prevalența și unele mecanisme posibile de rezistență la colistină în rândul Pseudomonas aeruginosa Multirezistent și extensiv rezistent la medicamente

Introducere

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) este un agent patogen oportunist, întâlnit în mod obișnuit în mediu, cum ar fi solul, apa, plantele și mediul spitalicesc, cu rezistență intrinsecă cunoscută la provoca infecții care pun viața în pericol. Este considerată a doua cauză comună de sepsis în unitățile de terapie intensivă (UCI) și poate provoca pneumonie asociată ventilatorului, infecții ale rănilor și infecții ale tractului urinar (UTI). Multe studii au raportat creșterea mortalității și morbidității infecțiilor asociate cu P. aeruginosa, în special a celor care prezintă modele de rezistență la mai multe medicamente.1-3

apariția multidrog-rezistente (MDR) sau extensiv rezistente la medicamente (XDR) sau pandrug-rezistente (PDR) P. aeruginosa devine o problemă semnificativă de sănătate publică care poate duce la o terapie antimicrobiană întârziată sau la eșecul acesteia și la creșterea ratei mortalității, în special cu apariția P. aeruginosa rezistentă la carbapenem. Deci, atenția este necesară deoarece aceste tulpini rezistente pot prezenta rezistență la toate antimicrobienele disponibile sau au prezentat susceptibilitate numai la cele toxice, cum ar fi colistina sau polimixinele, lăsând nicio alegere pentru echipa de îngrijire a sănătății în tratamentul infecțiilor severe asociate cu MDR P. Aeruginosa.4

recent, apariția rezistenței la polimixine a fost observată la anumite specii de Enterobacteriaceae, cum ar fi K. pneumoniae, E. coli, Enterobacter aerogenes și Enterobacter cloacae, datorită utilizării sale largi pentru controlul infecțiilor în medicina veterinară. Rezistența la colistină a devenit o provocare majoră pentru tratamentul infecțiilor care pun viața în pericol, în special prin coexistența genelor mcr-1 cu alte gene multiple de rezistență la medicamente, cum ar fi genele ESBL, MBL, NDM, cu posibilitatea apariției rezistenței la pan-medicament.5,6

colistina, cunoscută sub numele de polimixină E, este un membru al unei familii de polipeptide cationice cunoscute sub numele de polimixine. Această familie de antibiotice se caracterizează prin prezența unui lanț lateral lipofil de acil gras. În zilele noastre, colistina este reintrodusă în terapia medicală și considerată ultima soluție pentru tratamentul infecțiilor severe cauzate de petele MDR și XDR. În general, acțiunea polimixinelor asupra bacteriilor depinde în principal de interacțiunea electrostatică dintre antibioticul încărcat pozitiv și grupul fosfat încărcat negativ al lipidei a localizat pe membrana exterioară după legare, difuzează prin membrana exterioară, spațiul periplasmic și interacționează cu membrana interioară. Polimixinele provoacă destabilizarea membranei exterioare, formarea porilor, creșterea permeabilității, scurgerea la conținutul citoplasmatic urmată de liza celulară.7

rezistența la colistină apare în principal datorită modificării chimice prin adăugarea enzimatică a fosfoetanolaminei la grupa 4 – fosfat a fracțiunii lipidice a lipopolizaharidei, scăzând sarcina net negativă a membranei exterioare, rezultând scăderea afinității polimixinei. Rezistența la colistină poate fi determinată de o mutație codificată cromozomial, așa cum a fost raportată în K. pneumoniae sau de transferul orizontal al rezistenței prin intermediul plasmidei purtătoare a genei rezistente la colistină (mcr-1).8-11

apariția rezistenței la colistină în diferite țări din Asia, Europa și unele țări din Africa a devenit una dintre preocupările globale. As, diseminarea rezistenței la colistină indică capacitatea sa de a transfera orizontal prin plasmide conjugative sau vertical prin mutație cromozomială.12,13 de asemenea, fiind colistin una dintre ultimele linii de tratamente pentru infecții grave, făcând apariția izolatelor de rezistență la colistină care amenință lumea prin apariția unor boli infecțioase netratabile.14 detectarea rezistenței la colistină în Egipt, care este o țară cunoscută prin povara ridicată a bolilor infecțioase și prezența unei restricții scăzute sau deloc asupra utilizării antimicrobiene atât în medicină veterinară, cât și în medicină, indicând apariția unor boli netratabile în zona noastră datorită posibilității de a transfera rezistența la colistină la bacterii foarte rezistente.15

în acest studiu, investigăm prevalența rezistenței la colistină în rândul MDR și XDR P. aeruginosa izolat de la pacienții care suferă de o varietate de infecții în unitatea de terapie intensivă (ati) a Spitalului Universitar Minia din Egipt.

materiale și metode

colectarea izolatelor

o sută șaptezeci și cinci de probe clinice din diferite surse de infecții au fost colectate de la pacienții internați la ATI în Spitalul Universitar Minia, Minia, Egipt, ca parte a procedurilor de rutină spital-laborator. Toate probele clinice au fost cultivate pe agar de soia cu tripticază (Lab M, UK) la 37 C și 42 C pentru 24 de ore. O colonie a fost subculturată pe plăci de agar MacConkey și agar cetrimid. Coloniile izolate au fost identificate în continuare în funcție de morfologia coloniei, fermentarea lactozei, reacțiile biochimice (inclusiv motilitatea sulfuroindolului, catalaza, fierul triplu zahăr, testele ureazei și oxidazei), capacitatea de a crește pe agar cetrimid și de a crește la 42 C. 16 P. coloniile aeruginosa au fost purificate prin striații, iar coloniile pure au fost depozitate la 4 C.

teste de sensibilitate la antibiotice

sensibilitatea la antibiotice prin metoda de difuzie a discului Kirby-Bauer

sensibilitatea la antibiotice împotriva diferitelor clase de antibiotice a fost testată prin metoda de difuzie a discului Kirby-Bauer.17 Antibiotic discuri utilizate au fost amoxicilină/clavulanic (AMC) (20/10 µg), ampicilină/sulbactam (SAM) (20 µg), meropenem (MEM) (10 µg), imipenem (IPM) (10 µg), cefepim (FEB) (30 µg), cefoperazon (CEP) (75 µg), polimixină B (PB) (300 µg), ciprofloxacină (CIP) (5 µg), levofloxacin (LEV) (5 µg), gentamicină (CN) (10 µg), ceftazidim (CAZ) (30 µg), tigeciclină (TGC) (15 µg), amikacina (AK) (30 µg), tobramicină (CF) (10 µg), aztreonam (ATM) (30 µg), piperacilină (PRL) (30 µg), carbenicillin (AUTO) (100 µg) (Oxid; Basingstoke, marea BRITANIE). Izolatele au fost clasificate ca sensibile, intermediare și rezistente în conformitate cu standardele de interpretare a zonelor de inhibare ale Institutului de standarde clinice de laborator (CLSI) 2018.18

MIC determinarea antibioticului Colistin

metoda de diluare a agarului pe agarul Muller-Hinton a fost utilizată pentru a determina concentrația inhibitoare minimă a colistinei.19 S-a luat în considerare rezistența la colistin dacă CMI este de 0-4-XXT/mL conform ghidurilor standard ale CLSI.18

conform rezultatelor sensibilității la antibiotice, izolatele au fost clasificate la MDR, XDR și PDR conform criteriilor raportate anterior.20

test de difuzie combinată a discului (CDT)

toate izolatele rezistente la colistină (MIC 4) au fost testate folosind EDTA de 100 mM (Sigma-Aldrich; St.268 Louis, MO, SUA) pentru a inhiba activitatea mcr-1, deoarece această concentrație nu a prezentat activitate antimicrobiană. Tulpinile bacteriene au fost cultivate pe Agar Muller-Hinton (Lab M, Marea Britanie) pe care au fost utilizate trei discuri. Un disc a fost saturat cu 10 ecqtl de EDTA de 100 mM pentru a nu asigura inhibarea creșterii bacteriene prin concentrația utilizată de EDTA. Celelalte două discuri au fost disc colistin de 10 hectare și disc Colistin de 10 hectare plus disc EDTA de 10 hectare 100 mm. Izolatele au fost observate pentru o creștere cu 3 mm a diametrului zonei de inhibare a discului colistin/EDTA comparativ cu discul colistin.21

alterarea potențialului Zeta

genele mcr codifică fosfoetanolamin transferaze enzime care atașează enzimatic o parte a fosfoetanolaminei (PEtN) la lipida a a membranei exterioare a bacteriilor Gram-negative conducând la reducerea sarcinii sale negative nete care conferă rezistența la colistină.22

celulelor bacteriene li s-a permis să crească în prezența și absența a 80 de hectolitri/mL EDTA. Apoi, suspensia bacteriană a fost centrifugată la 5000 rpm timp de 5 min la 5 centi C apoi peletele au fost spălate de două ori, după care peletele au fost suspendate în 2 mL de soluție sterilă de 1 mM NaCl ajustată la turbiditatea soluției standard 0.5 McFarland. Probele au fost diluate la 1: 4 folosind NaCl de 1 mm. Potențialul Zeta a fost determinat în 2 mL din proba diluată. Modificările potențialului Zeta induse de EDTA au fost calculate din raportul potențialului Zeta (RZP=ZP+EDTA/ZP-EDTA), unde ZP+EDTA și ZP-EDTA corespund valorilor potențialului Zeta obținute pentru suspensiile bacteriene crescute în prezența sau absența a 80 de hectolitri/ml EDTA, respectiv. RZP de valoare 2.5 de la valoarea de 2.5, considerate drept criterii de identificare a tulpinilor mcr-1 pozitive.21

extragerea ADN-ului

șablonul ADN a fost extras dintr-o cultură de P. aeruginosa peste noapte, așa cum s-a descris anterior.23 o suspensie de pelete bacteriene a fost fiartă timp de 10 min, apoi centrifugată. Supernatantul a fost utilizat direct în testul PCR.

analiza PCR a genelor testate

exotoxina A este un factor important de virulență (un agent citotoxic) al P. aeruginosa în infecțiile clinice. Acest factor inhibă biosinteza proteinelor care duce la leziuni mari ale țesuturilor și organelor. Gena toxA, o secvență genetică inerentă localizată pe cromozomul P. aeruginosa, este utilizată pentru confirmarea P. aeruginosa prin PCR.

PCR a fost efectuat într-un volum total de 25 ilql conținând 1x tampon PCR, 1 ilqmol/L din fiecare primer, 1 ILQ de ADN genomic (aproximativ150 ng), 200 ilqmol/l de amestec dNTP, 2 mmol/L de MgCl2 și 0,05 u/ILQ Taq ADN polimerază. S-au efectuat amplificări PCR pentru toxA FW:CTGCGCGGGGTCTATGTGCC, RV:GATGCTGGACGGGTCGAG într-un cicler termic automat (Eppendorf, Hamburg, Germania) în următoarele condiții: 30 de cicluri de 1 min la 94 CTF c, 1,5 min la 63 CTF C și 1 min la 72 CTF C. 24

genele mcr-1 și mcr-2 au fost următoarele grunduri: mcr-1 FW (5′-AGTCCGTTTTTTTTGTGGC-3′), RV (5′-AGATCCTTGGTCTCGGCTTG-3′) și mcr-2 Fw (5 sec-atgacatcacatcactcttgg-3 sec), RV (5 sec-ttactggataaatgccgcgc-3 sec.25,26 condițiile tehnice au fost de 34 de cicluri de 95 XTC pentru 1 min, 58 XTC pentru mcr – 1 și 52 XTC pentru 30s, 72 XTC pentru 1 min, urmate de prelungirea finală a 72 XTC pentru 5 min.

determinarea inhibării pompelor de eflux prin reducerea MIC utilizând inhibitorul pompei de eflux (CCCP)

metoda de diluare a agarului a fost utilizată pentru determinarea mic utilizând bulionul Mueller-Hinton ajustat cu cationi (Sigma-Aldrich, St Louis, SUA). Microfoanele CCCP (EPI) și colistin au fost determinate pentru izolatele testate. Sub-MIC al CCCP a fost utilizat pentru determinarea efectului său asupra mic colistin; concentrația de CCCP (0,5 CENTIMETRIC MIC) a fost menținută constant la concentrațiile MIC menționate mai sus, în timp ce cea a antibioticului a fost crescută în serie. Mic-urile izolatelor la colistin în absența și prezența CCCP au fost determinate folosind un sub-MIC de CCCP (concentrație finală de 10 mg/L) așa cum s-a descris deja.27 modificările CMI rezultate după adăugarea CCCP au fost calculate ca raport între nivelul CMI al antibioticului fără CCCP și cel al antibioticului adăugat la CCCP. Așa cum a fost descris anterior de Osei Sekyere, amoako28 care a raportat că criteriul pozitiv pentru prezența pompelor de eflux în izolate a fost o scădere de 8 ori a colistinei MIC după adăugarea CCCP.

structura proteică a membranei exterioare

o singură colonie a izolatelor P. aeruginosa testate a fost cultivată în 5 mL bulion LB la 37 centimetric C timp de 2 zile cu agitare la 200 rpm. Celulele au fost centrifugate la 8000 rpm timp de 5 minute. Peletele bacteriene au fost suspendate în 1 mL de tampon de liză (0,05 m Tris HCL, 2% SDS, 10% glicerol), încălzite la 95 centicc timp de 10 minute. Apoi, probele au fost centrifugate pentru 10.000 rpm timp de 30 min. Aproximativ 50 unqql de proteină extrasă au fost amestecate cu tampon de probă (4 mL apă deionizată, 1 mL de 0,5 m Tris HCL, 1,6 mL SDS 10%, 0,4 mL 2-mercaptoetanol, 0,2 mL de 1% (g/v) Bromofenol albastru) (1:1) și separate de 12% dodecil sulfat de sodiu-poliacrilamidă gel (SDS-PAGE).29

profilul de gel Lipopolizaharidic SDS-poliacrilamidă pentru izolatele sensibile la colistină și rezistente la colistină

LP-urile izolatelor testate au fost extrase și purificate prin metoda fenolului apos fierbinte folosind Westphal, Jann30 și analizate Materialul purificat folosind SDS-PAGE, urmată de colorarea argintie specifică carbohidraților.31

rezultate

izolarea Pseudomonas aeruginosa și susceptibilitatea la antibiotice

din 175 de probe colectate de la pacienți care suferă de infecții diferite, 75 de probe (42,8%) au fost pozitive fenotipic pentru P. aeruginosa și pozitiv pentru gena toxA.

testarea sensibilității antimicrobiene a arătat că P. aeruginosa izolată a fost complet rezistentă la amoxicilină/acid clavulanic și s-a observat o rezistență ridicată împotriva ampicilinei/sulbactamului (68%), ceftazidimei (63%) și azetreonamului (60%). S-a observat rezistență moderată atât împotriva tobramicinei, cât și împotriva tigeciclinei (50% fiecare). În plus, a fost demonstrată o rezistență scăzută împotriva imipenemului (6%) și a meropenemului (5,3%) (Figura 1). Conform rezultatelor sensibilității la antibiotice, izolatele rezistente au fost clasificate în MDR (96%), XDR (87%) și Niciun izolat nu a fost clasificat ca PDR. În plus, s-a constatat că, din 75 de izolate, 16 izolate (21,3%) au prezentat rezistență la antibioticul colistin cu MIC de la 4 la 4 la 4 la 256 la 8 la 256 la 5 la 25 la sută la 5 la sută la sută la sută la sută la sută la sută la sută la sută la sută la sută la sută la sută la sută la sută la sută la sută la sută la sută la sută la sută la sută la sută la sută la sută la sută.

Figura 1 modelul de rezistență la antibiotice al tuturor izolatelor izolate de P. aeruginosa.

determinarea genelor Mcr-1 și Mcr-2

gena Mcr-1 a fost detectată fenotipic în izolatele rezistente la colistină prin CDT, unde diferențele dintre diametrele zonelor de inhibare ale discurilor colistin/EDTA și colistin au fost măsurate la 3 mm. rezultatele au arătat că 6 izolate (37,5%) au arătat o creștere a diametrului discului colistin/EDTA cu 3 până la 10 mm în comparație cu discul colistin singur (Figura 2).

Figura 2 detecție fenotipică pentru izolate mcr pozitive prin testul de difuzie combinată a discului (CDT). (A): tulpina mcr-1 pozitivă a arătat o creștere a diametrului zonei discurilor cu colistin și EDTA 3mm în comparație cu colistin în monoterapie. (B): izolatul negativ mcr-1 a prezentat o ușoară modificare (1 mm) a diametrului zonei de inhibare a colistinei și a discului EDTA în comparație cu colistina în monoterapie.

alterarea potențialului Zeta

pe de altă parte, alterarea potențialului Zeta a fost considerată o detectare fenotipică a genelor MCR, dar rezultatele nu au arătat nicio modificare semnificativă a potențialului zeta, cu excepția a 2 izolate.

detectarea genelor de rezistență

detectarea genetică a genelor mcr folosind tehnica PCR convențională a arătat că 8 (50%) izolate au fost pozitive pentru mcr-1, 6 dintre ele au fost pozitive pentru CDT, în timp ce 100% (16 izolate) au fost negative pentru mcr-2.

sensibilitatea la antibiotice a izolatelor rezistente la colistină

sensibilitatea izolatului rezistent la colistină față de alte antibiotice a fost determinată prin metoda difuziei discului Kirby-Bauer, rezultatele au arătat că 100% dintre izolate au fost rezistente la amoxicilină/clavulanică, în timp ce rezistența la ampicilină/sulbactam, cefepimă și tobramicină a fost de 78,12%, 71,87% și, respectiv, 68,75%. Cele mai eficiente medicamente au fost meropenem, imipenem și ciprofloxacină (Figura 3)

Figura 3 Modelul rezistenței la antibiotice a izolatelor rezistente la colistină.

.

determinarea inhibării pompelor de eflux prin reducerea MIC utilizând CCCP

prin studierea efectului de 0,5 MIC al CCCP asupra MIC colistinei, s-a constatat că numai 3/16 izolate (P6, P8 & P16) (18,75%) au arătat o reducere a mic-urilor colistinei de 8 ori (Tabelul 1) în prezența CCCP. Din rezultatele anterioare, izolatul nr. S-a constatat că 16 are mecanism de eflux și gena mcr-1.

Tabelul 1 izolate rezistente la colistină, unele mecanisme posibile de rezistență la colistină și susceptibilitatea lor la alte antibiotice

membrana exterioară SDS-Pagina profil

Tabelul 2 și Figura 4 arată că cinci benzi cu greutăți moleculare de 66,7, 56,06, 47,8, 40,18 și 23.6 KDa au fost stabile în izolate sensibile și rezistente, în timp ce o bandă cu o greutate moleculară de 21 kDa a fost găsită numai în tulpinile rezistente la colistină care au fost P1 (mcr-1 pozitiv) și P12 (mcr-1 negativ).

Tabelul 2 greutăți moleculare și cantitatea % din proteinele extrase din membrana exterioară a P. Aeruginosa rezistentă la colistină și sensibilă la colistină

Figura 4 membrana exterioară SDS-Pagina tulpinilor rezistente și sensibile la colistină. Banda 1: Marker proteic, banda 2 și banda 3: tulpini rezistente la colistină (P1 & P12), benzile 4-6: tulpini sensibile la colistină.

Lipopolizaharida (LPS) SDS-PAGE

Lipopolizaharida SDS-PAGE colorată cu argint a arătat că izolatele negative mcr-1 rezistente la colistină (P3, P6 și P10) nu au prezentat niciun model de benzi LPS (repetări ale antigenului O sau miez LPS) care au evidențiat posibilitatea pierderii lor și rezistența acestor izolate la colistină. Pe de altă parte, tulpina pozitivă mcr-1 rezistentă la colistină a prezentat repetări ale antigenului O (figura 5, banda 5) care diferă de modelul de repetări ale antigenului O al tulpinii sensibile la colistină (Figura 5, banda 4), în timp ce ambele au prezentat nucleul LPS. Aceste rezultate pot indica prezența LP modificate în tulpina mcr-1 pozitivă.

Figura 5 LPS benzi model. Benzile 1, 2 & 3: tulpini negative mcr-1 rezistente la colistină (P3, P6 & P10, respectiv), banda 4: tulpini sensibile la colistină și banda 5: tulpini pozitive mcr-1 rezistente la colistină (P1). Repetările antigenului O sunt în cutie și săgeata se referă la miezul LPS.

discuție

recent, apar tulpini bacteriene patogene multirezistente în care majoritatea antibioticelor disponibile nu sunt eficiente împotriva lor.6,32-36 polimixinele considerate ultima soluție pentru tratamentul infecțiilor bacteriene rezistente la mai multe medicamente, astfel încât studierea apariției rezistente la colistină a fost o necesitate. Polimixinele și-au arătat activitatea prin interacțiunea lor electrostatică între ele și fragmentele încărcate negativ pe lipidul a al bacteriilor Gram-negative, rezultând destabilizarea membranei exterioare și scurgerea conținutului citoplasmatic și a lizei.37,38

s-a constatat că cea mai frecventă cauză a rezistenței la polimixină este modificarea LPS prin adăugarea de 4 – amino-4-deoxi-l-arabinoză (Lara4N) și fosfoetanolamină (codificată de gene de tip mcr) sau galactozamină la lipida a a miezului LPS. Ca urmare, o scădere a încărcăturii nete negative a reziduurilor de fosfat afectează afinitatea polimixinei la membrană sau datorită efectului sistemelor de reglementare cu două componente (TCSs) pmrA/pmrB și phoP/phoQ.39

în studiul nostru, am detectat rezistența la colistină în funcție de rezultatele MICs urmate de testarea lor pentru prezența fosfoetanolaminei transferazei mcr-1 folosind metode fenotipice și detectarea mcr-1genului. Metodele fenotipice depind de faptul că fosfoetanolamina mcr-1 este metaloproteina de zinc. Deci, orice scădere a zincului va scădea MICs de colistină în izolate pozitive pentru mcr-1. Fiind enzima de codificare mcr-1, o metaloproteină de zinc permite utilizarea EDTA ca chelator metalic pentru a reduce zincul în medii și a afecta mic-urile colistinei și potențialele zeta ale izolatelor pozitive mcr-1.40

studiul nostru a arătat o prevalență ridicată a P. aeruginosa (42,8%). MDR P. aeruginosa a corespuns la 96% din totalul izolatelor și 87% a fost XDR. Prevalența ridicată a P. aeruginosa rezistentă la colistină (21.3%) a fost detectat, care poate fi rezultatul unor măsuri insuficiente de control al infecțiilor și al utilizării necorespunzătoare a antibioticelor bactericide în unitățile de terapie intensivă ale spitalelor din țara noastră. În plus, colistina este utilizată pe scară largă în țările noastre în promovarea creșterii animalelor producătoare de alimente, în special în industria păsărilor de curte, în timp ce carbapenemele sunt utilizate în cazuri de urgență.15 deci, carbapenemele au arătat o activitate observabilă împotriva organismelor testate în comparație cu colistina. Pe de altă parte, rezultatele noastre au fost observate a fi mai mari decât cele raportate de Liassine et al25 care au raportat că un izolat de 300 de izolate din diferite specii bacteriene a fost identificat ca p aeruginosa care prezintă rezistență la colistină și adăpostind gena mcr-1.

testul combinat de difuzie a discului (CDT) și alterarea potențialului zeta indus de EDTA au fost utilizate ca metode fenotipice41,42 pentru detectarea genei mcr-1. Rezultatele au arătat că nicio izolată nu a fost pozitivă pentru mcr-2 și 8 (50%) izolate de izolate rezistente la colistină au fost mcr-1 pozitive, în timp ce 2 izolate din aceste izolate au prezentat RZP > 2, 5. Din 8 izolate mcr-1 pozitive, 6 izolate au fost pozitive pentru CDT, în timp ce două mcr-1 pozitive (tulpina nr. P15 și P16) au fost negative pentru CDT, care se poate datora coproducției unui mecanism suplimentar de rezistență la colistină care interferează cu efectul EDTA.21 ca, sa constatat că izola nr. P16 (mcr-1 pozitiv și CDT negativ) a fost pozitiv pentru eflux.21,43-45 în plus, izolatele rezistente la colistină care au fost negative pentru mcr-1 pot avea mutații datorită utilizării pe termen lung a antimicrobienelor.

mai mult, am testat izolatele rezistente la colistină pentru prezența mecanismelor de eflux utilizând CCCP (un inhibitor al pompei de eflux) și diferența dintre proteinele membranei exterioare și profilul LPS SDS-PAGE între izolatele sensibile și rezistente. Rezultatele noastre au relevat prezența mecanismului de eflux între 3 izolate, în timp ce unul dintre ele a fost mcr-1 pozitiv. Profilul proteic al membranei exterioare a arătat o bandă cu o greutate moleculară de 21 KDa în izolatele rezistente P1 (mcr-1 pozitiv) și P12 (mcr-1 negativ rezistent la colistină). În plus, s-a constatat că tulpinile negative mcr-1 rezistente la colistină nu au prezentat un model de benzi LPS (repetări ale antigenului O sau miez LPS), dar izolatele mcr-1 pozitive (P1) și sensibile la colistină au prezentat un nucleu LPS, dar un model diferit de repetări ale antigenului O. Machado et al20 a studiat rolul pompei de eflux în rezistența la colistină în Acinetobacter baumanni și a constatat că activitatea de eflux contribuie la heterorezistența A. baumanni în absența mutației. Marjani et al43 au arătat că 22,5% din P. aeruginosa izolate au fost rezistente la colistină, ceea ce este aproape de rezultatele noastre și mai mult de 50% din izolatele rezistente la colistină au fost pozitive pentru pompele de eflux.

deși mecanismul exact al uciderii bacteriene de către colistină sau polimixine nu este clar cunoscut, se știe că legarea lor la peptidele încărcate pozitiv și lipidul a încărcat negativ este un pas critic. Deci, am testat profilul LPS SDS-PAGE și sa observat o diferență semnificativă între tulpinile testate. Într-un studiu realizat de Moffatt și colab., 46 S-a raportat că pierderea LPS a dus la apariția A. baumanii rezistent la colistină care apare datorită inactivării genelor de biosinteză a lipidelor (lpxA, lpxC sau lpxD). Modelele de proteine ale membranei exterioare au arătat prezența unei benzi cu greutate moleculară de 21 KDa în izolatele rezistente la colistină, care pot corespunde OprH în conformitate cu cea raportată de Nicas și Hancock47 care au raportat că expresia OprH joacă un rol în rezistența Pseudomonas la polimixine și EDTA, deoarece OprH înlocuiește cationii bivalenți din membrana exterioară, rezultând blocarea absorbției policationice a antibioticelor. Constatarea anterioară poate explica de ce tulpina nr. P1 (mcr-1 pozitiv) a fost negativ pentru CDT.

concluzii

studiul de față a arătat o prevalență ridicată a MDR și XDR P. aeruginosa care prezintă rezistență la colistină în rândul pacienților internați la UTI care suferă de diferite infecții. De asemenea, a arătat prezența diferitelor mecanisme care pot duce la rezistența la colistină. Acest lucru indică necesitatea urgentă de a schimba strategiile de tratament cu antibiotice atât pentru oameni, cât și pentru animale.