Cytokeratin 5/6 und cytokeratin 8/18 expression in triple negative breast cancers: clinicopathologic significance in South-Asian population

Insgesamt 150 Fälle von TNBC wurden aus Aufzeichnungen der Pathologie Abteilung Archive ausgewählt. Die chirurgischen Proben umfassten modifizierte radikale Mastektomien, einfache Mastektomien und breite lokale Exzisionen mit Sentinel-Lymphknotendissektion. Alle Patienten wurden von Januar 2008 bis Dezember 2013 über einen Zeitraum von 6 Jahren im Liaquat National Hospital in Karachi operiert. Die Studie wurde vom Research and Ethical Review Committee der Institution genehmigt und informierte Zustimmung wurde von allen Patienten zum Zeitpunkt der Operation genommen. Hämatoxylin- und Eosin-gefärbte Objektträger und Paraffinblöcke von Fällen wurden entnommen und gegebenenfalls neue Abschnitte geschnitten. Objektträger aller Fälle wurden von zwei leitenden Histopathologen überprüft und pathologische Merkmale wie histologischer Typ, Tumorgrad, T-Stadium, N-Stadium, lymphovaskuläre Invasion, Nekrose, Fibrose, lymphozytäre Infiltration (tumorinfiltrierende Lymphozyten), Vorhandensein einer Insitu-Komponente, Pagetoid-Ausbreitung und dermale lymphatische Invasion wurden bewertet. Klinische Aufzeichnungen aller Patienten wurden auch aus institutionellen Aufzeichnungen überprüft, um das Alter des Patienten, die Vorgeschichte der Bestrahlung und Chemotherapie sowie den Rezidivstatus zu bewerten. Darüber hinaus wurden repräsentative Blöcke jedes Falles ausgewählt und ER, PR und Her2neu Immunhistochemie wurden durchgeführt, um den dreifach negativen Status zu bestätigen.

ER, PR, Her2neu und Ki67 IHC wurden unter Verwendung von DAKO-Antikörpern wie unter, mit EnVision ™ FLEX, DAKO-Kit mit hohem pH-Wert gemäß Herstellerprotokoll durchgeführt.

1. FLEX monoklonaler Kaninchen-Anti-Human-Östrogen-Rezeptor Alpha, Klon EP1.

2. FLEX monoklonale Maus Anti-Human-Progesteron-Rezeptor-Klon PgR 636.

3. Polyklonales Kaninchen-Anti-Human-c-ErbB-2-Onkoprotein.

4. FLEX monoklonale Maus Anti-Human Ki67 Antigen Klon MIB-1.

Die Kernfärbung von ER und PR in > 1% der Krebszellen wurde als positiv angesehen. Für her2neu wurden die Fälle gemäß den CAP-Richtlinien mit 1+, 2+ und 3+ bewertet. Für zweideutige Fälle (2+) wurde FISH unter Verwendung des Vysion Her2neu-Sondenkits gemäß den Protokollen des Herstellers durchgeführt. Die Ergebnisse wurden als Verhältnis von her2neu-Signalen im Vergleich zu CEP17-Signalen gemäß ASCO / CAP-Richtlinien ausgedrückt.

Die Ki67-Immunfärbung wurde als kontinuierliche Variablen basierend auf dem Anteil der positiv gefärbten Krebszellen aufgezeichnet. Darüber hinaus wurden die Fälle auf der Grundlage des Ki67-Index in die Kategorien < 15, 16-24, 25-44 und > 44% ki67 Index eingeteilt.

CK5/6 IHC wurde unter Verwendung von FLEX monoklonalem Maus-Anti-Human-Zytokeratin 5/6, Klon D5/16 B4 nach DAKO Envision-Methode gemäß Herstellerprotokoll durchgeführt. Mittlere bis starke zytoplasmatische und membranöse Färbung in mehr als 10% Zellen wurde als positiv angesehen. Schwache bis mittlere Färbung in < 10% wurde als fokal positiv angesehen, während keine Färbung als negativ angesehen wurde (Zusätzliche Datei 1: Abbildung S1).

CK 8/8 IHC wurde mit monoklonalem Maus-Anti-Human-Cytokeratin 5/6, Klon D5/16 B4, nach der DAKO Envision-Methode durchgeführt. Eine mittlere bis starke zytoplasmatische und membranöse Färbung in mehr als 50% der Zellen wurde als positiv angesehen. Schwache bis intermediäre Färbung (zytoplasmatisch, mit Verlust der Membranreaktivität) in 10-50% wurde als fokal positiv angesehen, während keine Färbung oder schwache Färbung in < 10% als negativ angesehen wurde (Zusätzliche Datei 1: Abbildung S1).

Rezidivstatus und Follow-up wurden durch Überprüfung der Krankenakte des Krankenhauses bewertet. Das Gesamtüberleben wurde als Zeit von der chirurgischen Exzision bis zum Tod oder der letzten Nachsorge und das krankheitsfreie Überleben als Zeit zwischen der chirurgischen Exzision und dem Lokalrezidiv oder der Fernmetastasierung, dem Tod oder der letzten Nachsorge definiert.

Statistical package for social sciences (SPSS 21) wurde für die Datenerfassung und -analyse verwendet. Mittelwert und Standardabweichung wurden für quantitative Variablen berechnet. Häufigkeit und Prozentsatz wurden für qualitative Variablen berechnet. Chi-Quadrat wurde angewendet, um die Assoziation zu bestimmen. Student t-Test oder Mann Whitney-Test wurden angewendet, um den Mittelwertunterschied zwischen den Gruppen zu vergleichen. P-Wert ≤ 0,05 als signifikant. Überlebenskurven wurden unter Verwendung der Kaplan–Meier-Methode aufgetragen und die Signifikanz der Differenz zwischen Überlebenskurven wurden unter Verwendung des Log-Rank-Verhältnisses bestimmt. P-Wert ≤ 0.05 wurde als signifikant angesehen.

Ergebnisse

Das Durchschnittsalter der an der Studie beteiligten Patienten betrug 48,9 Jahre und die häufigste Altersgruppe war 31-50 Jahre. Die meisten Patienten zeigten im Stadium T2 einen hohen mittleren ki67-Index, d. H. 46,9%. 42,7% der Fälle hatten Knotenmetastasen. Obwohl 84% der Fälle von konventionellem invasivem Duktalkarzinom, NST, waren; Ein signifikanter Anteil der Fälle war jedoch metaplastisch Histologie (9,3%). Die meisten Fälle waren hochgradig (86,7% Grad III). Die meisten Tumoren zeigen lymphozytäre Infiltration und Nekrose. Den meisten Tumoren fehlt die Insitu-Komponente (61%). In 17,8% der Fälle wurde ein Lokalrezidiv oder eine späte Fernmetastasierung festgestellt (Tabelle 1).

Positive (> 10%) CK5 / 6-Expression wurde in 8% (12 Fälle) von TNBC festgestellt, während 2,4% (4 Fälle) fokal positiv (< 10%) und 89,3% (134) waren negativ mit CK5 / 6. Ein vollständiger Verlust der CK8 / 18-Expression wurde in 4,7% (7 Fälle) beobachtet, während 32,7% (49 Fälle) einen fokalen Verlust von CK8 / 18 und 62,7% (94 Fälle) eine intakte normale Expression von CK8 / 18 zeigten. Es wurde kein signifikanter Zusammenhang zwischen CK5/6 und CK8/18 mit verschiedenen klinisch-pathologischen Parametern beobachtet (Tabellen 2 und 3). Ebenso wurde keine signifikante Assoziation von CK 5/6 und CK8 / 18 mit dem Rezidivstatus der Patienten festgestellt (Zusätzliche Datei 2: Abbildung S2).

Diskussion

In der vorliegenden Studie untersuchten wir die Expression eines basalen (CK5 / 6) und eines luminalen Markers (CK8 / 18) in TNBC in unserer Population und fanden heraus, dass; 8 und 2,7% der TNBC zeigten eine positive und fokale positive Expression von CK5 / 6 bzw. 4,7 und 32.7% der TNBC zeigten einen vollständigen Verlust bzw. einen fokalen Verlust der CK 8/18-Expression. In allen Fällen, in denen ein fokaler Verlust CK8 / 18 festgestellt wurde, kam es zu einem Verlust der Membranreaktivität, während die zytoplasmatische Färbung in wenigen Zellen erhalten blieb. Es wurde jedoch kein signifikanter Zusammenhang zwischen diesen abnormalen Expressionsmustern von Zytokeratinen mit verschiedenen klinisch-pathologischen und prognostischen Parametern von TNBC in unserer Population beobachtet. Brustkrebs ist eine der häufigsten malignen Erkrankungen in der südasiatischen Bevölkerung, insbesondere im jungen Alter .

Das Genexpressionsprofil definiert basalen Brustkrebs als solche, die basale Cluster von Genen aufweisen, die EGFR, basales Zytokeratin 5/6, C–Kit, Proliferationscluster und geringe Expression von Her2neu- und Hormonrezeptor-verwandten Genen umfassen . Basaler Brustkrebs ist jedoch keine Einheit und umfasst mehrere Subtypen, darunter zwei basalähnliche Subtypen (BL1 und BL2), mesenchymale, mesenchymale stammähnliche, immunmodulatorische und luminale Androgensubtypen . Darüber hinaus wurden auch interferonreiche und claudin-niedrige Subtypen definiert . Die Subtypisierung von basalem Brustkrebs wird von ASCO / CAP nicht empfohlen. Die CK 5/6-Expression variiert bei TNBC zwischen 24 und 72%, wie in früheren Studien berichtet . Andere Forscher haben auch die prognostische Signifikanz von CK 5/6 bei knotennegativem Brustkrebs vorgeschlagen . Nielson et al. schlug vor, dass CK5 / 6-positiver Brustkrebs eine schlechtere Prognose hat, unabhängig von Tumorgrad, T-Stadium und HIV / Her2neu-Status . In ähnlicher Weise wurde in einer anderen Studie vorgeschlagen, dass CK5 / 6 ein Marker für ein kürzeres krankheitsfreies Überleben ist, unabhängig von anderen prognostischen Faktoren von Brustkrebs . Inanc et al. berichtet 50.5% Expression von CK5 / 6 mit positiver Korrelation von CK5 / 6 TNBC mit Knotenmetastasen und Tumorgröße . Im Gegensatz zu diesen Studien fanden wir jedoch eine geringe Expression der CK5 / 6-Expression in TNBC in unserer untersuchten Population, was ein anderes genomisches Profil von TNBC in unserer Population darstellen könnte, das in weiteren Studien untersucht werden muss. Die prognostische Rolle von CK5 / 6 wurde bei anderen Krebsarten des Körpers vorgeschlagen .

CK8 / 18 ist ein luminales Zytokeratin, das hauptsächlich im Brustepithel in einem membranösen und zytoplasmatischen Muster exprimiert wird. Cimpean et al. definiert diese verschiedenen Muster von CK8 / 18 bei Brustkrebs; diffuse zytoplasmatische, membranöse und kombinierte zytoplasmatische und membranöse .Einige Forscher haben vorgeschlagen, dass der Verlust der CK8 / 18-Expression / niedriger CK8 / 18 mit einer schlechteren Prognose und einem hohen Metastasierungsrisiko verbunden ist . Wir fanden jedoch keine prognostische Signifikanz des Verlusts der CK8 / 18-Expression mit verschiedenen prognostischen Faktoren und Rezidiven bei TNBC.

Wir fanden heraus, dass 32,7% der TNBC fokalen Verlust der Expression CK8 / 18 zeigen. In all diesen Fällen kam es zu einem Verlust der Membranreaktivität von CK8 / 18, während die zytoplasmatische Färbung in wenigen Zellen erhalten blieb. Aiad et al. in einer Studie mit 70 Fällen von Brustkrebs fand abnorme Expression von CK8 / 18 (Zytoplasma) in 70% der ägyptischen Brustkrebs, die eine Menge Heterogenität in der Zytokeratin-Expression von Brustkrebs in verschiedenen Teilen der Welt vorschlagen .