Anatomie & Physiologie

Die vorliegende Studie wurde durchgeführt, wobei Regeln und Vorschriften für die Pflege und Verwendung von Labortieren des Tierhauses und das entsprechende Experiment von der Zentralen Tierethikkommission genehmigt wurden. 25 weibliche Schweizer Albinomäuse mit einem Durchschnittsalter von 45 Tagen und einem Gewicht von 25 bis 35 g wurden zufällig aus dem Tierhaus aus verschiedenen Zuchtkolonien ausgewählt. Diese weiblichen nicht schwangeren Erwachsenen wurden absichtlich von männlichen Mäusen derselben Sorte mit dem Ziel kopuliert, 10 Welpen einer weiteren Generation zu beschaffen. In dem Kunststoff-Polycarbonat-Käfig mit Edelstahl-Belägen wurden einzelne starke und kräftige heterozygote Männchen mit einzelnen Weibchen in einer Atmosphäre platziert, die kontinuierlich bei 20-25C und 55 ± 5% Luftfeuchtigkeit, 12 Stunden Hell- und Dunkelzyklus gehalten wurde. Die weiblichen Mäuse wurden auf vaginalen Kreuzpfropfen untersucht, und das Vorhandensein eines gut sichtbaren Pfropfens wurde als festgestellte Schwangerschaft markiert und dem Tag Null der Schwangerschaft zugewiesen. Am Tag 7, 8 und 9 der Trächtigkeit wurden die Weibchen durch abdominale Palpation auf Schwangerschaft untersucht.

Charakterisierung von AgNps

Silbernanopartikel aus Forschungsinformationsquellen wurden auf ihre Primärgröße durch TEM und auf ihre Agglomeration in Zellmedium durch Photonenkreuzkorrelationsspektroskopie (PCCS) und ultraviolett–sichtbare (UV-Vis) Spektroskopie, dynamische Lichtstreuung und Zetapotential bewertet. Es wurden repräsentative TEM-Bilder der AgNps gezeigt. Die TEM-Bilder der PVP-beschichteten AgNps dispergiert und suspendiert in 1.5M NaCl bestätigten die von den Herstellern angegebene Primärpartikelgröße. Die unbeschichteten Silbernanopartikel fanden heterogene Verteilung innerhalb der Strecke 50 bis 100 Nanometer, die meisten von ihnen, die herum 71nm sind.

Im Fall von suspendierten Pulver-AgNps zeigten TEM-Bilder, dass in einer wässrigen Umgebung die Silbernanopartikel verklumpen und große Aggregate bilden, von denen viele größer als 50 nm sind. Dieses Ergebnis stimmt mit den Ergebnissen der hydrodynamischen Größenverteilung überein, die mit der dynamischen Lichtstreumethode (Zeta Sizer) erhalten wurden. EDX-Analysen bestätigten, dass nur elementares Silber sowohl in kolloidalen als auch in trockenen pulverförmigen AgNps vorlag. Gemäß den ICP-AES-Ergebnissen betrugen die Konzentrationen von Ag-Ionen in den säureverdauten Beständen kolloidaler und suspendierter Pulver-AgNps 1908,1 bzw. 447,2 mgl-1. Auch die Ergebnisse des XRD-Musters bestätigen die Kristallinität von pulverförmigen AgNps und das Vorhandensein von elementarem kristallinem Silber, auch andere Phasen, außer metallischem Silber, waren in der Probe nicht vorhanden. Darüber hinaus zeigten die RFA-Ergebnisse, dass die Reinheit von pulverförmigen AgNps 97,86% betrug.

Exposition von kolloidaler AgNps-Lösung durch wiederholte orale Sonden

Trächtige Mäuse wurden doppelt mit normaler Kochsalzlösung (Scheinkontrolle) als Vehikel verabreicht und in einer Dosis von 5, 10, 15, 20 mg / kg Körpergewicht durch wiederholte orale Sonden vom 7. bis 12. Scheinkontrolltiere werden in den Versuch mit behandelten Tieren und unbehandelten Tieren einbezogen.

Dissektion und Ausweidung

Am GD 18 wurden das rechte und das linke Hörner der Gebärmutter der schwangeren Mutter nach ventraler Laparotomie unter tiefer Ether / Chloroform-Anästhesie exteriorisiert und 250 frisch gesammelte Dämme durch Dissektion wurden mit Leitungswasser auf einer Petrischale gewaschen, um Blut und Fruchtwasser zu entfernen, und durch Filterpapier getrocknet und in 95% igem Alkohol für 48 Stunden dehydriert, schließlich 1% KOH für Konsistenzausweidung und Alizarin-Färbeprotokoll zur korrekten Visualisierung von normalen oder abnormalen Knochen.13

Methode (Beurteilung der Skelettdysmorphologie durch die Technik der Ausweidung und Alizarinfärbung) -:

Die Studie zur Skelettdysmorphologie wurde durch die Technik der Ausweidung und Alizarinfärbung durchgeführt. Alle Proben (50 Jungtiere) jeder Gruppe wurden 48 Stunden lang in 95% igem Alkohol (rektifizierter Spiritus) dehydratisiert, dann entfernt und mit fließendem Leitungswasser gewaschen und dann mit 1% iger KOH-Lösung (KOH 1 g + 100 ml d.w.) ausgeweidet. Nach der ventralen Laparotomie werden lebenswichtige Organe entfernt. Die Proben wurden mindestens 2 bis 4 Tage lang gründlich in reichlich 1% ige Kaliumhydroxid (KOH) -Lösung getaucht, bis Fleisch, Sehnen, Muskeln und Eingeweide transparent & klar waren und sich auflösten, gefolgt von kristallklarer Sichtbarkeit der Knochen und Knorpel. Jeden Tag wurde die Lösung gewechselt, wenn sie sich verfärbte und verschwendete.

Die kristallklare Knochen- und Knorpel-sichtbare Probe wurde dann in dieselbe 1% ige KOH gegeben und dann 6 bis 8 Tropfen 1% Alizarin-Färbung zugegeben, um sie tief purpurrot zu färben. Die Lösung wurde einige Male pro Stunde leicht geschüttelt. Dann wurde das gleiche Verfahren für weitere 2-3 fortgesetzttage, um Knochen und Knorpeln eine tiefe purpurrote Farbe zu verleihen. Zur Entfernung einer Überfärbung und Glättung der Proben werden diese dann durch 40%, 80% (40 ml Glycerin + 60 ml destilliertes Wasser, 80 ml Glycerin + 20 ml destilliertes Wasser) und 1 bis 2 Kristallthymol zur Langzeitkonservierung gegeben schließlich in 100% Glycerin gehalten, diente zur Fotografie & leistungsstarke Handlinsenbeobachtung.

Insgesamt wurden 250 Föten von 25 Müttern aus 1, 2, 3, 4 und 5 Gruppen gesammelt, von denen alle Proben skelettdysmorphologischen Experimenten ausgesetzt waren. 60 Föten wurden Resorption beobachtet.

Statistik

Der Prozentsatz der Skelettfehlbildungen wurde aus jeder Gruppe bewertet und nach der Anzahl der an der Dysmorphologie beteiligten Knochen bewertet. Multi ANOVA und Deskriptive Statistik (Post-hoc-Analyse) Test für diesen Zweck verwendet.

Beobachtung und Befunde

Der Prozentsatz der Skelettdysmorphologie war bei 15 mg AgNps und 20 mg AgNps / kg Körpergewicht höher und am höchsten behandelte Gruppenwelpen (Tabelle 1).

Die niedrigere Dosis AgNps behandelten Gruppen (0,5 & 1 mg / kg Körpergewicht.) wurden sehr minimale Prozentsätze von Skelettanomalien beobachtet, so dass diese behandelten Gruppen fast als Kontrollgruppenföten betrachtet wurden (Abbildung 1).

Abbildung 1 Kontrollfötus Alizarin in dorsaler Ansicht (A) und lateraler Ansicht (B).

Einer der mit 5 mg AgNps / kg Körpergewicht behandelten Gruppenwelpen zeigte ein unossifiziertes 5. Sternalsegment vom Sternalstab und ein unossifiziertes Manumbriumsegment, das als Sternalspalte diagnostiziert wird. Andere Föten zeigten eine Hypoplasie des Oberkiefers und des Unterkiefers, einen nicht verknöcherten Frontal-, Parietal- und Nasenknochen, ein Versagen der Fusion des hinteren Segments des Hüftknochens, 10,11 und 12. Das Fehlen des mittleren Schafts der 6. bis 12. Rippe zusammen mit der Vergrößerung des Zwischenraums zwischen aufeinanderfolgenden Rippen wurde bei mehreren Feten aus verschiedenen Gruppen bezeichnet und als vergrößerter Webraum diagnostiziert, das Fehlen eines Dornfortsatzes & ist bei ganzen Brustwirbelsegmenten zu sehen, der in 1% der Fälle von dieser behandelten Gruppe als Neuralrohrdefekt vom nahen Typ diagnostiziert wird Föten. Der in dieser Gruppe berechnete Prozentsatz der Skelettdysmorphologie betrug 32% (Abbildung 2).

Abbildung 2 5 mg AgNps behandelte Gruppe: Alizarin-Färbung dorsale Ansicht (A) und (B), laterale Ansicht (C) ventrale Ansicht (D) und dorsale Ansicht (E)

Die mit 10 mg AgNps behandelten Gruppenföten zeigten eine Skelettdysmorphologie in Form des Fehlens von Lenden- und Sakralwirbeln, des Fehlens von Hüftknochen, stark degenerierten Rippen ohne Knorpel, des Frontal- und Parietalknochens, die unossifiziert und unentwickelt waren, Skoliose wird in der Brust- und Lendengegend beobachtet Bei einem der Föten wird das Fehlen von Halswirbeln beobachtet, eine Hypoplasie des Oberkiefers, die und koronale Nähte sind ebenfalls zu sehen. Unentwickelte Knochen der unteren Extremitäten sind auf beiden Seiten eines Fötus zu sehen. Der in dieser Gruppe berechnete Prozentsatz der Skelettdysmorphologie betrug 44% (Abbildung 3).

Abbildung 3 10 mg AgNps behandelte Gruppe: Alizarin-Färbung dorsale Ansicht (A, B).

Unter 15 mg AgNps behandelten Gruppe 8 Welpen wurden beobachtet, Fehlen von Halswirbeln mit Abwesenheit von 12. Rippe und Rest der Wirbel wurden beobachtet, unentwickelten Dornfortsatz, Mittelfußspalte ist auch auf der dorsalen Ansicht des Fußes eines der Fötus gesehen, unossified Hüftknochen auf ventrale Ansicht mit Abwesenheit von Segment & Fibrose ist auch zu sehen, unossified Schläfenbein, das auf Seitenansicht des Schädels fibrosiert gefunden wird, Fehlen von proximalen Segment des innominate Knochens, Wirbelsäule Anomalie wurde mit rudimentären 6. und 9. Rippe und Abwesenheit von 10.,11. und 12. wird beobachtet rippen in einem des Fötus, unossifizierter Parietalknochen wurde ebenfalls gesehen, Anenzephalie mit Skoliosewirbeln wurde in L1-L5 in einem des Fötus gesehen, unossifizierter Hüftknochen wurde gesehen, unossifizierte Schulterblätter beider Seiten wurden auf der dorsalen Ansicht eines des Fötus gesehen, Abwesenheit von Knorpel wurde von der 6. bis 12. Der in dieser Gruppe berechnete Prozentsatz der Skelettdysmorphologie betrug 60% (Abbildung 4).

Abbildung 4 15 mg AgNps behandelte Gruppe: Alizarin-Färbung dorsale Ansicht (A, B) und ventrale Ansicht (C)

Die 20 mg/kg b.w. Feten der mit AgNps behandelten Gruppe wiesen den höchsten Prozentsatz an Skelettdysmorphologie auf (76%). Skoliose wurde in der Lendengegend in einem der Fötus gesehen, ein Fötus zeigte unossifizierten Okzipitalknochen, unossifizierte Schulterblätter und Hüftknochen, große Fibrose wird in Oberkiefer, Frontal- und Parietalknochen beobachtet, das gleiche wird auch im zweiten bis sechsten Segment des Brustbeins beobachtet., Spalte wird im Sprunggelenk beobachtet, erhöhter Raum wird zwischen der 1. und 2. Rippe und der 5. bis 8. Rippe der linken Seite eines Fötus beobachtet, auch Spalte wird im Symphisis-Schambeingelenk eines Fötus beobachtet , unossifizierte Unterkieferhypoplasie, Abwesenheit von Dornfortsatz mit wellenförmigen Rippen wird ebenfalls beobachtet, bei einem Fötus beobachteten wir eine vollständige Fusion des 2. bis 8. Halswirbels, die sich deutlich vom Rest des 1. Halswirbels unterscheidet. Wir beobachteten auch eine leichte Skoliose und einen nicht verknöcherten Okzipital- und Parietalknochen sowie das Fehlen von Schulterblättern auf der rechten Seite eines der Fötus, hypoplastische Wirbel sind ebenfalls zu sehen (Abbildung 5).

Abbildung 5 20 mg AgNps behandelte Gruppe: Alizarin-Färbung dorsale Ansicht.