Embryoprojektet Encyclopedia

Golgi-farvningsteknikken, også kaldet sortreaktion efter pletens farve, blev udviklet i 1870 ‘erne og1880’ erne i Italien for at gøre hjerneceller (neuroner) synlige undermikroskop. Camillo Golgi udviklede teknikken under arbejdet mednervevæv, som krævede Golgi at undersøge cellestrukturen under mikroskopet.Golgi forbedrede eksisterende farvemetoder, hvilket gjorde det muligt for forskere at se hele neuroner for første gang og ændre den måde, folk diskuterede udviklingen og sammensætningen af hjernens celler på. I det tyve knytnæve århundrede fortsatte Golgis farvningsmetode med at informere forskning om nervesystemet,især med hensyn til embryonal udvikling.

Golgi begyndte at offentliggøre forskning om nervesystemet og dets cellulærestruktur mellem 1870 og 1872, mens han arbejdede i laboratoriet for Giulio Bisotos ved Institut for generel Patologipå universitetet i Pavia i Pavia, Italien. Derefter blev Golgicheflæge ved Pio Luogo degli Incurabili (Hospital for theChronically Sick) i Abbiategrasso, Italien. Han byggede et laboratorium ikøkkenet på hospitalet, hvor han udviklede en ny teknik tilblev neurale væv. Farvningsmetoden for hans tidinvolveret farvning af et organisk væv med rød carmin eller sorthematoksylin og udsætte det for et reagens, som kaliumdichromatorchrominsyre, der hærdede de enkelte neuroner. Forskere isolerede derefter individuelle celler ved at adskille dem under et mikroskopmed nåle. Fordi neuroner har en anden form end andreceller i kroppen, forskere brød ofte fremskrivningerne ud af cellen, når de forsøgte at adskille dem. Disse fremskrivninger inkluderetvævlignende dendritter, der modtager neurale impulser og videresender dem til cellelegemet, og den lange akson på den anden side af cellelegemet, der videresender disse impulser.

Golgis tidlige forsøg på at forbedre farvning involverede infusion af cellermed forskellige metaller for at se hele neuroner og andre slags væv større detaljer. Efter at have eksperimenteret med at udsætte celler for guld ogkviksølv, Golgi brugte sølvnitrat. Sølvnitratpletten muliggjorde ham for at se neuronerne i deres helhed og gøre dem sorte moden lysegul baggrund. Den sorte farve på de farvede neuroner førte ham til at navngive sin teknik la reasione nera (blackreaction). Farvningsprocessen farvede fem til ti procent af cellsper-prøven, hvilket gjorde det muligt for Golgi at se individuelle cellestrukturer midt i masser af nervevæv.

mekanismerne i Golgi-farvningsteknikken lignede demaf hans samtidige. For det første at hærde det bløde neurale væv nedsænkede Golgi prøver i op til femogfyrre dage i en 2,5 procentkaliumdichromatopløsning. Dernæst gennemvædet han prøverne i en 0.5til 1 procent sølvnitratopløsning til forskellige mængder tidat farve nogle af cellerne sorte. Golgi dehydrerede derefter prøvernemed alkohol og skåret dem med 100 mikron intervaller, ækvivalentaf tykkelsen af et stykke papir, bred nok til at holde en neuronintakt. Golgi skyllede derefter vævet i terpentin og fastgjorde dettil et dias med klar tyggegummi damar for at bevare det. På det tidspunkt så han en prøve under et mikroskop.

Golgi offentliggjorde resultaterne af sin farvningsprocedure i en 1873papir med titlen “Sulla Struttura della Sostans Grigia del Cervello”(på strukturen af det grå hjernemateriale). I Tyskland Frans Bolloffentliggjorde noter af Golgi ‘s arbejde i tyske tidsskrifter, som spredtesyheder om Golgi’ s arbejde. Golgi fortsatte med at bruge sin farvningsteknikat undersøge neurale væv og akkumulerede senere sit fund insula Fina Anatomia degli Organi Centralili del Sistema Nervoso(på den Fine anatomi i nervesystemets centrale organer)udgivet i 1885. Det år brugte Eugen Bleuler, en psykiater i landet, Golgis farvningsmetode og præsenterede prøver afkaninens hjernebark til Medical Society of C.

i 1880 ‘ erne studerede fysiologen Albert von K. Larlliker udviklingen af hjernen, neurosensoriske veje ogindre organudvikling hos pattedyr ved hjælp af Golgi-farvningsteknikken. Han lærte teknikken under instruktion af Golgii 1887, og han udgav “Ueber Golgi’ s Untersuchungen, den FeinerenBau des Centralen Nervensystems Betreffend” (om Golgi ‘ s undersøgelser vedrørende den finere struktur i centralnervesystemet) senere samme år. K larlliker roste Golgis farvningsteknik, hvilket førte mereforskere til at vedtage det.

i 1887 ændrede Santiago Ram Kurstn y Cajal i Spanien teknikken ved at indføre sølvnitrat til vævet i to kortere blødgøringer snarere end en lang blødgøring. Denne ændring forbedrede farven ogdetaljer af pletten. Forskere som Golgi og RAM Kurstn y Cajal brugteresultater fra sådanne farvningsundersøgelser for at hjælpe med at udvikle neurondoktrinet, som sagde, at neuroner var individuelle celler, dertransmitterede elektriske impulser til og fra hinanden. Denne teoriomdannede teorier om nervesystemets struktur ogfunktionalitet. Forskere bekræftetteorien ved at bruge Golgi-farvningsteknikken til at vise hullerne eller synapserne mellem neuroner. Golgi og RAM Kurtn y Cajal deledenobelprisen i fysiologi eller medicin til i 1906.

i 1917 tilpassede P-Kurto Del R-Kurto Hortega yderligere Golgi ‘ s metode ved at fastgøre væv med formalin, chloralhydrat ogkaliumchromat, hvilket reducerede den tid, der var nødvendig for at afslutte farvningen. Ind i det enogtyvende århundrede brugte forskere delr kurto Hortegas metode til at farve ikke-neuronale hjerneceller som neurogliaog celler i cerebellum. Efter en stilstand i popularitet mellemverdenskrigene genvandt Golgi-farvningsteknikken popularitet i slutningen af 1930 ‘ erne med introduktionen af elektronmikroskopet.

forskere brugte Golgis farvningsteknik til bedre at forklaredannelse af neuroner, hjernen og sensoriske veje. Golgistaining hjalp også forskere med at klassificere organeller i celler,herunder muskelcelleorganeller, der opbevarer og transporterer calcium, kaldet det sarkoplasmatiske retikulum, og de proteinmodificerende organeller i celler kaldet Golgi-apparatet. Golgi-farvningsteknikken forblev en primær metode til farvningind i det enogtyvende århundrede.