 pe 2, a fost de 93,55%; coeficientul kappa între rezultatele primei și celei de-a doua runde de testare Cobas a fost de 0,869 (IÎ 95%, 0,744 până la 0,993; P < 0,001). Puterea acestui Acord este considerată foarte bună, sugerând că testul este extrem de fiabil.

o sută optzeci și șapte de probe au fost testate prin testul cobas HPV pentru a determina diferența de detectare a HPV între probele prealiquoted și postaliquoted. Doar 7 probe au fost nepotrivite, pentru o rată de 3,74% (IÎ 95%, 1,02% până la 6,46%). Analiza statistică a relevat faptul că diferența dintre eșantioanele prealiquoted și postaliquoted nu a fost semnificativă (inqut2 = 0.233, P= 0.36290). Deoarece nu s-a observat o creștere a ratei HPV pozitive înainte și după procesul citologic (prealiquot versus postaliquot), contaminarea încrucișată a probelor în timpul procesării citologice este extrem de rară. Testarea HPV după citologie poate îmbunătăți semnificativ fluxul de lucru și poate reduce alicotarea inutilă atunci când se intenționează un test HPV reflex pentru citologie anormală.

în cele din urmă, 5.621 de probe au fost testate folosind testul cobas HPV pentru a determina efectele vortexării și învârtirii (înainte de testarea Cobas) asupra ratelor de eșec. Dintre cele 1.380 de probe prelucrate prin vortexare, rata de eșec a fost de 4.57% (IÎ 95%, 3,65% până la 5,91%). În schimb, dintre cele 4.241 de probe prelucrate prin rotire, rata de eșec a fost de 1,16% (95% CI, 0,84% până la 1,48%). Testul chi-square al lui Pearson a arătat că diferențele dintre ratele de eșec între probele vortexate și cele ușor învârtite au fost extrem de semnificative (inqu2 = 59.983, P < 0.0001), cu o învârtire ușoară fiind recomandată pentru a reduce rata de eșec a lui Cobas.

în concluzie, testul Cobas 4800 HPV a demonstrat un grad mai mare de sensibilitate și specificitate în detectarea genotipurilor hrHPV decât testul digene HC2 hrHPV. Testul Cobas a avut, de asemenea, un nivel mai scăzut de reactivitate încrucișată cu genotipurile lrHPV decât testul HC2, după cum reiese din cele mai puține cazuri fals pozitive. Cu toate acestea, diferența de performanță generală între aceste două teste nu este semnificativă statistic.